一种受体抗体融合蛋白的液体制剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种包含TNFR:Fc的水性制剂、该组合物的制备方法、给药方法以及 治疗用途。
【背景技术】
[0002] 肿瘤坏死因子（TNF)是一种涉及炎症和急性期反应的多肽细胞因子。TNF-a大量 存在于患有类风湿性关节炎或克罗恩病的人中。通过生物制剂进行TNF-a的直接抑制在 类风湿性关节炎的治疗中已经取得显著进步，并且这种促炎细胞因子的细胞外抑制已经被 确认为一种有效的治疗。一种这样的生物制剂是依那西普。
[0003] 依那西普（TNFR :Fc)是一种二聚体融合蛋白，该二聚体融合蛋白由连接到人IgG 的Fc部分的人75千道尔顿（p75)肿瘤坏死因子受体（TNFR)的细胞外配体结合部分组成。 依那西普的Fc组分由CH2结构域、CH3结构域以及铰链区组成，而CHl结构域是缺乏的。它 是在中国仓鼠卵巢哺乳动物细胞表达系统中通过重组DNA技术产生的。它由934个氨基酸 组成，并且具有大致150千道尔顿的表观分子量。
[0004] 通常，蛋白质具有非常短的半寿期，并且在暴露于各种因素(如不适宜温度、 水-气界面、高压、物理/机械应力、有机溶剂和微生物污染)之后经历变性(如聚集、解离和 吸附在容器表面)。因此，变性蛋白失去内在的理化性质和生理活性。蛋白质的变性通常是 不可逆的，因此蛋白质一旦变性，它们的天然性质可能不会恢复到初始状态。
[0005] 在生物制药行业中，使用重组DNA技术制备的蛋白质在水性制剂中的长期储存通 常是一项困难的任务。为了克服水性制剂中的蛋白质的稳定性问题，通过冻干(冷冻干燥） 制备了更加稳定的治疗性蛋白产品。冻干产品通常伴随有用于复原的无菌水性介质。在复 原之后，这些制剂典型地具有短的有效贮存寿命，即使在低温(例如，5°C )下保存时也是如 此。在市场上可得到的呈冻干形式的TNF-a抑制剂的实例包括Enbrei?和Remicade?，并 且这两种组合物应当在使用之前复原。
[0006] 提高蛋白多肽稳定性的典型实践可以通过改变制剂中的要素的浓度来解决，或 者通过添加赋形剂来改变该制剂。
[0007] US5580856公开了通过在干燥蛋白质再水合时添加一种复原稳定剂来稳定制剂中 干的燥蛋白质以防生物活性的损失。在此还描述了一种用于通过将该干燥组合物溶解于一 种包含该复原稳定剂的溶剂中来生产一种制剂的试剂盒。
[0008] US6171586公开了一种稳定的水性药物制剂，该药物制剂包括未经事先冻干的治 疗有效量的一种抗体、将pH保持在大约4. 5到大约6. 0的范围内一种缓冲剂、一种表面活 性剂以及一种多元醇，同时还公开了这种制剂的用途。
[0009] EP1314437涉及一种稳定化的制剂的发明，该稳定化的制剂含有在甘氨酸缓冲剂 和/或组氨酸缓冲剂中的一种抗体，同时还提供了一种含蛋白质的稳定化的制剂的制备方 法，这些方法包括用一种碱性氨基酸或一种碱性氨基酸衍生物或它们的一种盐来调节pH。
[0010] EP1478394涉及含有一种免疫球蛋白的Fe结构域的多肽的适合于长期储存的一 种水性药物组合物、制造方法、给药方法以及包含该组合物的试剂盒。
[0011] 因此，令人希望的是提供在冷藏下具有增强的稳定性并且在正常室温下具有至 少中等的稳定性的TNFR:Fc的液体制剂，从而避免来自复原程序的不便和错误的可能性。
【发明内容】
[0012] 本发明的药物制剂包括一种纯化的多肽、缓冲剂、聚集抑制剂、渗透压调节剂、稳 定剂、表面活性剂、螯合剂、以及任选地防腐剂，它们呈适当的组合。
[0013] 针对治疗用途，单克隆抗体或受体抗体融合蛋白（如TNFR = Fc)以高浓度使用，并且 已知高浓度的蛋白质会增加聚集。在一个方面，在制剂组合物中需要聚集抑制剂来使产品 保持在天然状态并且是具有生物活性的，具有延长的保质期和增强的储存条件。存在着几 种通过增加表面张力、优先结合或水合以及优先相互作用而充当聚集抑制剂的氨基酸。
[0014] 聚集抑制剂降低多肽的形成聚集体的趋向。氨基酸(如天冬氨酸、苯丙氨酸、谷氨 酸、丙氨酸、组氨酸以及赖氨酸)长时间地减少制剂中的含有Fc结构域的多肽的聚集并且是 本发明的优先实施方案。
[0015] 在另一个方面，需要缓冲剂来维持制剂的pH值。本发明的缓冲系统包括磷酸缓 冲剂、碳酸氢盐缓冲剂、丁二酸盐缓冲剂、乙酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、氨基酸类、以及 Tris缓冲剂，它们单独地或者以适当的组合而使用，提供所希望的从5. . 5到7. 5范围的pH 值。
[0016] 在本发明中，表面活性剂用来防止TNFR = Fc吸附在小瓶、安瓿瓶、圆柱状管 (carpoule)、药筒、或注射器的表面上。表面活性剂降低蛋白质溶液的表面张力，从而防止 其吸附或聚集在一个疏水表面上。适用于本发明制剂的表面活性剂包括但不限于聚山梨 酯(例如聚山梨酯20或80);帕洛沙姆(例如帕洛沙姆188或168);山梨坦酯及其衍生物； Triton ;十二烷基硫酸钠；辛基糖苷钠；十二烷基、十四烷基、亚油酰-或硬脂酰-磺基甜 菜碱；十二烷基、十四烷基、亚油酰或硬脂酰-肌氨酸；亚油酰_、十四烷基或十六烷基-甜 菜碱；月桂酰胺丙基_、椰油酰胺丙基_、亚油酰胺丙基_、肉豆蘧酰胺丙基_、棕榈酰胺丙 基-或异硬脂酰胺丙基甜菜碱(例如月桂酰胺丙基）；肉豆蘧酰胺丙基_、棕榈酰胺丙基-或 异硬脂酰胺丙基-二甲胺；甲基椰油酰基牛磺酸钠或甲基油酰基牛横酸二钠；和M0NAQUAT? 系列（Mona Industries, Inc.，Paterson, N.J.);聚乙二醇，聚丙醇以及乙二醇和丙二醇的 共聚物(例如，Pluronics, PF68等)。它们单独地或组合使用。
[0017]在一个实施方案中，在本发明中使用的稳定剂选自下组，该组由以下各项组成：氨 基酸类，如甘氨酸、精氨酸、丙氨酸、赖氨酸、脯氨酸、丝氨酸，等等以及其他们的盐，它们单 独地或组合使用；单糖，如葡萄糖和甘露糖以及它们的类似物，它们单独地或组合使用；二 糖类，如蔗糖、海藻糖、麦芽糖和它们的类似物，它们单独地或组合使用；糖醇类，如甘露糖 醇、山梨糖醇以及它们的类似物，它们单独地或组合使用；以及多糖类，如葡聚糖、聚乙二醇 以及它们的类似物，它们单独地或组合使用。
[0018]渗透压调节剂被理解为是一种促成溶液的克分子渗透压浓度的分子。优选地，一种药物组合物的克分子渗透压浓度被调节以便最大限度地提高活性成分的稳定性，同时也 将给药时患者的不适降低至最低限度。适用于改变克分子渗透压浓度的渗透压调节剂的实 施例包括，但不限于，氨基酸(精氨酸、半胱氨酸、组氨酸，等等)、盐类(氯化钠、氯化钾、氯化 钙等)、和/或糖类(鹿糖、葡萄糖、甘露醇以及它们的类似物)。
[0019] 依那西普在储存过程中倾向于片段化，所以需要一些片段化抑制剂来制造针对依 那西普的最佳制剂组合物。已知对防止在许多产品(如干扰素、阿仑单抗，等等)中的片段化 有影响的EDTA被用于本制剂中。
[0020] 螯合剂稳定或防止自由金属离子与感兴趣的蛋白质反应。可以用于本发明中的螯 合剂的实例包括，但不限于，EDTA(乙二胺四乙酸)、HEDTA(羟乙基乙二胺三乙酸)、NTA(次 氮基三乙酸)、DTPA(乙二烯三胺五乙酸）以及柠檬酸。
[0021] 防腐剂是指添加到制剂中作为一种抑菌剂的组合物或物质。优选地，本发明的含 有保藏的TNFR: