抗Ly6E抗体和免疫缀合物及使用方法
【专利说明】抗Ly6E抗体和免疫缀合物及使用方法
[0001] 对相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2012年5月21日提交、流水号61/649, 775的美国临时专利申请的权 益，通过述及将其完整收入本文。 发明领域
[0003] 本发明涉及抗Ly6E抗体和免疫缀合物及使用它们的方法。
[0004] 发明背景
[0005] 淋巴细胞抗原6复合物，基因座E(Ly6E)，也称作视黄酸诱导的基因E(RIG-E)和 干细胞抗原2 (SCA-2)。它是一种GPI连接的，长131个氨基酸，约8. 4kDa的蛋白质，功能 未知，无已知的结合配偶物。它最初鉴定为在小鼠中的未成熟胸腺细胞，胸腺髓质上皮细胞 中表达的转录物。RIG-E,ahumanhomologofthemurineLy-6family,isinducedby retinoicacidduringthedifferentiationofacutepromyelocyticleukemiacell. MaoM. ,YuM. ,TongJ. -H.,YeJ. ,ZhuJ. ,HuangQ. -H. ,FuG. ,YuL. ,ZhaoS. -Y. ,Waxman S. ,LanotteM. ,WangZ. -Y. ,TanJ. -Z. ,ChanS. -J. ,ChenZ.Proc.Natl.Acad.Sci. U.S.A. 93:5910-5914(1996)。
[0006] 本领域需要靶向Ly6E的药剂来诊断和治疗Ly6E相关疾患，诸如癌症。本发明实 现该需要且提供其它好处。
[0007] 发明概述
[0008] 本发明提供抗Ly6E抗体、免疫缀合物及使用它们的方法。
[0009] 在一些实施方案中，提供一种结合Ly6E的分离的抗体。在其它实施方案中，该结 合Ly6E的抗体结合SEQIDNO:1氨基酸21-131内的表位。在另一个实施方案中，此类抗 体以< 4nM的亲和力结合Ly6E，如通过Scatchard分析测量的。在另一个实施方案中，此类 抗体以<7nM的亲和力结合Ly6E，如通过表面等离振子共振（SPR)测量的。在还有另一个 实施方案中，此类抗体用作药物。
[0010] 在一个实施方案中，结合SEQIDNO:1氨基酸21-131内的表位的抗体以彡4nM的 亲和力结合，如通过Scatchard分析测量的，或以< 7nM的亲和力结合Ly6E，如通过SPR测 量的，其为单克隆抗体。在另一个实施方案中，此类抗体为人抗体、人源化抗体、或嵌合抗 体。
[0011] 在一个实施方案中，结合SEQIDNO:1氨基酸21-131内的表位的抗体以彡4nM的 亲和力结合，如通过Scatchard分析测量的，且一结合所述SEQIDN0:1氨基酸21-131内 的表位就在表达Ly6E的细胞中内在化。在另一个实施方案中，结合SEQIDNO:1氨基酸 21-131内的表位的抗体以< 7nM的亲和力结合Ly6E，如通过SPR测量的，且一结合所述SEQ IDNO:1氨基酸21-131内的表位就在表达Ly6E的细胞中内在化。
[0012] 在一个实施方案中，结合SEQIDNO:1氨基酸21-131内的表位的抗体以彡4nM的 亲和力结合，如通过Scatchard分析测量的，或以< 7nM的亲和力结合Ly6E，如通过SPR测 量的，其中该抗体包含（a)包含氨基酸序列SEQIDNO:12的HVR-H3、（b)包含氨基酸序列 SEQIDN0:9的HVR-L3、和（c)包含氨基酸序列SEQIDN0:11的HVR-H2。在另一个实施 方案中，此类抗体包含（a)包含氨基酸序列SEQIDNO:10的HVR-H1、（b)包含氨基酸序列 SEQIDNO:11的HVR-H2、和（c)包含氨基酸序列SEQIDNO:12的HVR-H3。在还有另一个 实施方案中，上文所述抗体进一步包含（a)包含氨基酸序列SEQIDNO:7的HVR-L1、（b)包 含氨基酸序列SEQIDNO:8的HVR-L2、和（c)包含氨基酸序列SEQIDNO:9的HVR-L3。在 还有另一个实施方案中，此类抗体包含（a)包含氨基酸序列SEQIDNO:7的HVR-L1、（b)包 含氨基酸序列SEQIDNO:8的HVR-L2、和（c)包含氨基酸序列SEQIDNO:9的HVR-L3。
[0013] 在一个实施方案中，对于包含（a)包含氨基酸序列SEQIDNO:10的HVR-H1、（b) 包含氨基酸序列SEQIDNO:11的HVR-H2、和（c)包含氨基酸序列SEQIDNO:12的HVR-H3 及（d)包含氨基酸序列SEQIDNO: 10的HVR-H1、（e)包含氨基酸序列SEQIDNO: 11的 HVR-H2、和（f)包含氨基酸序列SEQIDNO:12的HVR-H3的抗体，它进一步包含轻链可变域 框架FR2序列SEQIDN0:20或轻链可变域框架FR3序列SEQIDN0:21或重链可变域框架 FR1序列SEQIDNO:23或重链可变域框架FR2序列SEQIDNO:24。
[0014] 在一个实施方案中，结合SEQIDNO:1氨基酸21-131内的表位的抗体以彡4nM的 亲和力结合，如通过Scatchard分析测量的，或以<7nM的亲和力结合Ly6E，如通过SPR测 量的，且包含（a)与氨基酸序列SEQIDNO:5具有至少95%序列同一性的VH序列；(b)与 氨基酸序列SEQIDNO:3具有至少95%序列同一性的VL序列；或（c) (a)中的VH序列和 (b)中的VL序列。在另一个实施方案中，此类抗体包含SEQIDNO:5的VH序列。在还有 另一个实施方案中，此类抗体进一步包含SEQIDNO:3的VL序列。
[0015] 在一个实施方案中，结合SEQIDNO:1氨基酸21-131内的表位的抗体以彡4nM的 亲和力结合，如通过Scatchard分析测量的，其包含SEQIDNO:5的VH序列和SEQIDNO: 3的VL序列。在另一个实施方案中，结合SEQIDNO:1氨基酸21-131内的表位的抗体以 彡7nM的亲和力结合，如通过SPR测量的，其包含SEQIDNO:5的VH序列和SEQIDNO:3 的VL序列。
[0016] 在一个实施方案中，结合SEQIDNO:1氨基酸21-131内的表位的抗体以彡4nM的 亲和力结合，如通过Scatchard分析测量的，其为IgGl、IgG2a或IgG2b。在一个实施方案 中，结合SEQIDNO:1氨基酸21-131内的表位的抗体以<7nM的亲和力结合，如通过SPR 测量的，其为IgGl、IgG2a或IgG2b。
[0017] 在一个实施方案中，提供编码本文所述抗体的分离的核酸。在另一个实施方案中， 还提供包含此类分离的核酸的宿主细胞。在还有另一个实施方案中，还提供生成抗体的方 法，其包括培养包含本文所述分离的核酸的宿主细胞，使得该抗体生成。
[0018] 在一个实施方案中，提供包含本文所述抗体和细胞毒剂的免疫缀合物。在另一 个实施方案中，此类免疫缀合物具有式Ab-(L-D)p，其中：(a)Ab为本文所述抗体；(b)L 为接头；(c)D为选自美登木素生物碱（maytansinoid)、奥瑞司他汀（auristatin)、加利 车霉素（calicheamicin)、卩比略并苯并二氣卓（pyrrolobenzodiazepine)、和奈莫柔比星 (nemorubicin)衍生物的药物；且（d)p范围为1-8。在一些实施方案中，此类免疫缀合物具 有D，其为奥瑞司他汀。在其它实施方案中，此类免疫缀合物具有D，其具有式De:
[0019]
【主权项】
1. 一种结合Ly6E的分离的抗体，其中该抗体以通过Scatchard分析测量的< 4nM的亲 和力结合SEQ ID NO :1氨基酸21-131内的表位。
2. 权利要求1的抗体，其为单克隆抗体。
3. 权利要求1的抗体，其为人抗体、人源化抗体、或嵌合抗体。
4. 权利要求1的抗体，其中该抗体一结合所述SEQ ID NO :1氨基酸21-131内的表位 就在表达Ly6E的细胞中内在化。
5. 权利要求1的抗体，其为结合SEQ ID NO :1氨基酸21-131内的表位的抗体片段。
6. 权利要求1的抗体，其中该抗体包含（a)包含氨基酸序列SEQ ID NO : 12的HVR-H3、 (b)包含氨基酸序列SEQ ID NO :9的HVR-L3、和（c)包含氨基酸序列SEQ ID NO : 11的 HVR-H2〇
7. 权利要求1的抗体，其中该抗体包含（a)包含氨基酸序列SEQ ID NO :10的HVR-Hl、 (b) 包含氨基酸序列SEQ ID NO