抗肿瘤中药提取物的提取方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药领域，具体而言，涉及一种抗肿瘤中药提取物及其提取方法和应 用。
【背景技术】
[0002] 我国幅员辽阔，自然条件多样，分布着极为丰富的传统药物资源，是世界上天然药 物资源种类最多，栽培历史最悠久的国家。且有许多地道药材驰名中外，并出口到100多个 国家和地区。
[0003] 中草药具有取材天然，作用平稳，毒副作用小等西药无法比拟的独特优点，随着社 会的进步，生产力的发展，人们越来越追求健康长寿，现代人越来越把注意力从化合成药转 向天然药，希望从天然药中开发出更为安全有效的新药以替代前者，从而减少药源疾病的 发生。因此，发展中草药不仅传承了中华民族千百年的精华，也具有广大的市场前景及经济 效益。
[0004] 另外，中草药是天然物质，保持了各种成分的自然性和生物活性，其成分易被吸收 利用，不能被吸收的也能顺利排出体外，在体外被细菌等分解。其毒副作用小，并且动物机 体不产生抗药性；而一般的化学药物成分会积累在机体内或长期残留；对动物机体具有较 大的毒副作用。
[0005] 肿瘤是指机体在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形成的新生物，是目 前医学领域中颇为难治的疾病，而且随着人们工作压力的加大，环境污染的加剧等因素，月中 瘤呈现出多发趋势。而传统的肿瘤（恶性肿瘤）治疗多采用西药、放疗、化疗或手术等手 段，费用昂贵，且对机体的损伤很大；因此，从中药草为出发点，提供一种具有抗肿瘤药物及 其制备方法是人们亟待解决的一个技术问题。
[0006] 有鉴于此，特提出本发明。
【发明内容】
[0007] 本发明的第一目的在于提供一种抗肿瘤中药提取物的提取方法，该方法以罂粟 科、荷青花属植物的根茎为原料，实现了抗肿瘤中药提取物的制备。该抗肿瘤中药提取物能 够提高HT-29和SW620细胞Gl期细胞的百分率，并且能够降低该肿瘤细胞S期和G2期细 胞的比率，具有诱导HT-29和SW620细胞发生Gl期阻滞，并抑制该两种肿瘤细胞的增殖能 力的效果。
[0008] 本发明的第二目的在于提供上述的方法提取的抗肿瘤中药提取物的用途。
[0009] 该抗肿瘤中药提取物处理结肠癌细胞后，会使得活化形式的caspase-3和 caspase-9表达量增加，并且会提高促进细胞凋亡蛋白的表达量，降低抑制细胞凋亡蛋白的 表达量；因此可用于制备抗肿瘤药物中的应用中。
[0010] 为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
[0011] 一种抗肿瘤中药提取物的提取方法，包括以罂粟科、荷青花属植物的根茎为原料， 进行乙醇回流提取，并将得到的提取液进行浓缩、干燥，得到抗肿瘤中药提取物。
[0012] 本发明的这种提取方法，实现了抗肿瘤中药提取物的制备，罂粟科、荷青花属植物 的根茎富含大量的生物碱，其根茎本身具有祛风湿、止血、止痛、舒筋活络、散瘀消肿等功 效。而经过回流提取后，浓缩以及干燥后，发现其提取物具有抗肿瘤的效果，该抗肿瘤中药 提取物能够提高HT-29和SW620细胞Gl期细胞的百分率，并且能够降低该肿瘤细胞S期和 G2期细胞的比率，具有诱导HT-29和SW620细胞发生Gl期阻滞，并抑制该两种肿瘤细胞的 增殖能力的效果。另外，该提取物还具有提高促进细胞凋亡蛋白的表达量，降低抑制细胞凋 亡蛋白的表达量的效果，同时还会降低结肠癌细胞中ERK1/2信号通路蛋白活性，使得结肠 癌细胞中磷酸化的ERK1/2和磷酸化的MEK1/2的表达量就下降，从而通过抑制ERK1/2信号 转导通路降低肿瘤细胞增殖。而且，该提取物的原料来源广泛，且无副作用，因此可很好的 应用于抗肿瘤药物的制备应用中。
[0013] 可选的，该提取方法具体包括以下步骤：
[0014]1)、以罂粟科、荷青花属植物的根茎为原料，用体积浓度为60-80%、且质量为所述 原料17-21倍的乙醇回流提取，得到提取液；
[0015]2)、将所述提取液浓缩，得到稠膏；
[0016]3)、将所述稠膏烘干，得到抗肿瘤中药提取物。
[0017]利用体积浓度为60-80%、且质量为所述原料17-21倍的乙醇可尽可能充分地将 根茎原料中的有效成分提取完全。
[0018] 可选的，在步骤1)中，所述原料包括荷青花、多裂荷青花或锐裂荷青花中的一种 或多种。
[0019] 上述锁具的三种具体植物种，其根茎的药用价值大，所含的有效成分丰富，因此， 可作为优选的提取原料。
[0020] 可选的，在步骤1)中，所述原料包括等重量的荷青花、多裂荷青花或锐裂荷青花。
[0021] 将以上三种原料均按照相同的重量进行回流提取，使得得到的提取物的有效成分 丰富全面，具有更佳的抗肿瘤效果。
[0022] 可选的，在步骤3)中，所述烘干的温度为65-75 °C。
[0023]在该温度范围内进行烘干操作，可减少浓缩液中有效成分的破坏，从而保证了抗 肿瘤提取物的药效。
[0024] 可选的，在步骤3)中，具体包括：将所述稠膏烘干后，进行粉碎，得到粉末状抗肿 瘤中药提取物。
[0025]在应用的过程中，一般需要将抗肿瘤中药提取物配置成相应的浓度，因此，为了便 于应用，将稠膏烘干后进行粉碎，以获得粉末状的抗肿瘤中药提取物。
[0026] 可选的，在步骤1)中，具体包括：
[0027]a)、以罂粟科、荷青花属植物的根茎为原料，以体积浓度为60-80%、且质量为所述 原料19-21倍的乙醇回流提取，得到第一提取液和第一提取药渣；
[0028]b)、在所述第一提取药渣中加入体积浓度为60-80%、且质量为所述原料17-19倍 的乙醇进行二次提取，得到第二提取液和第二提取药渣；
[0029]c)、在所述第二提取药渣中加入体积浓度为60-80%、且质量为所述原料17-19倍 的乙醇进行第三次提取，得到第三提取液和第三提取药渣；
[0030]d)、将所述第一提取液、所述第二提取液以及所述第三提取液合并得到提取液。
[0031] 对原料进行三次回流提取，且后两次回流提取所用的乙醇量较少，这样便于将原 料中的有效成分提取完全。
[0032] 可选的，在步骤d)之后还包括：将所述第三提取药渣干燥后回收。
[0033] 回流提取完毕后，由于药渣中还会含有一定量的有效抗癌成分依旧木质纤维等， 因此将得到的药渣干燥后回收利用，以实现资源的合理利用，减少浪费。
[0034] 所述的提取方法提取的中药提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0035] 所述的提取方法提取的中药提取物在制备通过上调肿瘤细胞p21蛋白表达，并抑 制Cdk-4/Cdk-6-cyclinDl复合物的活性，使细胞周期停滞于Gl期的抗肿瘤药物中的应 用。
[0036] 与现有技术相比，本发明的有益效果为：
[0037](1)、该抗肿瘤中药提取物具有提高HT-29和SW620细胞Gl期细胞的百分率，并且 能够降低该肿瘤细胞S期和G2期细胞的比率，具有诱导HT-29和SW620细胞发生Gl期阻 滞，并抑制该两种肿瘤细胞的增殖能力的效果。
[0038] (2)、该抗肿瘤中药提取物处理结肠癌细胞后，会使得活化形式的caspase-3和 caspase-9表达量增加，并且会提高促进细胞凋亡蛋白的表达量，降低抑制细胞凋亡蛋白的 表达量；因此可用于制备抗肿瘤药物中的应用中。
[0039] (3)、该抗肿瘤中药提取物会降低结肠癌细胞中ERK1/2信号通路蛋白活性，使得 结肠癌细胞中磷酸化的ERK1/2和磷酸化的MEK1/2的表达量就下降，从而通过抑制ERK1/2 信号转导通路降低肿瘤细胞增。
[0040](4)、该抗肿瘤中药提取物的原料来源广泛，无副作用，且成本低，因此可很好的应 用于抗肿瘤药物的制备应用中。
【附图说明】
[0041] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0042] 图1为本发明提供的中药提取物的EdU细胞增值实验结果图；
[0043] 图2为本发明提供的中药提取物对HT-29的细胞凋亡率图；
[0044] 图3为本发明提供的中药提取物对SW-620的细胞凋亡率图；
[0045] 图4-6为本发明提供的中药提取物对HT-29的细胞周期的影响图；
[0046] 图7-9为本发明提供的中药提取物对SW-620的细胞周期的影响图；
[0047] 图10为用本发明提供的中药提取物对HT-29和SW-620处理后，凋亡调控相关蛋 白表达结果图；
[0048] 图11为用本发明提供的中药提取物对HT-29和SW-620处理后，细胞周期调控相 关蛋白表达结果图；
[0049] 图12为用本发明提供的中药提取物对HT-29和SW-620处理后，ERK1/2信号通路 蛋白表达结果图。
【具体实施方式】
[0050] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会 理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体 条件者，按照常