抗etbr抗体和免疫偶联物的制作方法
【专利说明】抗ETBR抗体和免疫偶联物 发明领域
[0001] 本发明涉及包含抗ETBR抗体的免疫偶联物和使用它们的方法。
【背景技术】
[0002] 黑色素瘤是最近发病率已经历惊人增长的皮肤癌的侵入性形式。虽然可以通过局 部病灶的外科切除获得治愈，但黑色素瘤的晚期仅对目前批准的治疗反应较差。IV期转移 性黑色素瘤的5年存活率为大约10%。对于转移性黑色素瘤的新的治疗方法（包括反义 Bcl2、CTLA4抗体、小分子RAF激酶抑制剂和过继性免疫疗法）目前处于临床试验中。这些 最近研宄的一些结果看似鼓舞人心，但对总存活数的持久影响可能将需要包括另外的新药 剂的治疗组合。
[0003] 20多年以前，内皮素 -I (ET-I)从主动脉内皮细胞分离并发现具有强效的血管收 缩活性。之后不久克隆内皮素的受体并且其在各种细胞类型（包括黑色素细胞和黑色素瘤 细胞）中的表达指出不依赖其在内皮中的作用而起作用。现在广为人知的是在胚胎发育期 间内皮素 B受体（ETBR、EDNBR)对于从神经嵴发出的黑色素细胞的忠实衍生是关键的。黑 色素细胞前体依靠 ETBR活性来增殖并从神经管迀移至其最终目的地。具有编码ETBR或内 皮素-3(ET-3)的基因缺陷的小鼠展现皮毛色素沉着缺陷以及也来源于神经嵴的肠神经节 细胞的缺乏。这些特征非常类似于与人类瓦登伯革氏综合症（Waardenburg syndrome)的 WS4变体有关的那些特征，后者已归因于ET-3或ETBR中的种系突变。此综合症的另一种变 体WS2,已映射到小眼相关转录因子（MITF)中的遗传突变，该因子为黑色素细胞发育和黑 色素瘤原癌基因的关键调节剂。
[0004] 将ETBR活性与黑色素母细胞（melanoblast)的命运联系的有力的遗传学证据强 调了该受体在黑色素瘤进展中的潜在作用。据报道在从发育不良性痣（dysplastic nevi) 到转移性黑色素瘤的疾病进展期间ETBR mRNA和蛋白质的表达增加。ETBR活性被2种独立 的小分子抑制剂阻断干扰黑色素瘤细胞和肿瘤异种移植物的生长和存活。这些临床前研宄 将ETBR视为黑色素瘤进展的潜在驱动力。
[0005] 本领域需要用于诊断和治疗ETBR相关的病状（诸如癌症）的靶向ETBR的药剂。 本发明满足该需要并提供其他益处。
[0006] 发明概述
[0007] 本发明提供抗ETBR抗体和免疫偶联物以及使用它们的方法。
[0008] 在一些实施方案中，提供包含结合与细胞毒性剂共价连接的ETBR的抗体的免疫 偶联物，其中所述抗体结合SEQ ID NO :10的氨基酸64至101内的表位。在一些实施方案 中，细胞毒性剂为啦略并苯并二氮杂卓（pyrrolobenzodiazepine)。
[0009] 在一些实施方案中，抗体包含（i)含有SEQ ID NO: 14的氨基酸序列的HVR-H3， (ii)含有SEQ ID NO: 17的氨基酸序列的HVR-L3,和（iii)含有SEQ ID NO: 13的氨基酸序 列的HVR-H2。在一些实施方案中，抗体包含（i)含有SEQ ID N0:12的氨基酸序列的HVR-H1， (ii)含有SEQ ID NO :13的氨基酸序列的HVR-H2,和（iii)含有SEQ ID NO :14的氨基酸 序列的HVR-H3。在一些实施方案中，抗体包含（i)含有SEQ ID NO :12的所述氨基酸序列 的HVR-H1，（ii)含有SEQ ID N0:13的所述氨基酸序列的HVR-H2,（iii)含有SEQ ID NO: 14的所述氨基酸序列的HVR-H3,（iv)含有SEQ ID NO : 15的所述氨基酸序列的HVR-Ll，（V) 含有SEQ ID NO : 16的所述氨基酸序列的HVR-L2,和（vi)含有SEQ ID NO : 17的所述氨基 酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗体包含（i)含有SEQ ID NO :15的氨基酸序列的 HVR-L1，（ii)含有 SEQ ID NO :16 的氨基酸序列的 HVR-L2,和（iii)含有 SEQ ID NO :17 的 氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，抗体包含：a)与SEQ ID NO :8的氨基酸序列具 有至少95 %序列同一性的VH序列；或b)与SEQ ID NO :7的氨基酸序列具有至少95 %序列 同一性的VL序列；或c)如（a)中的VH序列和如（b)中的VL序列。在一些实施方案中，抗 体包含具有SEQ ID NO :8或SEQ ID NO :9的氨基酸序列的VH序列。在一些实施方案中，抗 体包含具有SEQ ID N0:7的氨基酸序列的VL序列。在一些实施方案中，抗体为IgGl、IgG2a 或IgG2b抗体。
[0010] 在一些实施方案中，提供包含结合与细胞毒性剂共价连接的ETBR的抗体的免疫 偶联物，其中所述抗体包含（a)具有SEQ ID NO :8的氨基酸序列的VH序列和具有SEQ ID NO :7的氨基酸序列的VL序列，并且其中所述细胞毒性剂为吡咯并苯并二氮杂卓。
[0011] 在一些实施方案中，免疫偶联物具有式Ab-(L-D) p，其中：(a) Ab为抗体；(b) L为连 接子；（c)D为细胞毒性剂；并且（d)p的范围为1-8。
[0012] 在一些此类实施方案中，D为式A的吡咯并苯并二氮杂卓：
[0013]
【主权项】
1. 一种包含结合与细胞毒性剂共价连接的ETBR的抗体的免疫偶联物，其中所述抗体 结合SEQIDNO:10的氨基酸64至101内的表位，并且其中所述细胞毒性剂为吡咯并苯并 ^?氣杂卓。
2. 根据权利要求1所述的免疫偶联物，其中所述抗体包含（i)含有SEQIDNO: 14的 所述氨基酸序列的狀1?-113，（^)含有5￡〇10勵：17的所述氨基酸序列的爪^-13，和（^1) 含有SEQIDNO:13的所述氨基酸序列的HVR-H2。
3. 根据权利要求1或权利要求2所述的免疫偶联物，其中所述抗体包含（i)含有SEQ IDN0:12的所述氨基酸序列的HVR-H1，（ii)含有SEQIDN0:13的所述氨基酸序列的 HVR-H2,和（iii)含有SEQIDNO:14的所述氨基酸序列的HVR-H3。
4. 根据权利要求1所述的免疫偶联物，所述抗体包含（i)含有SEQIDNO: 12的所述 氨基酸序列的HVR-H1，（ii)含有SEQIDN0:13的所述氨基酸序列的HVR-H2,（iii)含有 SEQIDNO: 14的所述氨基酸序列的HVR-H3,（iv)含有SEQIDNO: 15的所述氨基酸序列的 HVR-Ll，（V)含有SEQIDNO: 16的所述氨基酸序列的HVR-L2,和（vi)含有SEQIDNO: 17 的所述氨基酸序列的HVR-L3。
5. 根据权利要求1至3中任一项所述的免疫偶联物，其中所述抗体包含（i)含有SEQ IDN0:15的所述氨基酸序列的HVR-L1，（ii)含有SEQIDN0:16的所述氨基酸序列的 HVR-L2,和（iii)含有SEQIDNO:17的所述氨基酸序列的HVR-L3。
6. 根据权利要求1至5中任一项所述的免疫偶联物，其中所述抗体包含： a) 与SEQIDNO:8的所述氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VH序列；或 b) 与SEQIDNO:7的所述氨基酸序列具有至少95%序列同一性的VL序列；或 c) 如（a)中的VH序列和如（b)中的VL序列。
7. 根据权利要求6所述的免疫偶联物，其包含具有SEQIDNO:8或SEQIDNO:9的所 述氨基酸序列的VH序列。
8. 根据权利要求6所述的免疫偶联物，其包含具有SEQIDNO:7的所述氨基酸序列的 VL序列。
9. 一种包含结合与细胞毒性剂共价连接的ETBR的抗体的免疫偶联物，其中所述抗体 包含（a)具有SEQIDNO:8的所述氨基酸序列的VH序列和具有SEQIDNO:7的所述氨基 酸序列的VL序列，并且其中所述细胞毒性剂为吡咯并苯并二氮杂卓。
10. 根据权利要求1至9中任一项所述的免疫偶联物，其中所述抗体为IgGl、IgG2a或 IgG2b抗体。
11. 一种根据权利要求1至10中任一项所述的免疫偶联物，其中所述免疫偶联物具有 所述式Ab-(L-D)p，其中： (a) Ab为所述抗体； (b) L为连接子； (c)D为所述细胞毒性剂；并且 (d)p的范围为1-8。
12. 根据权利要求11所述的免疫偶联物，其中D为式A的吡咯并苯并二氮杂卓：
其中波浪线表示与所述连接子的所述共价连接位点； 虚线表示Cl和C2之间或C2和C3之间双键的任选存在； R2独立地选自 H、0H、= 0、= CH 2、CN、R、OR、= CH-RD、= C (Rd)