用于预防或治疗变态反应的日本柳杉肽的制作方法
【专利说明】用于预防或治疗变态反应的日本柳杉肽 发明领域
[0001] 本发明涉及可用于预防或治疗对日本柳杉（Japanese Cedar)和/或日本扁柏 (Japanese Cypress)花粉的变态反应的多肽和其药物制剂。
[0002] 发明背景
[0003] 树的花粉变应原被认为是人类中变应性疾病的主要诱因。尤其是，对日本柳杉 树（日本柳杉（Cryptomeria Japonica);日文称为'sugi'）花粉的变态反应（也被称 作花粉症）在日本是最常见的变应性呼吸道疾病之一。在日本，日本扁柏树（日本扁柏 (Chamaecyparis obtusa)，日文称为'hinoki'）也会导致花粉症。日本柳杉花粉季从二月 持续到三月，而日本扁柏花粉季从三月持续到四月；过了花粉季症状也可持续。大比例的日 本人群罹患花粉症和变态反应的症状。花粉症和变态反应也在日本柳杉或日本扁柏树为本 土物种或种植该树的其他国家，包括韩国和中国发生。
[0004] 发明概沐
[0005] 本发明提供了适合用于预防或治疗对日本柳杉花粉和/或日本扁柏花粉的变态 反应的多肽或其药学上可接受的盐，所述多肽为多达30个氨基酸长且包括：
[0006] (I)氨基酸序列：DLKIKLRRTIEAEGIP(SEQ ID N0:1 ;Cry26);或
[0007] (II)包含 T 细胞表位的变体序列（T cell epitope-containing variant sequence)，所述包含T细胞表位的变体序列为具有多达7个氨基酸修饰的所述氨基酸序列 (I)，所述氨基酸修饰的每一个独立地为缺失、置换或插入。
[0008] 本发明还提供了包含药学上可接受的载体或稀释剂和本发明的多肽或其药学上 可接受的盐的药物制剂。
[0009] 本发明另外提供了本发明的多肽、盐或药物制剂用于在治疗或预防对日本柳杉花 粉和/或日本扁柏花粉的变态反应的方法中使用。
[0010] 本发明还提供了治疗个体对日本柳杉花粉和/或日本扁柏花粉的变态反应或在 个体中预防对日本柳杉花粉和/或日本扁柏花粉的变态反应的方法，该方法包括对所述个 体施用治疗上或预防上有效量的本发明的多肽、盐或药物制剂。
[0011] 本发明还提供了本发明的多肽或盐用于制备用于预防或治疗对日本柳杉花粉和/ 或日本扁柏花粉的变态反应的药物的用途。
[0012] 本发明另外提供了确定T细胞是否识别本发明的多肽或盐的体外（in vitro)方 法，该方法包括将所述T细胞与所述多肽或盐接触及检测所述T细胞是否被所述多肽或盐 刺激。
[0013] 本发明还提供了制备本发明的药物制剂的方法，包括将本文描述的多肽或盐与药 学上可接受的载体或稀释剂组合。
[0014] 序列描沐
[0015] SEQ ID NO: 1至9提供了如在详述和实施例1至3中列出的氨基酸序列。SEQ ID NO: 1至6对应源自蛋白Cry IFR的氨基酸序列。
[0016] Cry IFR蛋白的Uniprot登录号在实施例1中提供。
[0017] 发明详沐
[0018] 本发明涉及预防或治疗对日本柳杉花粉和/或日本扁柏花粉的变态反应，并提供 了适合用于该用途的多肽和其药学上可接受的盐。所述多肽或盐可在药物制剂中提供。
[0019] 氨基酸序列及变体氨基酸序列
[0020] 本发明的多肽可包括如SEQ ID NO: 1所示的氨基酸序列、由其组成或基本上由其 组成。
[0021] 可选地，本发明的多肽可包括包含T细胞表位的变体序列、由其组成或基本上由 其组成，所述包含T细胞表位的变体序列为具有多达7个氨基酸修饰的如SEQ ID NO: 1所 示的氨基酸序列，所述氨基酸修饰的每一个独立地为缺失、置换或插入。
[0022] 优选的是，变体序列中的修饰不改变存在于相应原始氨基酸序列中的T细胞表位 的功能特性。T细胞表位的功能特性在以下进一步讨论。
[0023] 在优选的变体序列中，保留相应原始氨基酸序列的足够的连续氨基酸以包含T细 胞表位。通常，此变体序列保留原始氨基酸序列的至少8个、优选至少9个连续氨基酸。变 体序列可保留原始氨基酸序列的从8至12个氨基酸或从9至12个氨基酸。
[0024] 变体序列可具有少于7个氨基酸修饰。例如，所述变体序列可具有多达6个氨基 酸修饰，诸如多达5个氨基酸修饰、优选多达4个所述氨基修饰、更优选多达3个氨基酸修 饰、且最优选仅1或2个氨基酸修饰。所有所述修饰独立地为缺失、置换或插入。
[0025] 在特别优选的实施方案中，变体序列具有1或2个氨基酸修饰，所述修饰或每个修 饰独立地为缺失或置换。
[0026] 缺失
[0027] 在包含T细胞表位的变体序列具有为缺失的氨基酸修饰的情况下，缺失的氨基酸 优选地从相应原始氨基酸序列的N-或C-末端移除。即，变体序列为通过从原始序列的 N-和/或C-末端移除1个或更多个连续氨基酸形成的原始氨基酸序列的截短。此变体序 列可任选地不具有其他缺失或不具有其他修饰。
[0028] 缺失的氨基酸可较不优选地从相应原始氨基酸序列中的内部位置移除。从内部位 置移除意指缺失的氨基酸自身不在原始氨基酸序列的N-或C-末端，且也不是作为包含原 始氨基酸序列的N-或C-末端的连续氨基酸序列的部分被移除。即，要称得上是从内部位 置缺失，所述缺失必须独立于从原始氨基酸序列的N-或C-末端的缺失而发生。
[0029] 例如，假定原始序列ABCDEFGH，具有2个氨基酸的内部缺失的变体序列的实例可 以是ADEFGH。因此，B和C从内部位置移除且原始末端残基A和H被保留。相反，从同一原 始序列的N-末端缺失2个连续氨基酸会产生变体序列CDEFGH，其中A和B被移除且C现在 在N-末端。在这种情况下，B的缺失不是从内部位置的移除，因为它是作为包含原始序列 的N-末端的2个连续氨基酸之一被移除。
[0030] 在变体序列中发生多于1个缺失的情况下，缺失的氨基酸可从N-末端和/或C-末 端和/或内部位置的任意组合处移除。优选的变体序列具有不多于1个从内部位置的缺失。 在特别优选的变体序列中，不存在从内部位置的缺失，且缺失的氨基酸从原始序列的N-末 端和/或C-末端的任意组合移除。即，缺失的氨基酸可全部从原始序列的N-末端移除，或 其可全部从原始序列的C-末端移除，或一些氨基酸可从原始序列的每一个末端移除。
[0031] 因此，在一个实施方案中，变体序列为具有1、2、3、4、5、6或7个氨基酸从所述SEQ ID NO: 1的序列的N-末端移除的SEQ ID NO: 1的氨基酸序列。
[0032] 在另一个实施方案中，变体序列为具有1、2、3、4、5、6或7个氨基酸从所述SEQ ID NO: 1的序列的C-末端移除的SEQ ID NO: 1的氨基酸序列。
[0033] 在另一个实施方案中，变体序列为具有若干氨基酸从所述序列的N-末端和C-末 端两端移除的SEQ ID NO: 1的氨基酸序列，只要所述序列具有总计不多于7个修饰。此变 体序列的优选实施方案为具有1、2或3个氨基酸从所述SEQ ID NO: 1的序列的N-末端和 /或C-末端移除且任选地无其他修饰的SEQ ID NO: 1的氨基酸序列。
[0034] 具有至少1个缺失的变体氨基酸序列的具体实例包括：
[0035] -变体序列LKIKLRRTI(SEQIDN0:5)，其为具有l个氨基酸从N-末端移除以及6 个氨基酸从C-末端移除的DLKIKLRRTIEAEGIP(SEQ ID N0:1)的氨基酸序列；
[0036] -变体序列IKLRRTIEA(SEQIDN0:6)，其为具有3个氨基酸从N-末端移除以及4 个氨基酸从C-末端移除的DLKIKLRRTIEAEGIP(SEQ ID N0:1)的氨基酸序列。
[0037] 置换
[0038] 在包含T细胞表位的变体序列具有为置换的氨基酸修饰的情况下，置换可在原始 氨基