具有PEG干扰素α-2b的稳定的药物组合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明提供了包括PEG-干扰素a -2b的稳定的药物组合物。本发明还提供了制 备该组合物的方法、该组合物的给药方法和包括该组合物的试剂盒。
【背景技术】
[0002] 干扰素为真核细胞响应病菌（如细菌、病毒或寄生虫）的感染而分泌的细胞因 子。因此，这些蛋白质类对各种感染（主要是病毒感染和增殖异常，如癌症）具有治疗潜力 (Pfeffer 等，1998Cancer Research 58, 2489-2499) 〇
[0003] 人干扰素基于其细胞来源和抗原性分为3类：α -干扰素（白细胞）、β -干扰 素（成纤维细胞）和γ-干扰素 （Β细胞）（US 7632491)。重组α干扰素在超过二十年以 前首次被US FDA批准用于治疗多毛细胞白血病。从那以后，不同类型重组干扰素是市售 的，用于治疗很多疾病，如慢性丙型肝炎、恶性黑色素瘤、非霍奇金淋巴瘤等（PfefTer等， 1998Cancer Research58, 2489-2499 和 Wang 等，2002Advanced Drug Delivery Reviews 54,547-570)〇
[0004] 然而，与很多其他肠胃外给药蛋白质类类似，其使用由于抗原性（导致形成中和 抗体）和短的药理学半衰期（因此导致给药重复的剂量以实现期望的血浓度）具有一些限 制（US6180096)。该问题可通过将这些蛋白质与聚合物（如聚乙二醇（PEG))共轭来克服。 PEG为非免疫原性和无毒的聚合物。此外，其溶于水和多种有机溶剂。当蛋白质与PEG部 分化学地共轭时，该蛋白质的溶解性提高（US 700314)。聚乙二醇化可提高分子的药物代 谢动力学性质，产生热和物理稳定性，抗酶降解，和延长体内循环半衰期（由于从身体的清 除减少）。然而，PEG分子的合适尺寸、蛋白质-PEG比和聚乙二醇化工艺参数的选择对聚乙 二醇化工艺和获得生物活性蛋白质分子是重要的（Bailon等，1998Pharm. Sci. Technology Today，第 1 卷，第 8 期，352-356)。
[0005] 该共轭物的稳定性可通过合适的组合物来获得，该组合物可使共轭蛋白质保持为 稳定形式且通过如冷冻干燥/冻干法的技术将水从组合物中除去（US20100074865)。
[0006] 美国专利No. US 5730969公开了一种蛋白质组合物，该蛋白质组合物包括有效稳 定量的环糊精。
[0007] 美国专利 No. US7846427、US6180096、US6250469、US5766582 和 US7632491 公开了 包括PEG-干扰素的药物组合物。
[0008] PCT 申请 WO 2010064258、WO 200135987、W02008062481 和 W02004096263 公开了 干扰素组合物。
[0009] 本发明涉及一种包括聚乙二醇干扰素a -2b共轭物的稳定组合物。
【发明内容】
[0010] 在一个实施例中，本发明涉及一种稳定的药物组合物，该药物组合物包括生物活 性的PEG-干扰素 a -2b (PEG-IFN a -2b)和冷冻保护剂，该冷冻保护剂选自由2-羟基丙基 β-环糊精（HPBCD)、三氯蔗糖和聚乙烯吡咯酮4000 (PVP 4000)构成的组。
[0011] 在另一实施例中，本发明涉及一种稳定的药物组合物，该药物组合物包括 PEG-IFNa -2b、冷冻保护剂和缓冲剂，该冷冻保护剂选自由HPB⑶、三氯蔗糖和PVP 4000构 成的组。
[0012] 在再另一实施例中，本发明涉及一种稳定的药物组合物，该药物组合物的pH在 4. 0至8. 0范围内，该药物组合物包括PEG-IFN a -2b、冷冻保护剂和缓冲剂，该冷冻保护剂 选自由HPBCD、三氯蔗糖和PVP 4000构成的组，且该缓冲剂选自由磷酸钠或磷酸钾、柠檬酸 盐、左旋组氨酸和左旋精氨酸盐酸盐和其组合构成的组。
[0013] 在再另一实施例中，本发明涉及一种稳定的药物组合物，该药物组合物进一步包 括一种或多种表面活性剂。
[0014] 在再另一实施例中，本发明涉及一种稳定的药物组合物，该药物组合物进一步任 选地包括一种或多种张度剂以保持该药物组合物的张度。
[0015] 在再另一实施例中，本发明涉及一种制备本发明的稳定的药物组合物的方法。
[0016] 在再另一实施例中，本发明涉及一种使用本发明的稳定的药物组合物治疗人体疾 病的方法。该疾病可为丙型肝炎、乙型肝炎或黑素瘤（包括完全淋巴结切除术的确定性外 科手术切除术的84天内的显微镜下或肉眼可见的淋巴结转移）。
[0017] 以下提出的本发明的一个或多个实施例的细节本身仅为说明性的且不用于限制 本发明的范围。本发明的其他特征、目的和优点将从说明书和权利要求书中变得明显。
【具体实施方式】
[0018] 本发明提供了一种稳定的药物组合物，该药物组合物包括PEG-IFNa -2b和冷冻 保护剂，该冷冻保护剂选自由HPBCD、三氯蔗糖和PVP 4000构成的组。更特别地，该稳定的 药物组合物为无菌的且准备用于肠胃外给药。
[0019] 本发明的药物组合物包括纯化PEG-IFNa -2b和冷冻保护剂、缓冲剂、表面活性 剂、张度改性剂和其适当组合的其他赋形剂，该冷冻保护剂选自由HPBCD、三氯蔗糖和PVP 4000构成的组。
[0020] 本发明的稳定的药物组合物包装在小瓶、预装注射器或药管中。优选的包装为小 瓶。
[0021] 在本发明的实施例中，使用由使用大肠杆菌细胞的重组DNA技术获得的PEG12qqc^ 扰素 PEG-IFNa -2b。PEG-IFNa -2b 的浓度为 0· 03mg/ml 至 2mg/ml。
[0022] 在本发明的另一实施例中，PEG-IFN a -2b组合物包括冷冻保护剂，该冷冻保护剂 选自由HPB⑶、三氯蔗糖和PVP 4000构成的组。冷冻保护剂的浓度为约10至250mg/ml。
[0023] 在本发明的再另一实施例中，缓冲剂选自由磷酸盐-柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓 冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、组氨酸乙酸盐、组氨酸-组氨酸盐酸盐、左旋组氨酸、左旋精氨酸盐 酸盐、碳酸氢盐缓冲剂、琥珀酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、Tris缓冲剂（三羟甲基氨基甲 烷缓冲剂）（单独或组合）构成的组。本发明的优选缓冲剂为磷酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲 剂、磷酸盐-柠檬酸盐缓冲剂、左旋组氨酸或左旋精氨酸盐酸盐。溶液中的缓冲剂的浓度为 5mM至lOOmM，单独缓冲剂组分的摩尔浓度在ImM与IOOmM之间的范围内。
[0024] 在本发明的再另一实施例中，本发明的缓冲剂体系将组合物的pH保持在4. 0至 8.0范围内。优选的pH为6.4至7.2。
[0025] 在本发明的再另一实施例中，表面活性剂选自由基于聚山梨醇酯的非离子型表面 活性剂、十二烷基硫酸盐（SDS)、卵磷脂（单独或组合）构成的组。另外，聚山梨醇酯选自聚 山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。优选的表面活性剂为聚山梨醇酯80。表面活性剂的浓度为 约 0· 01 至 1.0 mg/ml。
[0026] 在本发明的再另一实施例中，稳定的冻干组合物任选地包括肠胃外可接受的张度 剂。张度剂选自由盐类（例如氯化钠、氯化钾、氯化钙）和糖类（例如甘露醇、蔗糖、葡萄糖 等等）和/或氨基酸类（例如精氨酸、半胱氨酸、组氨酸等等）构成的组。优选的张度剂为 氯化钠和甘露醇。更优选的张度剂为氯化钠。氯化钠的优选范围为〇至9mg/ml。
[0027] 本发明还可进一步包括其他药学上稳定的赋形剂，诸如防腐剂、抗螯合剂。赋形剂 可选自包括糖类（选自包括甘露醇、半乳糖和麦芽糖的组）、EDTA、尿素、苯酚、间苯甲酚、对 苯甲酚、邻苯甲酚的组。
[0028] 在一个实施例中，本发明为在复水剂（reconstituting a