一种石上柏多糖提取物制备方法及其应用

文档序号:8210916阅读:657来源:国知局
一种石上柏多糖提取物制备方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于药理学领域,具体涉及一种石上柏多糖提取物制备方法及其应用。
【背景技术】
[0002] 石上柏(t/oeofer/eiflii Hieron)是常用中药材,为蕨类植物门 (Pteridophyta)卷柏科(卷柏属(植物的干燥全草。其又 名深绿卷柏、大叶菜、水柏枝等,主产于云南、贵州、广西、浙江、福建、台湾等地,其性味甘、 微苦、涩、凉。在传统中药中,共有六个卷柏属植物有收入典籍,其中石上柏是常用于治疗肿 瘤的药材之一。传统中医认为石上柏具有"扶正祛邪"的双重作用,以复方或单方用于肿瘤 的治疗历史悠久。到近代,石上柏的单方制剂中成药石上柏片(石上柏醇提物为主要成分) 已经用于咽喉癌、绒毛膜上皮癌、肺癌及消化道癌症的治疗,具有较好的抗癌作用。
[0003] 现代化学药理研究表明,石上柏主要含有多糖类,黄酮类,生物碱类等活性物质, 其中多糖类成分具有较好的体外抑制肿瘤,增强或恢复免疫功能等作用。目前石上柏多糖 的研究少见文献及专利报道。而且,市面上也未见关于石上柏多糖的药物或药物组合物的 出现。

【发明内容】

[0004] 本发明的目的在于提供一种石上柏多糖提取物制备方法及其应用,本发明的再一 目的是提供一种含有以上石上柏多糖提取物的药物。还提供了含有该石上柏多糖提取物的 制剂及该提取物的用途。
[0005] 为实现上述目的,本发明采用如下技术方案: 本发明的石上柏多糖提取物中主要含有多糖。其中,以重量百分比计,多糖的含量为 90%以上,优选的,多糖的含量为95%_98%。
[0006] 本发明所述石上柏多糖的制备方法,包括以下步骤:(1)脱脂:取石上柏干燥全 草,用4-10倍量有机溶剂浸泡后回流1-3次,过滤,挥干有机溶剂得药渣;(2)提取:上 述药渣加水浸泡后,水浴提取1-3次,每次1-3小时,过滤,浓缩滤液至每ml相当于含 生药0. 5-2. 0g; (3)醇沉:向上述浓缩液中加入3-8倍体积乙醇,冰浴放置,过滤,沉淀 冷冻干燥后得多糖提取物粗品I; (4)除蛋白:将上述多糖提取物粗品I溶于水中配制 成0.01-0.lg/ml的粗品I溶液,加入1 一 4倍体积氯仿一正丁醇(V/V= 4:1)混合溶液, 搅拌后分层,上层重复操作4-8次后,加入3-8倍体积乙醇,冰浴放置,过滤,沉淀冷冻干 燥,得多糖提取物粗品II;(5)除单糖及寡糖:将上述多糖提取物粗品II溶于水中配制成 0. 01-0.lg/ml的粗品II溶液,用截止分子量:8000-14000的透析膜透析2天后,取出透析 袋内液体加入3-8倍体积乙醇,冰浴放置,过滤,沉淀冷冻干燥后得多糖提取物粗品III;(6) 凝胶柱纯化:将上述多糖提取物粗品III用凝胶色谱柱纯化,用硫酸苯酚法跟踪馏分,收集主 峰合并后,加入3-8倍体积乙醇,冰浴放置,过滤,沉淀冷冻干燥,得黄棕色石上柏多糖提取 物。
[0007] 所述步骤(1)中的有机溶剂为石油醚、乙酸乙酯、乙醇或95%乙醇水溶液中的一 种。
[0008] 所述步骤(2)中加水量为4-10倍量;提取温度为20-90°C。
[0009] 所述步骤(3) - (6)中,加入乙醇后乙醇含量为50%-80%。
[0010] 所述步骤(4) - (6)中,冰浴放置12-36小时。
[0011] 本发明所述石上柏多糖提取物可以作为活性成分,加入药剂学上可以接受的辅 料,按照药剂学上记载的制剂的制备方法制成制剂。
[0012] 本发明所述石上柏多糖提取物还可以作为活性成分之一,加入药剂学上接受的辅 料,按照药剂学上记载的制剂的制备方法制成制剂。
[0013] 本发明的石上柏多糖提取物及其制剂可在制备治疗和预防癌症药物中应用。
[0014] 本发明的优点在于:石上柏为民间抗癌草药,广泛分布于我国南方地区,资源丰 富。石上柏多糖的研究少见文献及专利报道。本发明首次提供一种石上柏多糖提取物制备 方法及其制剂制备方法,可为医疗领域新增一种廉价、药效显著的新型多糖类抗肿瘤药物。
【具体实施方式】
[0015] 下面将结合实施例进一步说明本发明的实质内容和有益效果,该实施例仅用于说 明本发明而非对本发明的限制。
[0016] 实施例一石上柏多糖提取物的制备 (1)脱脂:取干燥的石上柏全草,用8倍量乙醇浸泡后回流2次,过滤,挥干有机溶剂得 药渣;(2)提取:上述药渣加水10倍量浸泡后,水浴提取3次,每次1小时,过滤,浓缩滤液至 每ml相当于含生药1. 0g; (3)醇沉:向上述浓缩液中加入适量乙醇至乙醇含量为80%,冰浴 放置12小时,过滤,沉淀冷冻干燥后得多糖提取物粗品I; (4)除蛋白:将上述多糖提取物 粗品I溶于水中配制成〇. 05g/ml的粗品I溶液,加入1倍体积氯仿一正丁醇(V/V= 4:1) 混合溶液,搅拌后分层,搅拌后分层,上层重复操作4次后,冰浴放置12小时,过滤,沉淀冷 冻干燥,得多糖提取物粗品II; (5)除单糖及寡糖:将上述多糖提取物粗品II溶于水中配制 成0. 05g/ml的粗品II溶液,用透析膜(截止分子量:8000-14000)透析2天后,取出透析 袋内液体加入适量乙醇至乙醇含量为70%,冰浴放置12小时,过滤,沉淀冷冻干燥后得多糖 提取物粗品III; (6)凝胶柱纯化:将上述多糖提取物粗品III用凝胶色谱柱纯化,用硫酸苯酚 法跟踪馏分,收集主峰合并后,加入适量乙醇至乙醇含量为70%,冰浴放置,过滤,沉淀冷冻 干燥,得白色石上柏多糖提取物。苯酚硫酸法测定多糖得含量为91%,bradford法测定蛋 白分别为1. 0%。
[0017] 实施例二石上柏多糖提取物的制备 (1)脱脂:取干燥的石上柏全草,用10倍量80%乙醇浸泡后回流2次,过滤,挥干有机 溶剂得药渣;(2)提取:上述药渣加水8倍量浸泡后,水浴提取2次,每次1小时,过滤,浓 缩滤液至每ml相当于含生药1. 5g; (3)醇沉:向上述浓缩液中加入适量乙醇至乙醇含量为 80%,冰浴放置24小时,过滤,沉淀冷冻干燥后得多糖提取物粗品I;(4)除蛋白:将上述多 糖提取物粗品I溶于水中配制成〇.lg/ml的粗品I溶液,加入3倍体积氯仿一正丁醇(V/V= 4:1)混合溶液,搅拌后分层,上层重复操作8次后,加入适量乙醇至乙醇含量为80%,冰浴放 置24小时,过滤,沉淀冷冻干燥,得多糖提取物粗品II; (5)除单糖及寡糖:取上述多糖提取 物粗品II适量溶于水中,用透析膜(截止分子量:8000-14000)透析2天后,取出透析袋内液 体加入适量乙醇至乙醇含量为80%,冰浴放置24小时,过滤,沉淀冷冻干燥后得多糖提取物 粗品III; (6)凝胶柱纯化:将上述多糖提取物粗品III用凝胶色谱柱纯化,用硫酸苯酚法跟踪 馏分,收集主峰合并后,加入适量乙醇至乙醇含量为80%,冰浴放置24小时,过滤,沉淀冷冻 干燥,得棕色多糖SDP1、SDP2精品。苯酚硫酸法测定多糖得含量为93%,bradford法测定 蛋白分别为1.0%
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