混悬液，取等量的灯盏花素长效微乳混悬液两份，一份混悬液置于离心超滤管中(截留分子量10000)于3000r/min离心，收集离心滤出液，高效液相色谱法测定药物浓度Cl，另一份用流动相溶解破乳，高效液相色谱法测定药物浓度C2，包封率按下式计算:包封率=1- (C1/C2) X 100%。本实施例灯盏花素长效微乳包封率为95.3%。
[0026](3)粒径分布
将灯盏花素长效冻干微乳加适量注射用水复溶得灯盏花素长效微乳混悬液，取混悬液适量用马尔文激光粒度仪测定粒度分布。结果表明:本实施例灯盏花素长效微乳平均粒径为72.3nm，粒径分布均一(如图2所示)。
[0027](4)灯盏花素长效微乳体外释放度测定
将灯盏花素长效冻干微乳加适量注射用水复溶得灯盏花素长效微乳混悬液，取等量的灯盏花素长效微乳混悬液两份，一份混悬液适量置于透析袋中(截留分子量100000)，透析袋两端扎紧置于释放介质中(Ph7.2磷酸盐缓冲液，含0.5%Vc及0.01%叠氮钠)，37°C水浴条件下搅拌。分别于预定的时间取适量释放介质(同时补加等量的释放介质)，高效液相色谱法测定不同时间释放介质中药物含量Al。另一份混悬液用流动相溶解破乳，测定总体药物含量A2。以下式计算不同时间药物释放度，绘制释放曲线(如图3所示)，释放度％=(不同时间释放介质中药物含量Al/药物总体含量A2) X 100%。
[0028]本实施例灯盏花素长效微乳缓慢、持续释药可达72h。
[0029]实施例2 —种灯盏花素长效冻干微乳的制备
(I)将灯盏花素2.0g、大豆磷脂3.3g、聚乙二醇-二硬脂酰乙醇胺1.65g、加少量乙醇溶解，与中链脂肪酸甘油酯16.5g混合均匀，维生素E0.2g，40°C旋转蒸发除去乙醇作为油相I。(2)将聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯3.0g、聚乙二醇400 6.0g于40°C水浴混合均匀，作为油相II。(3)油相I与油相II在40°C水浴条件下高速搅拌混合均匀，在搅拌条件下加预热至40°C的注射用水500ml使形成灯盏花素长效乳液，高压均质机均质，加乳糖10g使溶解，注射用水定容至1000ml，0.22Mm滤膜除菌过滤，灌装，冷冻干燥。
[0030]按实施例1质量检测方法进行检测，本实施例灯盏花素长效微乳平均粒径82.5nm，包封率94.2%，药物可达72h缓慢释放。
[0031]实施例3 —种灯盏花素长效冻干微乳的制备
(I)将灯盏花素2.0g、大豆磷脂1.65g、聚乙二醇-二硬脂酰乙醇胺0.825g、加少量乙醇溶解，与中链脂肪酸甘油酯16.5g混合均匀，维生素E0.2g，40°C旋转蒸发除去乙醇作为油相I。(2)将聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯6.0g、聚乙二醇400 3.0g于40°C水浴混合均匀，作为油相II。(3)油相I与油相II在40°C水浴条件下高速搅拌混合均匀，在搅拌条件下加预热至40°C的注射用水500ml使形成灯盏花素长效乳液，高压均质机均质，加乳糖20g及甘露醇20g使溶解，注射用水定容至1000ml，0.22Mm滤膜除菌过滤，灌装，冷冻干燥。
[0032]按实施例1质量检测方法进行检测，本实施例灯盏花素长效微乳平均粒径85.3nm，包封率93.2%，药物可达72h缓慢释放。
[0033]实施例4 一种灯盏花素长效冻干微乳的制备
(I)将灯盏花素2.0g、蛋黄磷脂1.16g、聚乙二醇-二硬脂酰乙醇胺0.495g、加少量乙醇溶解，与中链脂肪酸甘油酯16.5g混合均匀，维生素E0.2g，40°C旋转蒸发除去乙醇作为油相I。(2)将聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯6.0g、聚乙二醇400 3.0g于40°C水浴混合均匀，作为油相II。(3)油相I与油相II在40°C水浴条件下高速搅拌混合均匀，在搅拌条件下加预热至40°C的注射用水500ml使形成灯盏花素长效乳液，探头超声波破碎，加甘露醇33g使溶解，注射用水定容至1000ml，0.22Mm滤膜除菌过滤，灌装，冷冻干燥。
[0034]按实施例1质量检测方法进行检测，本实施例灯盏花素长效微乳平均粒径78.6nm，包封率96.2%，药物可达72h缓慢释放。
[0035]实施例5灯盏花素长效冻干微乳大鼠体内的经时曲线
(I)灯盏花素普通注射液的配制
取灯盏花素原料，用PH6.8PBS缓冲液溶解(葡萄糖调节等渗)制得灯盏花素注射液，临用前0.22Mm滤膜滤过。
[0036](2)实验方法
将灯盏花素长效冻干微乳加适量生理盐水复溶得灯盏花素长效微乳混悬液，以灯盏花素普通注射液为对照，分别尾静脉注射灯盏花素普通注射液及灯盏花素长效微乳混悬液，给药剂量均为20mg/kg，于不同时间大鼠眼角静脉丛采血处理后测定药物浓度，绘制两组药物大鼠体内的经时曲线图。
[0037]实验结果表明，与灯盏花素普通注射液相比，灯盏花素长效微乳在大鼠体内的循环时间明显延长(如图4所示)。灯盏花素普通注射液在1h时，大鼠血液中的药物浓度已经几乎代谢完全，而灯盏花素长效微乳在60h时血液中仍有较高浓度的药物残留。
【主权项】
1.一种灯盏花素长效冻干微乳，其特征在于:所述灯盏花素长效冻干微乳的成分包括灯盏花素、磷脂、聚乙二醇-二硬脂酰乙醇胺(PEG2000-DSPE)、聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯(HS15)、聚乙二醇400 (PEG400)、维生素E、中链脂肪酸甘油酯和支持剂。
2.如权利要求1所述的一种灯盏花素长效冻干微乳，其特征在于:在所述灯盏花素长效冻干微乳的成分中，HS15与PEG400的重量比为1:2?2:1，优选为2:1。
3.如权利要求1所述的一种灯盏花素长效冻干微乳，其特征在于:在所述灯盏花素长效冻干微乳的成分中磷脂与中链脂肪酸甘油酯的重量比为0.7:10?2:10，优选为1:10。
4.如权利要求1所述的一种灯盏花素长效冻干微乳，其特征在于:磷脂可以采用天然磷脂，也可由采用氢化大豆磷脂和合成磷脂。
5.如权利要求1所述的一种灯盏花素长效冻干微乳，其特征在于:支持剂可以为山梨醇、甘露醇、蔗糖、氯化钠、水溶性淀粉、右旋糖苷、甜菊糖、葡萄糖、乳糖中的一种或几种的混合物，其中支持剂与中链脂肪酸甘油酯的比例为2:1?6.06:1。
6.如权利要求1所述的一种灯盏花素长效冻干微乳，其特征在于:在所述灯盏花素长效冻干微乳的成分中PEG2000-DSPE与中链脂肪酸甘油酯的重量比为0.03:1?0.1:1，优选为 0.05:1。
7.如权利要求1所述的一种灯盏花素长效冻干微乳，其特征在于:制备方法可以采用机械搅拌、高压均质机、探头式超声波破碎仪、乳匀机、挤出仪、纳米机、匀浆机、高压微射流等机械设备来破碎、分散，进而通过冷冻干燥法制备灯盏花素长效冻干微乳。
【专利摘要】本发明是灯盏花素的长效冻干微乳及其制备方法。其成分包括灯盏花素、磷脂、聚乙二醇-二硬脂酰乙醇胺（PEG2000-DSPE）、聚乙二醇十二羟基硬脂酸酯(HS15)、聚乙二醇400、维生素E、中链脂肪酸甘油酯和支持剂。在所述的灯盏花素长效冻干微乳成分中，HS15与PEG400的重量比为1:2～2:1，优选为2:1；磷脂与中链脂肪酸甘油酯的重量比为0.7:10～2:10，优选为1:10；支持剂与中链脂肪酸甘油酯的比例为2:1～6.06:1；PEG2000-DSPE与中链脂肪酸甘油酯的重量比为0.03:1～0.1:1，优选为0.05:1。
【IPC分类】A61K9-19, A61K31-7048, A61K47-34, A61K47-24, A61P9-10
【公开号】CN104825404
【申请号】CN201510223077
【发明人】李海刚
【申请人】临沂大学
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年5月5日