可溶性ctla4分子用于制备治疗类风湿性关节炎药物的用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物制药领域，更具体地，本发明公开了可溶性CTLA4分子用于制备 治疗免疫性疾病药物中的用途。
【背景技术】
[0002] 类风湿性关节炎是一种进展性风湿性疾病，影响发展中国家大约2%的成年人 (Utsinger，P. D. , et al.，1985Rheuma toid Arthritis，p. 140)。该疾病的特征在于持续 的炎症性滑膜炎，这引起软骨和骨的腐蚀，从而导致外周关节的结构畸形。伴随类风湿性关 节炎的症状包括关节肿胀、关节触痛、炎症、晨僵、和疼痛、特别是弯曲时疼痛。具有晚期关 节炎的受试者受到结构损伤的影响，包括关节破坏和骨腐蚀（见Principals of Internal Medicine，Harrison，13th edition，pagesl648_1655)。另外，患者还可以表现出各种器官 病变的其它临床症状，包括皮肤、肾脏、心脏、肺、中枢神经系统和眼的病变，这是由于与自 身免疫过程相关的血管炎。
[0003] 其它与类风湿性关节炎相关的症状包括红细胞沉降速度增加，以及血清C反应蛋 白（CRP)和/或IL-2受体（IL-2r)水平升高。红细胞沉降速度在几乎所有患有活动性类 风湿性关节炎的患者中都增加。血清C反应蛋白水平也升高，并且与疾病活动程度和发生 进展性关节损伤的可能性相关。此外，活动性类风湿性关节炎患者的血清和滑液中一种由 激活的T细胞产生的可溶性IL_2f^jC平也升高（见Principals oflnternal Medicine, Harrison,13th edition, pagel650)〇
[0004] 类风湿性关节炎也被认为是一种T细胞介导的自身免疫病，它涉及T淋巴细胞和 抗原呈递细胞之间的抗原非特异性细胞间相互作用。一般说来，T细胞应答的强度由T细 胞表面分子与其配体之间的相互作用引发的共刺激应答测定（Mueller, et al.，1989Ann. Rev. Immunol. 7 :445-480)。关键的共刺激信号由T细胞表面受体⑶28和CTLA4与抗原呈 递细胞上的其配体，如B7相关分子CD80 ( 即B7-1)和CD86 (即B7-2)之间的相互作用提供 (Linsley, P. and Ledbetter,J.1993Ann. Rev. I mmunol. 11 :191-212)〇
[0005] 没有共刺激存在时T细胞的激活导致无反应性T细胞应答（Schwartz，R.H.， 1992Cell71 :1065-1068)，其中免疫系统变得对刺激无应答。
[0006] 由于类风湿性关节炎被认为是一种T细胞介导的免疫系统疾病，开发治疗类风湿 性关节炎的新试剂的一种策略是鉴定通过阻断内源性CD28或CTLA4和B7之间的相互作用 而阻断T淋巴细胞和抗原呈递细胞之间的共刺激信号的分子。可能的分子包括经修饰而以 比野生型CTLA4或⑶28更高的亲和力结合B7,从而阻断共刺激信号的可溶性CTLA4。
[0007] ⑶28和CTLA4的可溶形式已经通过融合⑶28和CTLA4的可变区（V)样细胞外 结构域与免疫球蛋白（Ig)恒定区，得到⑶28Ig和CTLA4Ig而构建。CTLA4Ig的核苷酸 和氨基酸序列见图1，该蛋白氨基酸序列从+1位的甲硫氨酸或从-1位的丙氨酸开始，以 +357位的赖氨酸终止。CTLA4Ig相对于⑶28Ig，与⑶80阳性和⑶86阳性细胞的结合更强 (Linsley，P.，et al.，1994Immunityl :793-80)。已经发现许多T细胞依赖性免疫应答被 CTLA4Ig在体内和体外阻断（Linsley，P.，et al.，1991b，supra ;Linsley，P.，et al.，1992a Science257:792-795；Linsley,P.,et al.,1992b J. Exp. Med. 176 :1595-1604；Lenschow, D.J. , et al. 1992Science257 :789-792 ;Tan, P. , et al. ,1992J. Exp. Med. 177 :165-173 ; Turka,L A.,1992Proc. Natl. Acad. Sci. USA89 :11102-11105)〇
[0008] 当前类风湿性关节炎等风湿性疾病的治疗包括给予非特异性细胞毒性免疫抑制 药物，如氨甲喋呤、环磷酰胺、硫唑嘌呤、环孢霉素A和肿瘤坏死因子a (TNFa)阻断剂或 拮抗剂。这些免疫抑制药物抑制受试者的整个免疫系统，长期用药增加感染的风险。而 且，这些药物仅仅延缓类风湿性关节炎的进展，当治疗不连续时，会以更快的速度复发。 此外，这些非特异性药物的长期治疗产生毒性副作用，包括发生某些恶性肿瘤、糖尿病和 肝功能紊乱的倾向。这些药物在有效2-5年后也会逐渐失效（Kelley' s Textbook of Rheumatology,6thEdition, plOOl-1022)。
[0009] 作为选择，作为非特异性免疫抑制和抗炎药的治疗剂已经用于缓解症状。这些 药物是剂量依赖性的，不能防止疾病进展。这些药物包括留体类化合物，如强的松和甲 基强的松龙。甾体类的长期使用也伴随严重的毒性副作用。（Kelley' s Textbook of Rheumatology,6thEdition, p829~833)〇
[0010] 因此，目前类风湿性关节炎的治疗效力有限，导致严重毒性副作用，并且不能连续 长期使用。
【发明内容】
[0011] 本发明提供了通过给予受试者可溶性CTLA4分子治疗类风湿性关节炎的方法，该 可溶性CTLA4分子与B7阳性细胞上的B7分子结合，从而抑制内源性B7分子与T细胞上 的CTLA4和/或⑶28结合。用于本发明方法的可溶性CTLA4分子为CTLA4Ig。更佳地，本 发明提供了通过给予受试者可溶性CTLA4分子治疗生物或非生物制剂病情改善抗风湿药 (DMRDs)疗效不佳的成人活动性类风湿关节炎，其中DMRDs可为氨甲喋呤、环磷酰胺、硫 唑嘌呤、环孢霉素A或肿瘤坏死因子a (TNFa)阻断剂或拮抗剂之一或其组合。
[0012] 本发明也提供一种用于治疗风湿性疾病等免疫系统疾病的药物组合物，包含一种 可药用载体和生物有效试剂，如可溶CTLA4分子，该组合物可用于制备治疗类风湿性关节 炎的药物，尤其是生物或非生物制剂病情改善抗风湿药（DMRDs)疗效不佳的成人活动性 类风湿关节炎。
[0013] 本发明也包括含有治疗免疫系统疾病的药物组合物的试剂盒。在一种实施方案 中，用包含一种或多种本发明的药物组合物的试剂盒治疗免疫系统疾病，如类风湿性关节 炎，尤其是生物或非生物制剂病情改善抗风湿药（DMRDs)疗效不佳的成人活动性类风湿 关节炎。例如，该药物组合物包含一种有效量的与B7阳性细胞上的B7分子结合的可溶性 CTLA4突变分子，从而阻断B7分子与T细胞上的CTLA4和/或⑶28结合。此外，该试剂盒 可以含有一种或多种与本发明的药物组合物联用的免疫抑制剂，包括，但不限于，皮质类固 醇、非甾体类抗炎药（如Cox-2抑制剂）、环孢霉素、强的松、硫唑嘌呤、氨甲喋呤、TNF a阻 断剂或拮抗剂、infliximab、任何定位于炎性细胞因子的生物试剂、羟基氯奎、柳氮磺胺批 P定（sulphasalazopryine)、金盐、etanercept 和 anakinra。
[0014]本发明包括用于治疗免疫系统疾病的药物组合物，其中包含药学有效量的可溶性 CTLA4分子。在某些实施方案中，免疫系统疾病是由⑶28/CTLA4/B7相互作用介导的。可 溶性CTLA4分子优选是具有野生型序列的CTLA4分子和/或在CTLA4的细胞外结构域具有 一个或多个突变的可溶性CTLA4分子。该药物组合物可以包含可溶性CTLA4蛋白分子和/ 或核酸分子，和/或编码这些分子的载体。在优选实施方案中，所述可溶性CTLA4分子是以 图1所示（SEQ ID Nos : 1-2)的+1位的甲硫氨酸或-1位的丙氨酸开始，以+357位的赖氨 酸终止的CTLA4Ig ;更优选的实施方案中，所述可溶性CTLA4分子是以图1所示的+1位的 甲硫氨酸开始，以+357位的赖氨酸终止的CTLA4Ig。
[0015]这些组合物可以进一步包含其他治疗剂，包括，但不限于药物毒素、酶、抗体或缀 合物。
[0016]如同本领域中的标准实践，提供了包含与本领域技术人员公知的适当载体或佐剂 混合的本发明的分子的药物组合物。这些药物组合物优选包含适当的载体和佐剂，包含任 何当与本发明的分子（如可溶性CTLA4分子，例如CTLA4Ig)组合时保持该分子的活性并且 与受试者的免疫系统无反应的物质。这些载体和佐剂可以包括但并不仅限于，离子交换剂、 铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白如人血清白蛋白，缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨 酸钾、饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、磷酸缓冲液、水、乳状液（如油/水乳状液）、 盐或电解液如硫酸鱼精蛋白、磷酸二氢钠、磷酸氢钠、氯化钠、锌盐、硅胶、三硅酸镁、聚乙烯 吡咯酮、纤维素基物质和聚乙二醇。其他载体可以包括无菌溶液、片剂，包括包衣片剂和胶 囊。这些载体一般含赋形剂如淀粉、牛奶、糖（如蔗糖、葡萄糖、麦芽糖）、某些类型的粘土、 明胶、硬脂酸或其盐、硬脂酸镁或硬脂酸镁钙、滑石粉、植物脂肪或油、树胶、乙二醇或其他 已知赋形剂。这些载体也可以包括芳香剂和着色剂或其他成分。包含这些载体的组合物是 通过本领域已知的常规方法配制的。这些组合物也可以在脂质体等各种液体组合物，以及 聚合物微球体等各种聚合物组合物中配制。
[0017]本发明提供了各种给予可溶性CTLA4分子的局部或全身方法，这些方法包括但静 脉内、肌肉内、腹膜内、口服、吸入、和皮下方法，以及可植入泵、连续输注、基因治疗、脂质 体、栓剂、局部接触、载体、胶囊和注射方法。与载体复合的治疗剂通常