用于肿瘤治疗的单克隆抗体的制作方法
【专利说明】用于肿瘤治疗的单克隆抗体
[0001] 本申请为申请日是2009年2月11日、申请号是20098010745L 2(PCT/ IL2009/000153)、发明名称为"用于肿瘤治疗的单克隆抗体"的中国申请的分案申请。 发明领域
[0002] 本发明涉及抑制肿瘤生长、提高患有肿瘤的受治疗者的存活和诱导防止哺乳动物 中肿瘤复发的方法。该方法包括联合至少一种化疗剂施用包含来源于定名为HiBAT-I的鼠 单克隆抗体的CDR区的人源化单克隆抗体。
[0003] 发明背景
[0004] 近年来关于特别是在T细胞应答水平的免疫调节的分子和细胞基础知识迅速增 长，为免疫治疗方法包括肿瘤疫苗的开发提供了新武器库。显示某些单克隆抗体具有免疫 调节活性，包括结合T细胞表面决定簇的能力和诱导这些细胞的增殖、活化、成熟或分化的 能力。
[0005] BAT (也称为mBAT-Ι或BAT-1)是针对伯基特淋巴瘤（Burkitt lymphoma)细胞系 (Daudi)膜制品产生的鼠单克隆抗体，已显示其对各种类型的肿瘤表现出抗肿瘤和免疫刺 激作用（Hardy等人，2001，Int. J. Oncol. 19:897)。此单克隆抗体最初公开于Hardy等人的 美国专利号5, 897, 862。BAT-I由具有CNCM登录号1-1397的杂交瘤细胞系分泌。
[0006] 鼠 BAT的多核苷酸和氨基酸序列在Hardy等人WO 00/58363,和美国专利公布号 2003/0026800中公开。美国专利申请公布号2008/0025980中公开了许多基于鼠 BAT的人 源化单克隆抗体。根据该公开，人源化单克隆BAT抗体似乎诱导比亲代鼠 BAT抗体更强的 抗肿瘤作用。在各种测试的模型系统中，在SCID(严重联合免疫缺陷病）小鼠、NK细胞缺 陷的米色鼠和T细胞缺陷的裸鼠中研宄BAT抗肿瘤活性（Hardy，B.，1997, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:5756)。对所有的小鼠静脉内注射随后在肺部形成肿瘤的鼠 B16黑素瘤。BAT 只对植入了鼠或人淋巴细胞的SCID小鼠发挥抗肿瘤作用。BAT在无胸腺裸鼠和米色鼠中发 挥抗肿瘤活性，但该活性与BAT在野生型小鼠中的抗肿瘤活性相比功效降低。
[0007] 还在体外研宄了鼠 BAT的免疫调节作用。鼠 BAT激活⑶4+T细胞和诱导IFN- γ 从这些细胞中分泌（分别为Hardy等人，2000, Int. Immunol. 12:1623和Quaglino Ε·等 人，2005, Vaccine 9:23(25) :3280-7)。此外，发现BAT触发T细胞增殖和增强其溶细胞活 性（Hardy, B.等人，1997, Hum. Antibodies, 8:95)。
[0008] Berger等人（2008)公开了给晚期血液系统恶性肿瘤患者施用基于mBAT-1的 人源化单克隆抗体CT-011，和相关的药代动力学（Berger等人Clin. Cancer Res. 2008; 14 (10) ,2008 年 5月 15 日）。
[0009] 应该牢记的是，BAT抗体预计不会祀向肿瘤细胞自身而是革El向受治疗者或患者的 免疫功能细胞，以便以有利的方式调节免疫应答。
[0010] 化疗是最广泛使用的治疗癌症的治疗方法之一。将化疗药物分为若干组，基于其 对癌细胞内特定化学物质的作用，药物干扰的细胞活动或过程，或药物影响的细胞周期的 特定阶段。化疗组包括：烷化剂、亚硝基脲、抗代谢物、蒽环类、拓扑异构酶I和拓扑异构酶 II抑制剂、有丝分裂抑制剂和类固醇抑制剂。
[0011] 化疗药物可被提供作为单独的疗法但其经常与一种或多种其他的活性剂联合使 用。在某些情况下，将具体联合调整以提供显著提高的临床效果。例如，抗代谢物氟尿嘧啶 (5FU)和烷化剂奥沙利铂共同用于治疗结肠直肠癌的组合方案中。也适用于结肠直肠癌的 氟尿嘧啶、甲酰四氢叶酸（亚叶酸）和奥沙利铂的联合疗法缩写为FOLFOX的。环磷酰胺、 多柔比星、长春新碱和强的松的联合疗法（缩写为CHOP)用于治疗非霍奇金淋巴瘤，而CHOP 和嵌合型单克隆抗体利妥昔单抗的联合疗法（缩写为R-CH0P)用于治疗弥漫性大B细胞淋 巴瘤和其他侵袭性B细胞非霍奇金淋巴瘤。
[0012] 美国专利号6, 811，779公开了尿嘧啶、5FU或尿嘧啶氮芥与放射和与特异性结合 到VEGF接受者胞外域的单克隆抗体的联合疗法。此联合疗法针对于抑制血管生成。美国专 利号6, 217, 866公开了抑制表达人EGF接受者的人肿瘤细胞生长的方法，包括给具有所述 肿瘤细胞的人癌症患者施用有效量的抗肿瘤剂和有效量的单克隆抗体；（i)其中所述抗体 结合到所述肿瘤细胞的人EGF接受者的胞外域，（ii)其中抗体不偶联到抗肿瘤剂，和（iii) 其中抗体抑制EGF与EGF接受者结合。
[0013] 在【背景技术】中无任何地方教导或建议人源化HiBAT-I单克隆抗体与化疗联合使用 是有利的。实际上，由于已知BAT和基于它的抗体具有免疫刺激性质，此抗体与通过杀死增 殖细胞群体而发挥作用的细胞毒药物或其他化疗药物联合可用于实现比每种药剂本身更 强的临床疗效是非常令人吃惊和意外的。
[0014] 发明概述
[0015] 本发明提供了抑制肿瘤生长、减小肿瘤体积、提高受治疗者存活和诱导防止长有 实体肿瘤和非实体肿瘤的受治疗者中肿瘤复发的方法。所述方法包括使用具有至少一个鼠 单克隆抗体BAT-1 (mBAT-1)的互补决定区（CDR)和来源于接受者人免疫球蛋白的构架区 (FR)的人源化单克隆抗体。此抗体的一个实例是hBAT-Ι (本文也称为CT-011)。本文公开 的一些方法优选包括使用人源化单克隆抗体与至少一种化疗剂的联合方案，然而本文公开 的其他方法涉及使用人源化单克隆抗体自身，但是其可任选地与一种或多种化疗剂组合使 用。
[0016] 本文说明本发明的原则，在淋巴细胞培养物和动物肿瘤模型中使用mBAT-Ι和 CT-011，而在具有不同类型血液肿瘤的人类患者中使用CT-011。
[0017] 本发明部分基于意外发现：与施用任一单独治疗的单一疗法相比，将CT-Oll掺入 到用各种化疗剂的治疗方案中导致一些有益于抗肿瘤和抗癌的作用，包括例如降低肿瘤的 生长速率、抑制肿瘤生长和延长存活时间。还发现将人源化抗体如CT-Oll掺入到化疗方案 可提供对化疗剂的剂量限制性毒性（DLT)水平的耐受性提高的额外益处。
[0018] 本发明还部分基于观察：单独或与化疗剂联合使用受治疗者的抗体治疗动物模型 中诱导的肿瘤，导致都"治愈"及长期防止相同肿瘤细胞后续攻击时肿瘤复发的记忆效应。 从而给予用人源化抗体CT-Oll治疗治愈的动物对肿瘤复发或再暴露于肿瘤的抗性。此外， 现在公开了在某些情况下经历CT-Oll早期临床试验的人类受治疗者在施用单一剂量此抗 体和它从血液消除后也表现出长期肿瘤控制和防护作用。
[0019] 不希望局限于任何理论或作用机制，人源化BAT单克隆抗体在防止肿瘤复发或复 活中的活性可能与此抗体在防止效应/记忆T细胞凋亡中的活性有关，如在本文公开和使 用抗体CT-011示例说明的。
[0020] 因此，在各个方面，本发明提供了迄今未知其发挥累积或甚至加性效应的抗癌剂 的组合。根据发明的某些原则，所述组合包括施用至少一种化疗剂的一种治疗和施用基于 mBAT-Ι的免疫刺激的人源化单克隆抗体的另一种不同治疗。意外的是，与分开使用或每一 种自身使用时相比，当联合使用时这两种治疗实现了更有益的抗癌作用。本文和权力要求 中使用的联合治疗可以是指许多不同的联合治疗的任一种，包括例如，两种或多种治疗的 施用期基本重叠，两种或多种治疗是同步、顺序或连续的，或两种或多种治疗在预定的交替 时间段施用。
[0021] 根据第一个方面，本发明提供了治疗肿瘤的方法，所述方法包括（i)给需要其的 受治疗者施用有效量的人源化单克隆抗体或其片段，其中抗体或其片段具有至少一个鼠 单克隆抗体BAT(mBAT-l)的互补决定区和来自接受者人免疫球蛋白或由此修饰的构架区 (FR)，和（ii)给受治疗者施用有效量的至少一种化疗剂，从而治疗肿瘤。
[0022] 根据另一个方面，本发明提供了提高对至少一种化疗剂耐受性的方法，所述方法 包括给需要其的受治疗者施用有效量的人源化单克隆抗体或其片段，其中抗体或其片段具 有至少一个鼠单克隆抗体BAT (mBAT-1)的互补决定区和来自接受者人免疫球蛋白或由此 修饰的构架区（FR)，其中受治疗者正在经历至少一种化疗剂的化疗，从而提高对所述化疗 剂的耐受性。
[0023] 根据另一方面，本发明提供了在患有肿瘤的受治疗者中增强存活或抑制疾病发展 的方法，其中受治疗者用至少一种化疗剂治疗，所述方法包括施用有效量的人源化单克隆 抗体或其片段，其中抗体或其片段具有至少一个鼠单克隆抗体BAT (mBAT-1)的互补决定区 和来自接受者人免疫球蛋白或由此修饰的构架区（FR)，从而增强受治疗者的存活。
[0024] 根据另一方面，本发明的提供了减少或防止肿瘤复发的方法，所述方法包括给需 要其的受治疗者施用有效量的人源化单克隆抗体或其片段，其中抗体或其片段具有至少一 个鼠单克隆抗体BAT(mBAT-l)的互补决定区和来自接受者人免疫球蛋白或由此修饰的构 架区（FR)，从而减少或防止肿瘤复发。
[0025] 根据一个实施方案，减少或防止肿瘤复发的方法还包括给受治疗者施用至少一种 化疗剂。
[0026] 根据特定实施方案，受治疗者正在经历或已经完成用至少一种化疗剂的化疗的过 程。
[0027] 根据各种实施方案，人源化单克隆抗体的轻链可变区的特征为下式：
[0028] FRU-CDRL1-FRL2-CDRL2-FR L3-CDRL3_FRL4
[0029] 其中每个FR独立为人抗体的构架区且每个⑶R独立为单克隆mBAT-1抗体的互补 决定区。
[0030] 根据各种实施方案，人源化单克隆抗体的重链可变区的特征为下式：
[0031 ] FRH1_CDRH1_FRH2 _CDRH2_FRH3_CDR H3_FRH4
[0032] 其中每个FR独立为人抗体的构架区且每个⑶R独立为单克隆mBAT-1抗体的互补 决定区。
[0033] 根据各种实施方案，FR来源于人TEL9抗体（SEQ ID NO: 130)的轻链可变区或由 此修饰。
[0034] 根据各种实施方案，来源于或修饰于人TEL9抗体的轻链可变区的FR的氨基酸 序列选自由FR L1，[EIVLTQSPSSLSASV⑶RVTITC;SEQIDNO:l];FR L2，[W(F或Y)QQKPG KAPKL(W或LHY;SEQ ID NO:2] ;FRL3, [GVPSR FSGSG SGT(D或S) (Y或F) (C或T)LTINS LQPED FATYY C;SEQ ID NO:3];和 FRm, [FGGGT KLEIK;SEQ ID N0:4]组成的组。
[0035] 根据各种实施方案，FR来源于人hsighvl295抗体的重链可变区（SEQ ID N0:146) 或由此修饰。
[0036] 根据各种实施方案，来源于或修饰于hsighvl295抗体的重链可变区的FR氨基酸 序列选自由 FRhi, [Q(I 或 V) QLV QSGSE LKKPG ASVKI SCKAS GY (T 或 S) F (T 或 S) ;SEQ ID NO:5] ；FRH2, [WV(RggK)QAPGQ GL(Q gg K)WMG ；SEQ ID NO:6] ；FRH3, [RF(VggA)FSLDT SV(N 或 S)TAYLQ ITSL(T或N)AEDTG MYFC(V或A) (R或K) ;SEQ ID NO:7];和 FRh4, [WGQGT LVTVS S ;SEQ ID NO:8]组成的组。
[0037] 根据各种实施方案，轻链可变区包含选自由CDRu [SARSS VSYMH ; SEQ ID NO :9]; CDRL2[RTSNL AS;SEQ ID N0:10] ;CDRU[QQRSS FPLT;和 SEQ ID N0:11]组成的组的至少一 种氨基酸序列，其中CDR来源于鼠BAT-I抗体和下标"L"和"Η"分别是指轻链区和重链区。
[0038] 根据各种实施方案，重链可变区包含选自由⑶Rhi [NYGMN ;SEQ ID NO: 12]; CDRH2[WINTDSGESTYAEEFKG;SEQIDN0:13];和CDR H3[VGYDALDY;SEQIDN0:14]组成的 组的至少一种氨基酸序列。
[0039] 根据各种实施方案，人源化抗体包含：选自由BATRk A(SEQ ID N0:15)，BATRkb(SEQ ID N0:16)，BATRkc(SEQ ID N0:17),和 BATRkd(SEQ ID N0:18)组 成的组的轻链可变区；和选自由 A(SEQ ID N0:20),BATRHb(SEQ ID N0:21),BATRHC(SEQ ID N0:22),BATRHD(SEQ ID N0:23)和 BATRHe(SEQ ID N0:24)组成的组的重链可变区。
[0040] 根据其他实施方案中，人源化抗体包含选自由BATRHa/BATR K A (SEQ ID NO: 20/SEQ ID N0:15),BATRHb/BATRka(SEQ ID N0:21/