一种利用新型表面活性剂制备的原花青素柔性纳米脂质体及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药技术领域，涉及一种天然抗氧化剂原花青素柔性纳米脂质体及其 制备方法。
【背景技术】
[0002] 原花青素是由（+)_儿茶素、（-)-儿茶素及（-)-表儿茶素没食子酸酯通过C4-C8 键或(;-(:6键连接而成的不同聚合度的多酚物质，广泛存在于葡萄籽、银杏、柏树和松树皮 等植物中。原花青素（OPC)具有强抗氧化作用，人体吸收度高，可以清除体内的自由基和活 性氧，预防由于人体血液中低密度脂蛋白（LDL)的氧化为主要原因而引起的动脉硬化。另 外还具有一些令人注目的生理功效，如降压效应与对心肌的保护作用、抗辐射作用、抗微生 物、促进细胞增殖活性、抗突变和抗癌等。
[0003] 柔性纳米脂质体又名传递体、变形脂质体，是通过自身膜的高度变形性，以渗透压 差为驱动力，能高效地穿透比它本身小数倍孔道的类脂聚集体。其主要成分为磷脂和表面 活性剂（如胆酸钠、去氧胆酸钠等）。粒径多为数十至数百纳米，外观为胶体溶液。具有高 效渗透性、高度柔韧性和亲水性。它与普通脂质体最大的区别就是加入了表面活性剂，使其 具有高度变形性。该类脂质体受角质层水合所产生的渗透压的影响能发生变形并被"挤入" 角质层，因而显著增加药物的经皮渗透更多的药物保留在皮肤中，减少药物进入血循环，在 表皮和真皮内形成药物贮库，形成一个缓释模型，使药物持久地对病变局部起治疗作用。同 时柔性纳米脂质体能改变原型药物的理化性质，增强药物的药理作用及疗效，减少胃肠道 刺激性，降低药物不良反应，提高生物利用度。因此柔性纳米脂质体越来越多地用作各种大 分子、水溶性药物或脂溶性药物的载体。
[0004] 原花青素水溶性较好，但是稳定性较差，且天然原花青素分子量较大，结构复杂， 不利于人体组织吸收。因此，限制了原花青素在各个领域的广泛应用。已有研宄制备了原 花青素柔性纳米脂质体，但是其忽略了不同的表面活性剂对柔性纳米脂质体制备的影响， 其制备的柔性纳米脂质体包封率低，粒径大，体外缓释作用差。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是探索一种新型表面活性剂以制备包封率高、粒径小、体外缓释作 用好、稳定性好、透皮吸收效果好的原花青素柔性纳米脂质体。
[0006]本发明是通过如下技术方案实现的：
[0007]本发明的原花青素柔性纳米脂质体包括原花青素、磷脂、胆固醇、表面活性剂，其 中，所述的表面活性剂为Tween80、Span20或去氧胆酸钠。
[0008] 磷脂、胆固醇、表面活性剂的质量比为8:1:1-8:2 :2;优选8:1.4:1.4-8:2:2。 [0009]磷脂、原花青素的质量比为8 :0. 5- 8 :1 ;优选8 :0. 7- 8 :1。
[0010] 所述磷脂优选大豆卵磷脂。
[0011] 本发明的原花青素柔性纳米脂质体通过如下方法制备：
[0012] 按比例称取磷脂、胆固醇和表面活性剂，加入氯仿、甲醇或者无水乙醇氯仿混合 液，使磷脂的浓度达到质量体积比1-2%;振荡充分混合后，置于旋转蒸发器上，40- 50°C恒 温水浴中，减压蒸发除去有机溶剂使类脂溶液形成一层均匀薄膜；向薄膜中加入一定量含 原花青素的〇. 9%氯化钠水溶液，其中，原花青素浓度为l-2mg/mL，轻摇，将脂膜洗脱并旋 转水合l-2h，得到原花青素脂质体混悬液；再将混悬液置于冰水中探头超声一段时间5- 20min，每5s间歇一次，优选10 - 15min，超声功率50W，即得；于冰箱4°C避光保存。对原花 青素柔性纳米脂质体进行评价，包括包封率、粒径、体外缓释作用、稳定性及透皮渗透量。
[0013] 试验结果表明，本发明具有如下优点：
[0014] 1、制备的原花青素柔性纳米脂质体把原花青素包裹在脂质体内水相中，降低了其 对外界环境的敏感度，增强其稳定性。
[0015] 2、制备的原花青素柔性纳米脂质体包封率高、粒径小、体外缓释作用好、稳定性 高、透皮吸收好。
[0016] 3、工艺简单，易于工业化。
[0017] 4、反应条件温和，安全环保。
【附图说明】
[0018] 图1为实施例5条件下原花青素柔性纳米脂质体、原花青素普通脂质体和原花青 素溶液的体外释药图。
[0019] 图2为实施例5条件下原花青素柔性纳米脂质体、原花青素普通脂质体和原花青 素溶液在不同温度下的保留率图
[0020] a为原花青素柔性纳米脂质体、原花青素普通脂质体和原花青素溶液在4°C下 的保留率图；b为原花青素柔性纳米脂质体、原花青素普通脂质体和原花青素溶液在室温 (25°C)下的保留率图；c为原花青素柔性纳米脂质体、原花青素普通脂质体和原花青素溶 液在室外温度（30°C)的保留率图。
[0021] 图3为实施例5条件下原花青素柔性纳米脂质体、原花青素普通脂质体和原花青 素溶液的皮肤渗透量图。 具体实施方案：
[0022] 本发明可以按照下列实施例进行具体说明其制备过程和效果。
[0023] 实施例1:
[0024] 1、分别称取300mg大豆卵磷脂、37. 5mg胆固醇和37. 5mgTween80,加入15mL无水 乙醇氯仿混合液（I:2);
[0025] 2、振荡充分混合后，置于旋转蒸发器上，40- 50°C恒温水浴中，减压蒸发除去有机 溶剂使类脂溶液形成一层均匀薄膜；
[0026] 3、称取37. 5mg原花青素并溶解于37. 5mL含0. 9 %氯化钠的水溶液中，将原花青素 溶液加入薄膜中，轻摇，将脂膜洗脱并旋转水合lh，得到原花青素脂质体混悬液；
[0027] 4、再将混悬液置于冰水中探头超声IOmin即得，超声5s，间歇5s，超声功率50W; 于冰箱4°C避光保存；
[0028] 5、同法制备原花青素溶液和不含Tween80的普通脂质体；
[0029] 6、所得的原花青素柔性纳米脂质体包封率为78. 9%，粒径为139. 4nm;原花青素 普通脂质体包封率为61. 1 %，粒径为279. 4nm。
[0030] 实施例2 :
[0031] 1、分别称取300mg大豆卵磷脂、52. 5mg胆固醇和52. 5mgSpan20,加入15mL无水 乙醇氯仿混合液（I:2);
[0032] 2、振荡充分混合后，置于旋转蒸发器上，40- 50°C恒温水浴中，减压蒸发除去有机 溶剂使类脂溶液形成一层均匀薄膜；
[0033] 3、称取26. 25mg原花青素并溶解于26. 25mL含0. 9 %氯化钠的水溶液中，将原花青 素溶液加入薄膜中，轻摇，将脂膜洗脱并旋转水合lh，得到原花青素脂质体混悬液；
[0034] 4、再将混悬液置于冰水中探头超声20min即得，超声3s，间歇3s，超声功率30W; 于冰箱4°C避光保存；
[0035] 5、同法制备原花青素溶液和不含Span20的普通脂质体；
[0036] 6、所得的原花青素柔性纳米脂质包封率为67. 2%，粒径为238. 4nm原花青素普通 脂质体包封率为60. 2%，粒径为218. 6nm。
[0037] 实施例3 :
[0038] 1、分别称取300mg大豆卵磷脂、37. 5mg胆固醇和37. 5mgTween80,加入15mL无水 乙醇氯仿混合液（I:2);
[0039] 2、振荡充分混合后，置于旋转蒸发器上，40- 50°C恒温水浴中，减压蒸发除去有机 溶剂使类脂溶液形成一层均匀薄膜；
[0040] 3、称取18. 75mg原花青素并溶解于18. 75mL含0. 9 %氯化钠的水溶液中，将原花青 素溶液加入薄膜中，轻摇，将脂膜洗脱并旋转水合lh，得到原花青素脂质体混悬液；
[0041] 4、再将混悬液置于冰水中探头超声5min即得，超声7s，间歇7s，超声功率70W;于 冰箱4 °C避光保存；
[0042] 5、同法制备原花青素溶液和不含Tween80的普通脂质体；
[0043]6、所得的原花青素柔性纳米脂