延胡索的治疗类风湿性关节炎用图
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种提取的中草药中活性成分的医药用途，具体涉及延胡索及其延胡索总生物碱在制备防治类风湿性关节炎的药物中的应用。
【背景技术】
[0002]类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种累及多关节滑膜炎病变的自身免疫性疾病，全世界发病率大约1%，其发病机制复杂，受遗传和环境因素的影响。RA的基本病变是滑膜细胞增生，衬里层增厚，多种炎性细胞浸润，血管翳形成及软骨与骨组织的破坏，最终导致关节畸形和功能丧失。
[0003]临床上传统用于治疗RA的药物有三大类，即非留体抗炎药(NSAID)、疾病调理性抗风湿药(DMARD)以及糖皮质激素类药物。近年来，学界已经愈发认识到及早采用DMARD与NSAID或糖皮质激素联合治疗是一种较为理想的RA治疗策略。甲氨蝶呤是一较老的非甾体抗炎药，是目前绝大多数联合用药方案的基本组分。由于传统非留体抗炎药显效缓慢且有较强的副反应，耐受性不佳，难以长期使用，治疗所致药源性疾病的发病率更高。因此，有必要进一步寻找安全高效的类风湿性关节炎治疗药物。
[0004]现代医学中的RA、风湿热、神经痛、面瘫、肌炎、痛风等均可按痹症进行辨证论治。关于“痹症”，早在《黄帝内经》中就有“风寒湿三气杂至，合而为痹，其风气胜者为行痹，寒气胜者为痛痹，湿气胜者为着痹也”的记载，张仲景在《伤寒论》中称其为“历节病”，并且给出治疗方剂，如桂枝附子汤、甘草附子汤等，中国现存最早的药学专著《神农本草经》中记载70多种治疗痹症的药物，目前研究的仅有白芍、丹参、山茱萸和菊花等几种，其他的鲜有报道，所以治疗RA的天然药物具有开发潜力。
[0005]延胡索为S粟科(Papaveraeeae)紫堇属(Corydalis)植物延胡索(Corydalisyanhusuo ff.T.Wang)的干燥块莖,是著名的“浙八味”之一。延胡索又名延胡、玄胡索、元胡索、元胡，味辛、苦、温，归肝、脾经，具有活血散瘀、行气止痛的功效。延胡索始载于《本草拾遗》，作为传统镇痛药和活血化瘀药在我国医药学的应用中已有两千多年的历史，古代和现代中医用延胡索主要用于气血瘀滞诸痛证，主治胸痹心痛，脘腹疼痛，腰痛，疝气痛，痛经，经闭，产后瘀滞腹痛，跌打损伤等。
【发明内容】
[0006]本发明提供了延胡索及其延胡索总生物碱的新用途，即在制备抗类风湿性关节炎的药物中的用途。
[0007]本发明还提供了用于防治类风湿性关节炎的一种药物组合物。它是由延胡索总生物碱为活性成分，加入药学可接受的辅料制备成常用的药物制剂。
[0008]延胡索总生物碱是从中药材延胡索中提取得到的生物碱。
[0009]延胡索总生物碱的制备取延胡索生药，加入酸溶液加热提取。合并提取液，过滤，减压浓缩，调节pH值至碱性，继而用乙酸乙酯萃取。合并乙酸乙酯层，回收溶剂至干，得延胡索总生物碱。
[0010]延胡索总生物碱的优选制备工艺:
取延胡索生药l_3kg，加入5-24L的1-5%硫酸水溶液40_80°C加热提取2_4次。合并提取液，过滤，减压浓缩至2-9L，加入l-10%Na0H溶液适量，调节pH值至9_11，继而用乙酸乙酯1-16 L萃取2-4次。合并乙酸乙酯层，回收溶剂至干，得延胡索总生物碱。
[0011]取延胡索生药l-3kg，加入5-24L的1_5%硫酸水溶液40_80°C加热提取2_4次。合并提取液，过滤，减压浓缩至2-9L，加入l-10%Na0H溶液适量，调节pH值至9_11，继而用乙酸乙酯1-16 L萃取2-4次。合并乙酸乙酯层，回收溶剂至干，精制，得紫堇单酚碱
精制:上述延胡索总生物碱以粗硅胶(100-200目)拌样，经硅胶柱层析，以二氯甲烷-乙醇梯度洗脱(100:1 ~ 1:1)。将二氯甲烷-乙醇(100:1 ~ 1:1)洗脱部分经(:18反相ODS色谱分离(以乙醇-水(5% ~100%)梯度洗脱)，收集25-55%的乙醇洗脱部位，经葡聚糖凝胶S^hadex LH-20分离(以乙醇-水(5% ~100%)梯度洗脱；洗脱液流速lml/min)，收集45-85%乙醇洗脱馏分，回收溶剂后，溶解于甲醇溶液中，重结晶得化合物紫堇单酚碱。
[0012]紫堇单酚碱在延胡索中含量很低，通过本发明能高效地制备紫堇单酚碱。
[0013]本发明还提供了用于防治类风湿性关节炎的一种药物组合物。它是由紫堇单酚碱为活性成分，加入药学可接受的辅料制备成常用的药物制剂。
[0014]本发明还提供了用于防治类风湿性关节炎的一种药物组合物。它是由紫堇单酚碱10_40mg,黄连素 0.l-5mg 组成。
[0015]所述的制剂是口服制剂。
[0016]延胡索总生物碱片剂的制备
处方:延胡索总生物碱0.5-2g，淀粉50-150g，糊精30-100g，硫酸钙30_200g，硬脂酸镁 l_6g。
[0017]制法:取延胡索总生物碱，加淀粉、糊精、硫酸钙，硬脂酸镁，混合均匀，制成颗粒，压片，包糖衣或薄膜衣，即得。
[0018]紫堇单酚碱片剂的制备
处方:紫堇单酚碱10_40mg，淀粉50-150g，糊精30_100g，硫酸钙30_200g，硬脂酸镁
l-6g。
[0019]制法:取紫堇单酚碱，加淀粉、糊精、硫酸钙，硬脂酸镁，混合均匀，制成颗粒，压片，包糖衣或薄膜衣，即得。
[0020]黄连素紫堇单酚碱片剂的制备
处方:紫堇单酚碱10_40mg，黄连素0.l-5mg,淀粉50_150g，糊精30_100g，硫酸钙30-200g，硬脂酸镁 l-6g。
[0021]制法:取紫堇单酚碱，黄连素，加淀粉、糊精、硫酸钙，硬脂酸镁，混合均匀，制成颗粒，压片，包糖衣或薄膜衣，即得。
[0022]本发明的延胡索总生物碱、紫堇单酚碱，抑制炎症，调节免疫，显著提升关节炎大鼠的淋巴细胞，降低中性细胞，降低受试动物体内炎症因子和炎症介质的含量，通过调控炎症网络而缓解大鼠的关节炎症状。
【具体实施方式】
[0023]实施例1.延胡索总生物碱的制备
取延胡索生药1kg，加入5L的2%硫酸水溶液50°C加热提取4次。合并提取液，过滤，减压浓缩至4L，加入5%Na0H溶液适量，调节pH值至10，继而用乙酸乙酯2L萃取4次。合并乙酸乙酯层，回收溶剂至干，得延胡索总生物碱。
[0024]实施例2
取延胡索生药1kg，加入5L的2%硫酸水溶液50°C加热提取4次。合并提取液，过滤，减压浓缩至4L，加入5%Na0H溶液适量，调节pH值至10，继而用乙酸乙酯2L萃取4次。合并乙酸乙酯层，回收溶剂至干，得延胡索总生物碱。
[0025]精制:上述延胡索总生物碱以粗硅胶(200目)拌样，经硅胶柱层析，以二氯甲烷-乙醇梯度洗脱(100:1 ~ 1:1)。将二氯甲烷-乙醇(10:1)洗脱部分经C18反相ODS色谱分离(以乙醇-水(5% ~100%)梯度洗脱)，收集35%的乙醇洗脱部位，经葡聚糖凝胶S印hadexLH-20分离(以乙醇-水(5% ~100%)梯度洗脱；洗脱液流速lml/min)，收集65%乙醇洗脱馏分，回收溶剂后，溶解于甲醇溶液中，一 4°C重结晶得化合物紫堇单酚碱；
实施例3
取延胡索生药1kg，加入6L的3%硫酸水溶液70°C加热提取2次。合并提取液，过滤，减压浓缩至6L，加入6%Na0H溶液适量，调节pH值至11，继而用乙酸乙酯3 L萃取3次。合并乙酸乙酯层，回收溶剂至干，得延胡索总生物碱2.589g。
[0026]精制:上述延胡索总生物碱以粗硅胶(200目)拌样，经硅胶柱层析，以二氯甲烷-乙醇梯度洗脱(100:1 ~ 1:1)。将二氯甲烷-乙醇(10:1)洗脱部分经C18反相ODS色谱分离(以乙醇-水(5% ~100%)梯度洗脱)，收集35%的乙醇洗脱部位，经葡聚糖凝胶S印hadexLH-20分离(以乙醇-水(5% ~100%)梯度洗脱；洗脱液流速lml/min)，收集65%乙醇洗脱馏分，回收溶剂后，溶解于甲醇溶液中，一 4°C重结晶得化合物紫堇单酚碱；
实施例4 黄连素紫堇单酚碱组合物的制备:紫堇单酚碱紫堇单酚碱20mg，黄连素Img混合得到。
[0027]实施例5延胡索总生物碱片剂的制备
处方:延胡索总生物碱0.5g，淀粉150g，糊精100g，硫酸钙200g，硬脂酸镁2g。
[0028]制法:取延胡索总生物碱，加淀粉、糊精、硫酸钙，硬脂酸镁，混合均匀，制成颗粒，压片，包糖衣或薄膜衣，即得。
[0029]实施例6 紫堇单酚碱片剂的制备
处方:紫堇单酚碱20mg，淀粉150g，糊精100g，硫酸钙200g，硬脂酸镁2g。
[0030]制法:取紫堇单酚碱，加淀粉、糊精、硫酸钙，硬脂酸镁，混合均匀，制成颗粒，压片，包糖衣或薄膜衣，即得。
[0031]实施例7黄连素紫堇单酚碱片剂的制备
处方:紫堇单酹碱20mg,黄连素Img,淀粉150g ,糊精10g,硫酸韩200g,硬脂酸镁2g。
[0032]制法:取紫堇单酚碱，黄连素，加淀粉、糊精、硫酸钙，硬脂酸镁，混合均匀，制成颗粒，压片，包糖衣或薄膜衣，即得。
[0033]
实施例8.延胡索总生物碱、紫堇单酚碱、黄连素对完全弗氏佐剂诱导的关节炎大鼠的作用实验方法
将大鼠分组，即正常组、模型组、阳性药组(双氯芬酸钠10 mg/kg)、实施例1制备得到的延胡索总生物碱组(10 mg/kg)、实施例2制备得到的紫堇单酹碱组(0.2mg/kg)、实施例4制备得到的黄连素紫堇单酚碱组(紫堇单酚碱0.2mg/kg+黄连素0.01 mg/kg)、黄连素组(黄连素0.01 mg/kg)。在大鼠(正常组除外)右后足部皮内注射完全弗氏佐剂致炎。从致炎第二天起灌胃给药，每天给药一次，每次ImL,持续28天。分别在给药第7天、第14天、第21天和第28天评价大鼠致炎侧足肿胀程度和关节炎指数。给药28天后，麻醉情