包含增效比例的干扰素γ和α的稳定的制剂的制作方法
【专利说明】包含増效比例的干扰素 Y和α的稳定的制剂
[0001] 本申请是申请日为2006年10月27日、申请号为200680050242. 5、发明名称为"包 含增效比例的干扰素γ和α的稳定的制剂"的发明专利申请的分案申请。
技术领域
[0002] 本发明涉及生物技术和医学，特别是稳定的药物制剂，其包含增效比例的重组干 扰素γ和α以用于抑制人类的不同组织或器官中的细胞生长。 现有技术
[0003] I型干扰素（缩写为IFN)的各种效应形成了其应用的极大治疗潜力。IFN应 用在各种类型的癌症治疗中是有益的，其中包括白血病（US 5830455)、基底细胞癌（US 5028422)、鳞状细胞癌（US 5256410)、乳腺癌（US 5024833)、胃肠道肿瘤（US 5444064; 5814640)和光化性角化病（US 5002764)。不同细胞类型显示出对于IFN的不同敏感性， 并且抑制它们生长的浓度可以在广泛的范围内变化（Borden E.等人（1981)Progress in Hematology.第XII卷，Brown EB·，编辑，299-339)，对此显示出在它们抑制细胞 生长的能力(Dahl H. (1983). Human interferon and cell growth inhibition. VII. Reversibility of interferon activities. J Interferon Animal,3 :327-332 ；ffillson J. K. V. , Bittner G.等人（1984)Antiproliferative activity of human interferons against ovarian cancer cells grown in human tumor stem cell assay. J Interferon Animal，4 :441-447 ;Hu R.，Gan Y.等人（1993)Evidence for multiple binding sites for several components of human lymphoblastoid interferon-alpha. J Biol Chem，268 : 12591-12595)以及抗肿瘤活性（Quesada JR.，Talpaz M.等人（1986)Clinical toxicity of interferons in cancer pat ients ：to review. J Clin Oncol，4 :234-243)方面的差 异。
[0004] IFN在癌症治疗中的使用仍未满足从体外研宄和这些有力的生物分子所具有的性 质中所产生的期望。已测试了不同的治疗方案但无明显的有益效果和影响（Strander H.和 Oberg K., (1992)Clinical use of interferons. Solid tumors INTERFERON. Principles and Medical Applications. Publishing Baron S. , Coppenhaver DH. , Dianzani F., Fleischmann WR. , Jr. Hughes TK. , Jr. Klimpel GR. , Niesel Dff. , Staton GJ.和 Tyring SK. ,533-561) 〇
[0005] 在为了实现疗法的更佳效应的努力中，以高剂量使用IFN，但由于各种因素，未出 现预期的有益有效应答，在所述因素中包括由所述剂量产生不良反应（Lane H.C. (1990) Interferon-alpha in patients with asymptomatic human immunodeficiency virus(HIV)infection. A randomized，placebo-controlled trial. Annals of internal Medicate，112 :805-811)。
[0006] 此外，已经以利用其增效效应的组合形式来使用IFNs。IFNa和IFNy的组合已 在使用来自瘢痕瘤成纤维细胞的培养物的体外研宄中得到描述（Tredget EE.，Wang R.等 A (2000)Transforming growth factor-beta mRNA and protein in hypertrophic scar tissues and fibroblasts ：antagonism by IFN-alpha and IFN-gamma in vitro and in vivo. J Interferon Cytokine Animal，20:143_151)D 在这项工作中，提及了 IFNa 和 γ 的组合利用，但所得到的数据来自体外和来自源于来自儿童的瘢痕瘤的细胞。这些作者未 进行任何临床试验，并且未评估所述IFN组合对于成人瘢痕瘤的细胞的影响，所述成人瘢 痕瘤是干扰素的弱应答者。
[0007] 专利EP 0107498显示了在黑素瘤Hs294T的细胞系中的干扰素a和γ的组合， 但未描述在其他类型的细胞如基底细胞癌、成胶质细胞瘤（GL-5)或喉癌（ΗΕρ-2)的原代培 养物中的这种效应。
[0008] 对于肾和肺转移的治疗，还描述了天然IFNa和重组IFNy的交替利用（Fujii A.，Yui-In Κ.等人（1999)Preliminary results of the alternating administration of natural interferon-alpha and recombinant interferon-gamma for metastasic renal cellcarcinomaBJUInt·;84:399-404)。IFNα2或α4或杂合体δ4α2BglIIαl与 IFNy的组合已在细胞系RT4(膀胱癌）和A21829(肺腺癌）中得到描述，并具有比单独的I 型 IFN 或 IFNy 更佳的抗增殖效应（Hubbell H. R.，Craft J. TO.等人（1987)Synergistic antiproliferative effect of recombinant alpha-interferons with recombinant gamma-interferon. J Biol Response Mod，6:141_153)。IFNy (lOOOIU/mL)和 IFNa 2(1000IU/mL)中的增效效应已在细胞系A459(肺泡肿瘤）（Martyre M. C.，Beaupain R. 等人(1987) Potentiation of antiprol iferative activity by mix of human recombinant IFN-alpha 2and-gamma on growth of human cancer nodules maintained in continuous organotypic culture. Eur J Cancer Clin Oncol，23 :917-920)以及从 大细胞未分化性癌建立的细胞系（Hand A.，Pelin K.等人（1993) Interferon-alpha and interferon-gamma combined with chemotherapy ：in vitro sensitivity studies in non-small cell lung-cancer cell lines. Anticancer Drugs，4 :365-368)中显亦。
[0009] IFNa和IFNy的组合已在使用细胞系HepG2的研究中（Mizukoshi Ε·，Kaneko S. 等人(1999)Up-regulation of type I interferon receptor by IFN-gamma. J Interferon Cytokine Animal，19 :1019-1023)和在细胞系 AVA5 中（Okuse C.，Rinaudo J. A.等人(2005)Enhancement of antiviral activity against hepatitis C virus in vitro by interferon combination therapy. Antiviral Animal，65 :23-34)得到描 述。这些作者未测定抗增殖效应，也未测定在细胞系HepG2中α和γ干扰素的组合的 更有效的比例。此外，已在细胞系ifepal-6(鼠类肝瘤）中探究了 TNFa和IFNy的增效 效应（Sasagawa T.，Hlaing M.等人（2000) Synergistic induction of apoptos is in murine hepatoma Hepal_6cel Is by IFN-GAMMA and TNF-alpha. Biochem Biophys Common Animal，272 :674-680)。
[0010] 在专利US 5190751中，描述了 IFNa和γ的组合对于B型和T型白血病细胞系 的生长的抑制。在所评估的T细胞系中均未观察到生长抑制效应的增强，并且在某些实验 条件下，所述组合的效应是拮抗性的。在专利EP 010749和一个出版物（Czamiecki C.W.， Fennie C. W.等人（1984) Synergistic antiviral and ant iproliferative activities of Escherichia coli-derived human alpha，beta，and gamma interferons. J Virol. 49 ： 490-496)中，也显示了，IFNa和γ的组合不一定是增效的，而且可以是拮抗性的。提及但 并未显示在非常广泛范围内的所述组合的功效。
[0011] 这些数据说明，应当就实验限定来评估IFNa和γ的组合的利用，所述实验限定 允许鉴定何种条件是对于建立用于治疗给定组织或器官中不适当的细胞生长的最佳组合 来说有利的条件。由于这个原因，为了支持治疗和适当的剂量，应当在体外实验和对照临床 试验中进行评估。
[0012] 在使用神经胶质瘤细胞系的研宄中，IFNY影响恶性特征例如所研宄的肿瘤细 胞的增殖和迁移（Knupfer Μ.Μ·，Knupfer Η.等人（2001) Interferon-gamma inhibits growth and migration of A172human glioblastoma cells. Anticancer Animal