对cd22有特异性的抗体及其使用方法
【专利说明】对CD22有特异性的抗体及其使用方法
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2012年7月19日提交的美国临时申请系列no. 61/673,630的优先权 权益，该申请W其整体通过引用并入本文。
[0003] 前言
[0004] CD22, 一种属于Ig超家族的谱系限制性B细胞抗原，在许多类型的恶性B细胞W 及正常成熟B淋己细胞的表面上表达。
[000引发明概述
[0006] 本公开提供对CD22有特异性的抗体。所述抗体可用于多种治疗、诊断和监测应 用，其也一并提供。
[0007] 附图简述
[000引 图1A和1B示出编码嵌合或人源化抗-CD22抗体重链（图1A)和轻链（图1B)的 构建体。
[0009] 图2A-E为示出人源化抗-CD22抗体与生物素化亲本嵌合抗-CD22抗体竞争结合 固定的CD22的图。
[0010] 图3A-D示出健康供体T细胞对测试抗体的增殖应答。
[0011] 图4示出人源化抗-CD22抗体与Raji细胞的结合，W及所述抗体被所述Raji细 胞的内化。
[0012] 图5示出变体抗体对人CD22的结合亲和力。
[0013] 图6A-抓示出人源化抗-CD22变体的聚集。
[0014] 图7A和7B提供抗-CD22重链（图7A)和轻链（图7B)可变区的氨基酸序列。
[0015] 图8A-E提供抗-CD22抗体的变体抗体9-20的氨基酸序列。
[0016] 图9A-C提供CD22同种型（isoform)的氨基酸序列（上至下；SEQ ID N0:35-38)。
[0017] 定义
[001引术语"抗体"和"免疫球蛋白"包括任何同种型的抗体或免疫球蛋白，保留与抗 原的特异性结合的抗体片段，（包括但不限于Fab、Fv、scFv、和Fd片段），嵌合抗体，人源化 抗体，单链抗体，及包含抗体的抗原结合部分和非抗体蛋白的融合抗体。抗体可W例如用放 射性同位素、产生可检测产物的酶、巧光蛋白等可检测地标记。抗体可W进一步与其它部分 缀合，例如特异性结合对的成员，如生物素（生物素-亲和素特异性结合对的成员）等。抗 体也可W与固体支持物结合，包括但不限于，聚苯己締板或珠等。该术语还涵盖的是F油'、 Fv、F(ab')2,和或其它保留与抗原特异性结合的抗体片段，W及单克隆抗体。抗体可W是单 价或二价的。
[0019]"抗体片段"包含完整抗体的一部分，例如，完整抗体的抗原结合区或可变区。抗体 片段的实例包括F油、F油'、F (油'）2和Fv片段；双抗体；线性抗体狂apata等人，Protein 化g. 8 (10): 1057-1062 (1995));单链抗体分子；和由抗体片段形成的多特异性抗体。抗体 的木瓜蛋白酶消化产生两个相同的称作"Fab"片段的抗原结合片段，所述"Fab"片段各自 具有单一抗原结合位点W及剩余的"Fc"片段（该名称反映了容易结晶的能力）。胃蛋白酶 处理产生了具有两个抗原结合位点并且仍然能够交联抗原的F(ab'）2片段。
[0020] "Fv"是最小的抗体片段，其含有完整的抗原识别位点和结合位点。该区域由紧密 非共价连接的一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域的二聚体组成。在该构型中，各 可变结构域的S个CDR相互作用W在所述Vh-Vl二聚体表面上限定抗原结合位点。共同地， 该六个CDR赋予所述抗体抗原结合特异性。然而，即使单一可变结构域（或抗原特异性的 仅包含S个CDR的Fv的一半）也具有识别和结合抗原的能力，不过亲和力低于整个结合位 点。
[0021] "F油"片段还含有轻链的恒定结构域和重链的第一恒定结构域（CHi)。F油片段与 Fab'片段的不同在于其重链CHi结构域的駿基端添加了若干残基，包括来自抗体较链区的 一或多个半脱氨酸。本文中Fab' -SH是其中恒定结构域的半脱氨酸残基携带游离硫醇基的 F油'的名称。F(油'）2抗体片段原来是作为F油'片段对产生的，其中F油'片段之间具有 较链半脱氨酸。也已知抗体片段的其它化学偶联。
[0022] 来自任何脊椎动物物种的抗体（免疫球蛋白）的"轻链"，基于它们的恒定结构域 的氨基酸序列，可被分至两种明显不同类型（称作K和A)中的一种。基于它们的重链恒 定结构域的氨基酸序列，免疫球蛋白可W被分为不同类型。有五种主要类型的免疫球蛋白： IgA、I曲、I班、IgG、和IgM，并且该些中的几种可W被进一步划分为亚类（同种型），例如， IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA 和 IgA2。
[002引"单链Fv"或"sFv"抗体片段包括抗体的Vh和V為构域，其中该些结构域存在于单 一多肤链中。在一些实施方案中，Fv多肤还包括在Vh和V苗吉构域之间的多肤接头，其使得 sFv形成抗原结合所需的结构。针对sFv的综述，请参见Pluckthun in The化armacology of Monoclonal Antibodies,第 113 卷，Rosenburg and Moore 编车茸，Springer-Verlag, New York,第 269-315 页（1994)。
[0024] 术语"双抗体"指的是具有两个抗原结合位点的小的抗体片段，其片段包含在同 一多肤链（Vh-Vl)中与轻链可变结构域（VJ连接的重链可变结构域（Vh)。通过使用太短 而不能使得同一链上的两个结构域配对的接头，迫使所述结构域与另一链的互补结构域配 对并产生两个抗原结合位点。双抗体更全面地描述于例如EP 404, 097、W0 93/11161、和 Hollinger 等人，Proc.化tl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448(1993)。
[0025] 如本文所用，术语"亲和力"指的是两种试剂可逆结合的平衡常数，并且表达为解 离常数化d)。亲和力可W比抗体对不相关氨基酸序列的亲和力高至少1倍、高至少2倍、高 至少3倍、高至少4倍、高至少5倍、高至少6倍、高至少7倍、高至少8倍、高至少9倍、高 至少10倍、高至少20倍、高至少30倍、高至少40倍、高至少50倍、高至少60倍、高至少70 倍、高至少80倍、高至少90倍、高至少100倍、或高至少1000倍、或更高。抗体对祀蛋白的 亲和力可W是例如约100纳摩尔（nM)至约0. InM，约lOOnM至约1皮摩尔（pM)，或约lOOnM 至约1飞摩尔（fM)或更高。如本文所用，术语"亲合力（avidity)"指的是两种或更多种试 剂的复合物在稀释后对解离的抗性。就抗体和/或抗原结合片段而言，术语"免疫反应性" 和"优先结合"在本文中可互换使用。
[0026] 术语"结合"指的是由于例如共价、静电、疏水、和离子和/或氨键相互作用（包括 例如盐桥和水桥相互作用）两个分子间的直接连接其。主题抗-CD22抗体特异性结合CD-22 多肤内的表位。非特异性结合将指的是具有小于约ICTm的亲和力的结合，例如具有i〇-6m、 i(r5M、i(r4M等亲和力的结合。
[0027] 如本文所用，术语"CDR"或"互补决定区"意指在重链和轻链多肤两者的可变区内 发现的非连续抗原结合位点。CDR描述于K油at等人，J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977); Rabat 等人，U. S. Dept, of Health and Human Services, "Sequences of proteins of immunological interest" (1991) ;Qiothia 等人，J. Mol. Biol. 196:901-917(1987);和 MacCallum等人，J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)，其中所述定义包括当相互比较时重叠的 氨基酸残基或氨基酸残基的子集。然而，应用两种定义之一来指代抗体或接枝的抗体或其 变体的CDR意在属于如本文定义和所用的该术语的范围内。涵盖