用于养殖淡水鱼二联口服疫苗及制备和使用方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于养殖淡水鱼疫苗及使用的技术领域，特别是一种用于养殖淡水鱼二联 口服疫苗及制备和使用方法。
【背景技术】
[0002] 目前我国淡水鱼的疾病呈逐年增加趋势，尤其是嗜水气单胞菌和豚鼠气单胞菌的 流行，造成了巨大的经济损失，严重阻碍了我国淡水鱼产业的发展。目前鱼类细菌性疾病主 要是通过采用抗菌药物结合优化养殖技术的方法进行疾病的预防和治疗。然而，长期使用 抗生素及化学药品，使大部分细菌产生了较强且广泛的耐药性，并且还造成环境污染以及 药物残留超标等食品安全问题。由于药残问题，多次造成我国的水产品出口受限。为了达 到环境安全、食品安全及无公害水产养殖的目的，国家已经命令禁止生产和使用危害严重 的药物，尽量少用或不用药物。随着免疫学技术的发展，近年来诸多学者研宄表明疫苗免疫 接种是防治鱼类细菌性疾病的有效方法，为鱼类细菌病的防治寻找到了另一有效安全的防 治途径，是我国科学研宄重点支持的领域之一。
[0003] 随着高密度、设施集约化养殖模式的普及，鱼类细菌性疾病呈现出多重感染、混合 感染、交叉感染的新趋势，同时感染多种细菌的情况非常普遍，因此一些学者开展了二联疫 苗、三联疫苗和多联疫苗研宄。如近些年已经开展了嗜水气单胞菌和温和气单胞菌二联疫 苗对黄鳝的免疫效果研宄、开展了嗜水气单胞菌和河弧菌二联疫苗对鲫的免疫效果研宄、 开展了嗜水气单胞菌与迟缓爱德华氏菌亚单位二联疫苗对小鼠的免疫效果、开展了三联疫 苗预防斑点叉尾鮰细菌性疾病研宄。以上研宄大部分采用注射和浸泡免疫方法，由于浸泡 具有免疫效果差、疫苗用量大等缺点，注射接种疫苗操作过程繁琐、工作量大、伤口容易感 染等，均不适宜在生产实践中应用。口服接种具有免疫效果好、操作方便、刺激较小以及工 作强度小等特点，适宜在生产中大规模应用，成为当前的研宄热点。
[0004] 另外，近年来也有科研人员采用2%海藻酸钠、6% PVP-K30制备了银鲫口服嗜水 气单胞菌微胶囊疫苗，相对免疫保护率为61. 1 %，高于全细胞疫苗组的50%;用聚乳酸一乙 醇酸共聚物PLG和聚乙烯醇采用复乳挥发法制备嗜水气单胞菌口服疫苗，产品相对免疫保 护率为42. 9 %，高于全细胞疫苗组的32. 1 %。以上研宄均是希望递送疫苗到后肠，刺激肠 道粘膜免疫相关淋巴组织发挥免疫作用。但是，以上技术没有对相关鱼类的胃肠道消化生 理特性研宄，也没有对其进行耐酸性研宄，因此疫苗有效成分不能实现肠道释放的目的，由 于鱼用疫苗易受温度、酸碱度、胃蛋白酶影响，直接口服接种会损坏疫苗，降低疫苗免疫效 果，如果疫苗过早释放，将被胃酸、消化酶分解，不能起到免疫保护作用，限制了其在生产中 的应用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是针对现有技术的不足，而提出一种用于养殖淡水鱼二联口服疫苗 及制备和使用方法。
[0006] 本发明解决其技术问题是采取以下技术方案实现的：
[0007] -种用于养殖淡水鱼二联口服疫苗，包含按质量分数构成的如下组份：
[0008] 药用淀粉： 2.5-3. 5份 麦芽糊精： 0.8-1.2份 浓度为6 X IOwCfuAnL的嗜水气单胞菌菌液： 0. 5-0. 8份 浓度为6X 10wcfu/mL的豚鼠气单胞菌菌液： 0. 5-0. 8份。
[0009] 而且，所述嗜水气单胞菌菌液和豚鼠气单胞菌菌液为经过了 0. 5%的甲醛灭活。
[0010] 一种用于养殖淡水鱼类二联口服疫苗的制备，方法如下：
[0011] ⑴灭活：使用〇. 5%的甲醛对浓度为6X 101(lCfu/mL的嗜水气单胞菌菌液和浓度为 6X 101(lCfu/mL的豚鼠气单胞菌菌液进行灭活；
[0012] ⑵微丸制备：
[0013] ①将上述二联口服疫苗所包含的按质量分数构成的如下组份：
[0014] 药用淀粉： 2. 5-3. 5份 麦芽糊精： 0.8-1 2份 浓度为6X K^cfu/mL的嗜水气单胞菌菌液： 0. 5-0. 8份 浓度为6X KTcfu/mL的豚鼠气单胞菌菌液： 0. 5-0. 8份
[0015] 混合均匀成微湿的软材；
[0016] ②制微丸：对上述软材使用微丸机制微丸，微丸机采用200-400转/分钟的转速， 制备成10?20目的微丸；
[0017] ⑶肠溶层包衣制备：
[0018] ①将主要成分为肠溶型丙烯酸树脂包衣材料溶于80 %的乙醇中，制备成10 %? 15 %的悬浊液；
[0019] ②使用包衣机将上述悬浊液均匀喷涂于疫苗微丸的表面；
[0020] ⑷诱食剂的喷涂：
[0021] ①将诱食剂二甲基-丙酸噻亭溶于水中，制成10%?30%的水溶液；
[0022] ②使用包衣机将上述水溶液均匀喷涂于上述制备的肠溶层包衣表面。
[0023] 而且，所述步骤⑵中制备成的微丸的有效疫苗含量为I. 8X 101(lCfu/g量级水平。
[0024] 而且，所述步骤⑶的①的步骤中肠溶型丙烯酸树脂的具体标号为EOBS68, pH6. 8。
[0025] 而且，所述步骤⑷的①的步骤中诱食剂二甲基-丙酸噻亭，以牛磺酸代替。
[0026] 一种用于养殖淡水鱼类二联口服疫苗的使用方法，包括方法步骤如下：
[0027] ⑴第一次投喂：在当天正常饵料投喂间隔，将二联口服疫苗微丸投喂鱼，投喂量为 正常饵料量的50%，当天2次，同时，当天正常饵料投喂量减半，第一次投喂连续2天；
[0028] ⑵加强投喂；在第一次投喂疫苗微丸后的第14 一 28天中的任一天开始，进行与第 一次投喂方法及投喂量相同的加强投喂。
[0029] 本发明的优点和积极效果是：
[0030] 1、本发明与现有疫苗制备方法相比，本发明首次制备了嗜水气单胞菌和豚鼠气单 胞菌二联口服疫苗，并采用投喂接种的方法，免疫效果理想，工作量小，适合大规模接种。
[0031] 2、本发明采用功能性包衣材料，既保护疫苗在胃液中不被消化，又使疫苗在肠道 中迅速释放，与后肠黏膜充分接触，产生免疫反应，获得高效免疫效果，解决了直接口服给 药免疫效果差的问题。
[0032] 3、本发明充分考虑淡水鱼的生活环境、身体机能、捕食习惯等特点，在配方比例上 反复进行实验，科学取值，针对性很强，使用方便，效果非常显著，有很高的市场应用价值。
【具体实施方式】
[0033] 以下对本发明实施做进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能 以此限定本发明的保护范围。
[0034] 一种用于养殖淡水鱼二联口服疫苗，包含按质量分数构成的如下组分：
[0035] 药用淀粉： 2. 5-3. 5份 麦芽糊精： 0.8-1.2份 浓度为6 X IOwCfuZmL的嗜水气单胞菌菌液： 0. 5-0. 8份 浓度为6 X lOlfu/mL的豚鼠气单胞菌菌液： 0. 5-0. 8份
[0036] 在本发明的具体实施中，所述嗜水气单胞菌菌液和豚鼠气单胞菌菌液经过了 0. 5%的甲醛灭活。
[0037] -种用于养殖淡水鱼类二联口服疫苗的制备，该制备方法如下：
[0038] ⑴灭活：使用0. 5%的甲醛对浓度为6X 101(lCfu/mL的嗜水气单胞菌菌液和浓度为 6X 101(lCfu/mL的豚鼠气单胞菌菌液进行灭活；
[0039] ⑵微丸制备：
[0040] ①将上述二联口服疫苗所包含的按质量分数构成的如下组分：
[0041] 药用淀粉： 2. 5-3. 5份 麦芽糊精： 0. 8-1. 2份 浓度为6 X IOwCfuZmL的嗜水气单胞菌菌液： 0. 5-0. 8份 浓度为6 X IOwCfuZmL的豚鼠气单胞菌菌液： 0. 5-0. 8份
[0042] 混合均匀成微湿的软材；
[0043] ②制微丸：对上述软材使用微丸机制微丸，微丸机采用200-400转/分钟的转速， 制备成10?20目的微丸，所述制备成的微丸的有效疫苗含量为10 1(lcfu/g量级水平；
[0044] ⑶肠溶层包衣制备：
[0045] ①将主要成分为肠溶型丙烯酸树脂包衣