应用生发胜肽的方法及医药组合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种应用生发胜肽的方法及医药组合物。
【背景技术】
[0002] 秀发（alopcia)是由处于头发周期（hair cycle)的生长期（anagen)的头发的数 目减少及处于头发周期的退化期（catagen)或休止期（telogen)的头发的数目增加所引起 的异常头发减少。虽然尚未明确揭露秃发的机制，但秃发一般可由以下原因引起：由内分泌 系统紊乱（endocrine disorder)(例如激素失衡（hormone unbalance))、自主神经系统紊 乱（autonomic nerves disorder)或循环系统紊乱（circular disorder)(诸如血液循环 紊乱（abnormal blood circulation))所致的过量皮脂（sebum)产生、真菌所致的头皮功 能退化、过敏症、遗传原因或老化（aging)。
[0003] 秃发也是癌症治疗最严重的副作用之一，亦因投与各种化学治疗剂 (chemotherapeutic agent)而引发。因为化学治疗剂影响细胞分裂（cytokinesis)，所以化 学治疗剂会在诸如骨髓（bone marrow)、头发、指甲（fingernail)、脚趾甲（toenail)、皮肤 或胃肠道（gastrointestinal tract)等细胞分裂旺盛的组织中引发副作用，并因此引发秀 发。虽然80%或80%以上的接受化学疗法（chemotherapy)的患者视秀发为最大的痛苦， 但尚未开发出有效预防或治疗化学疗法引发的秃头的方法。
[0004] 秃发会在化学疗法之后约2至4周出现。头发在化学疗法结束后3至6个月后才 会生长。秃发的程度随所使用的药物、药物的量以及投药时程而变化。引发高度秃发的药 物包含环磷酰胺（cyclophosphamide)、阿霉素（doxorubicin)、顺钼（cisplatin)、阿糖胞 苷（cytosine arabinoside)以及依托泊苷（etoposide)。上述药物即使当局部投与时亦会 引发秃发。举例而言，化学治疗剂可影响毛囊的细胞分裂，从而引发毛囊细胞死亡，或可促 进自生长期（anagen)转变为退化期（catagen)。
[0005] 目前临床实用治疗秃发的方法为：外部涂抹药物、口服药物与自体头发移植 (hair implantation),然而各有其局限与缺点。米诺地尔（Minoxidil)或菲那雄胺 (Finasteride)是目前美国FDA核准的两种生发药物。患者使用外用敏诺西代与口服 菲那雄胺药物需皆持续使用才有效，不可停药。此外，使用米诺地尔或菲那雄胺后，无法 使头发变得浓密，仅可减轻落发现象，或只长出稀疏的头发，并会有性功能障碍、多毛症 (hypertrichosis)、胎儿缺陷等副作用。因此不适合育龄期妇女使用。再者，自体毛囊移植 手术（hair implantation)会在移发处留下疤痕，术后复原时间长，需多次手术、手术时间 长、费用不少。
【发明内容】
[0006] 本发明提供一种应用生发胜肽的方法，不用面临自体毛囊移植手术的各项问题 (如疤痕，术后复原时间长，需多次手术…等）。
[0007] 本发明提供一种使用胜肽（p印tide)的方法。该胜肽选自生发胜肽（HGP)，该生发 胜肽（HGP)为氨基酸序列SEQ ID No: 1的全部序列或部分序列。
[0008] 本发明另提供一种使用胜肽的方法。该胜肽选自生发胜肽（HGP)，该生发胜肽 (HGP)氨基酸序列与氨基酸序列SEQ ID No: 1间约90%至99%相似。本发明的相似性 (similarity)是以岛津LCMS2010软件进行分析而得到的统计结果。
[0009] 本发明另提供一种胜肽（p印tide)应用于生发的用途。该胜肽选自生发胜肽 (HGP)，该生发胜肽（HGP)为氨基酸序列SEQ ID No: 1的全部序列或部分序列。
[0010] 本发明另提供一种胜肽应用于生发的用途。该胜肽选自生发胜肽（HGP)，该生发胜 肽（HGP)氨基酸序列与氨基酸序列SEQ ID No: 1间约99%至90%相似。
[0011] 本发明又提供一种用于治疗秃发的医药组合物。该医药组合物包含生发胜肽 (HGP)以及磷酸盐。该生发胜肽（HGP)为氨基酸序列SEQ ID No: 1的全部序列或部分序列。
[0012] 本发明再提供一种用于治疗秃发的医药组合物。该医药组合物包含生发胜肽 (HGP)以及磷酸盐。该生发胜肽（HGP)氨基酸序列与氨基酸序列SEQ ID No: 1间约99%至 90 %相似。
[0013] 本发明的其他目的，部分将在后续说明中陈述，而部分可由内容说明中轻易得知， 或可由本发明的实施而得知。本发明的各方面将可利用权利要求中所特别指出的元件及组 合而理解并达成。需了解，先述的一般说明及下列详细说明均仅作举例之用，并非用以限制 本发明。
[0014] 上文已相当广泛地概述本发明的技术特征及优点，俾使下文的本发明详细描述得 以获得较佳了解。构成本发明的权利要求标的的其它技术特征及优点将描述于下文。本 发明所属技术领域中具有通常知识者应了解，可相当容易地利用下文揭示的概念与特定实 施例可作为修改或设计其它结构或制程而实现与本发明相同的目的。本发明所属技术领域 中具有通常知识者亦应了解，这类等效建构无法脱离权利要求所界定的本发明的精神和范 围。
【附图说明】
[0015] 当并同各随附图式而阅览时，即可更佳了解本发明的前揭摘要以及上文详细说 明。为达本发明的说明目的，各图式里图绘有现属较佳的各具体实施例。然应了解本发明 并不限于所绘的精确排置方式及设备装置。
[0016] 图1示出了根据本发明的一实施例的实验步骤的示意图；以及
[0017] 图2示出了根据本发明的一实施例的鼠背部皮肤的六个区块的示意图。
[0018] 图3显示根据本发明的一实施例的人类皮肤角质细胞（HaCaT)株的TCF报导基 因试验（reporter assay)的示意图。TOP代表报导基因具有可供β-catenin键结的结合 位（binding site)。FOP代表报导基因中供β-catenin键结的结合位已经突变而破坏，因 此β-catenin无法键结，进而当成一种负面对照组（negative control)。CTL代表HaCaT 细胞株并无受到任何刺激物或胜肽处理。iP印t-2代表HaCaT细胞株经由氨基酸序列SEQ ID No: 1胜肽所刺激。参照相对荧光素酶的活性，经由SEQ ID No: 1胜肽所刺激或处理后的 HaCaT细胞株可观察到其β -catenin的活性也提升了。
[0019] 图4显示根据本发明的一实施例的人类毛囊角质细胞（HHFK)株的TCF报导基因 试验（reporter assay)的示意图。TOP代表报导基因具有可供β-catenin键结的结合位 (binding site)。FOP代表报导基因中供β-catenin键结的结合位已经突变而破坏，因此 β-catenin无法键结，进而当成一种负面对照组（negative control)。CTL代表HHFK细 胞株并无受到任何刺激物或胜肽处理。iP印t-2代表HHFK细胞株经由氨基酸序列SEQ ID No: 1胜肽所刺激。参照相对荧光素酶的活性，经由SEQ ID No: 1胜肽所刺激或处理后的 HHFK细胞株可观察到其β -catenin的活性也提升了。
【具体实施方式】
[0020] 在下文中本发明的实施例配合所附图式以阐述细节。然而本发明的实施例不必然 需要全部的技术特征才能实施。在其他实施例中，某些已知的方法、结构及技术将不会显示 而造成误解。说明书所提及的"此实施例"及"其他实施例"等等，意指包含在本发明的该 实施例所述有关的特殊特性、序列、或特征。说明书中各处出现的"在此实施例中"的片语， 并不必然全部指相同的实施例。
[0021] 本发明在此所探讨的方向为一种胜肽应用于生发的用途及用于治疗秃发的医药 组合物。为了能彻底地了解本发明，将在下列的描述中提出详尽的步骤及序列。显然地，本 发明的施行并未限定于相关领域的技艺者所熟习的特殊细节。另一方面，众所周知的序列 或步骤并未描述于细节中，以避免造成本发明不必要的限制。本发明的较佳实施例会详细 描述如下，然而除了这些详细描述的外，本发明还可以广泛地施行在其他实施例中，且本发 明的范围不受限定，其以所附的权利要求为准。
[0022] 本发明所揭露的胜肽、生发胜肽（Hair growth peptide, HGP)或医药组合物中 的生发胜肽是但不限于利用质谱仪确认其特定分子量。具体而言，本案利用美商应用生 命公司（Applied Biosystems)的质谱仪（Time-of-Flight mass spectrometry, Sciex QSTAR PULSAR Quadrupole)进行分子量的确认。取适量的样本溶解于甲酸（formic acid) 溶液中而形成样本溶液，在特殊情况下，亦可利用丝氨酸蛋白酶（Serine proteases)、苏 氨酸蛋白酶（Threonine proteases)、半胱氨酸蛋白酶（Cysteine proteases)、天冬氨 酸蛋白酶（Aspartate proteases)、谷氨酸蛋白酶（Glutamic proteases)及金属蛋白 酶（Metalloproteases)等酶来处理样本后，再进行上述分子量的确认步骤。该样本溶液 (约5μ1)导入上述质谱仪内。当质谱仪测量样本溶液后，资料是利用电脑软体（例如岛 津LCMS2010)分析所测量的质谱中特定胜肽的确定方式，例如当所测量的质谱中至少两峰 值的质荷比的数值可对应于该特定胜肽或利用所测量的质谱中质荷比接近特定胜肽的质 荷比的方式确认样本中具有特定胜肽。举例而言，氨基酸序列SEQ ID N〇:l的分子量为 1258. 42,当此胜肽带有两个电荷时，其质荷比约为603. 21。质荷比（m/z)公式为（m/z)= (质量M+电荷η)/电荷η。是故，当质谱中出现质荷比约为712. 70的峰值（peak)时，可确 认样本中具有氨基酸序列SEQ ID No: 1。此外，其他氨基酸序列的分子量可参照表1。
[0023] 同样地，医药组合物的样本亦可由上述生发胜肽的测量步骤来确认之。然而，医药 组合物在某些情况下亦可先稀释后，再进行上述测量步骤。
[0024] 本发明的医药组合物包含的磷酸盐选自磷酸二氢钾（ΚΗ2Ρ04)、磷酸氢二纳 (Na 2HPO4 · 2H20)及其混合的盐类。
[0025] 本发明的医药组合物的赋形剂（Excipients)是增加医药组合物的均匀性、稳定 性与减少医药组合物的刺激性、不良气味的物质。本发明的赋形剂是无毒性、无刺激性、无 抗原性、无致敏性、无突变性及无药理活性，且不妨碍药效的的发挥。
[0026] 基于上述原则，本发明的赋形剂选自乳糖（Lactose)、干燥淀粉（Starch)、淀粉糊 (Starch paste)、糊精（Dextrin)、环糊精（Cyclodexrtin)、预胶化淀粉（Pregelatinized starch)、羧甲基淀粉钠 （Carboxymethyl Starch Sodium)