miR-148b的用途及其相关药物的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物技术领域，具体涉及miR-148b的用途及其相关药物。
【背景技术】
[0002]肿瘤的发生是一个复杂的过程，现公认为miRNAs的异常表达在肿瘤中起到重要的作用。miRNAs，是一类高度保守的非编码单链RNA，通过结合目的基因mRNA的3’ UTR特定区域，可在转录后水平调节基因的表达。肾癌的发展进程与异常的miRNAs密切相关也已经被广泛报道。肾细胞癌以每年3%的平均增长速度成为成人肾癌最多的致病种类，而肾癌细胞是起源于肾小管上皮细胞的演变。临床上肾细胞癌的病人却一直都是诊断率低，治疗方法局限，预后差。因此现在探索出一些具有应用前景的针对肾癌的诊断和预后指标显得尤为重要和迫切，更重要的是可以帮助优化某些特定的诊断治疗方法，以免产生不必要的创伤或延误诊断治疗的最佳时期。然而，大量报道指出miRNAs是有潜力的肿瘤标志物。在肾癌细胞中miRNAs与多种不同的信号通路密切相关，例如VHL/HIF、PI3K/Akt/mTor、Wnt/Frizzled、Hippo、MAPK 以及 NF-K B 信号通路。其中，mitogen-activated proteinkinases (MAPKs)在信号转导和多种生物进程中起着重要作用，例如在细胞增殖、分化和细胞存活过程中。MAPKs可分为三个部分组成，S卩Extracellular Signal-regulated Kinase1/2(ERK1/2)、Stress Activated Protein Kinase (SAPK)/c-Jun N-terminal Kinase (JNK)和P38MAPK。有趣的是，SAPK/JNK信号通路有着促进凋亡和抑制凋亡的双面作用，以不同的细胞类型，激活的承受力，死亡信号的传导以及不同的信号通路的激活都会产生不同的作用。
[0003]然而目前为止，miR-148b在肾细胞癌中的作用和分子机理还不清楚。
【发明内容】
[0004]为了克服现有技术中的缺陷，本发明提供了 miR_148b基因在肿瘤细胞的存活和凋亡过程中的作用。
[0005]本发明是通过以下技术方案实现的:
[0006]本发明的第一方面，提供了一种分离的miR-148b基因在制备或筛选抑制MAPK/JNK信号通路的药物或制剂中的用途。
[0007]所述将分离的miR-148b基因用于制备或筛选抑制MAPK/JNK信号通路的药物或制剂包括两方面的内容:其一，将miR-148b基因作为药物或制剂的作用靶标应用于制备抑制MAPK/JNK信号通路的药物或制剂；其二，将miR-148b基因作为药物或制剂的作用靶标应用于筛选抑制MAPK/JNK信号通路的药物或制剂。
[0008]所述将miR-148b基因作为药物或制剂的作用靶标应用于制备抑制MAPK/JNK信号通路的药物或制剂具体是指:将miR-148b基因作为药物或制剂作用的靶标，来研制能够过表达miR-148b的药物或制剂，从而抑制MAPK/JNK信号通路。
[0009]所述将miR-148b基因作为所述药物或制剂的作用靶标应用于筛选抑制MAPK/JNK信号通路的药物或制剂具体是指:将miR-148b基因作为作用对象，对药物或制剂进行筛选，以找到可以过表达miR-148b的药物作为抑制MAPK/JNK信号通路备选药物。诸如基因、抗体药物，小分子药物等可将miR-148b基因及其蛋白作为作用对象。例如，本发明通过在肿瘤细胞中转hsa-miR-148b_3p mimics来过表达miR_148b。
[0010]进一步地，所述MAPK/JNK信号通路是肾癌细胞或肾癌组织中的MAPK/JNK信号通路。
[0011]进一步地，所述药物或制剂通过过表达miR-148b而起到抑制MAPK/JNK信号通路的作用。
[0012]更进一步地，所述miR-148b通过靶向作用于MAP3K9而起到抑制MAPK/JNK信号通路的作用。
[0013]优选地，所述miR-148b通过与MAP3K93’ UTR结合而靶向作用于MAP3K9。
[0014]优选地，所述miR-148b通过下调MAP3K9蛋白表达水平而起到抑制MAPK/JNK信号通路的作用。
[0015]优选地，所述药物或制剂通过下调磷酸化JNK(pJNK)表达水平而起到抑制MAPK/JNK信号通路的作用。
[0016]本发明的第二方面，提供了一种抑制MAPK/JNK信号通路的药物或制剂，通过分离的miR-148b基因制备或筛选获得，所述药物或制剂含有有效量的过表达miR-148b的药效成分。
[0017]所述抑制MAPK/JNK信号通路的药物或制剂包括但不限于:核酸分子、碳水化合物、脂类、小分子化学药、抗体药、多肽、蛋白或干扰慢病毒。
[0018]所述核酸包括但不限于:反义寡核苷酸、双链RNA(dsRNA)、核酶、核糖核酸内切酶III制备的小干扰RNA(esiRNA)或者短发夹RNA(shRNA)。
[0019]本发明的优选实施例中，所述药物或制剂为能够过表达miR_148b的hsa-miR-148b_3p mimics0
[0020]所述药物或制剂的施用量为足够提高miR_148b基因的转录或翻译，或者足够提高miR-148b蛋白的表达或活性的剂量。以使miR-148b基因的表达维持在能够抑制MAPK/JNK信号通路的水平。
[0021]本发明的第三方面提供了一种抑制肾癌组织或肾癌细胞中MAPK/JNK信号通路的方法，为向肾癌组织或肾癌细胞中过表达miR-148b。
[0022]本发明的第四方面提供了前述方法在肾癌治疗药物研宄中的用途。
[0023]本发明的有益效果在于:
[0024]本发明首次揭示了 miR_148b在肾细胞癌中低表达，在肾癌组织或肾癌细胞中过表达miR-148b能够通过抑制MAP3K9而有效下调MAPK/JNK信号通路，为进一步研宄肾癌的发病机制以及miR-148b基因的功能提供了新的手段。
【附图说明】
[0025]图1:miR-148b在肾癌组织中的表达情况。
[0026]图2:miR-148b在肾癌细胞中的表达情况。
[0027]图3:双荧光素酶报告系统检测miR_148b与信号通路的调控作用。
[0028]图4:MAP3K93’ UTR与miR_148b的靶位点在物种间的保守性。
[0029]图5:双荧光素酶报告系统检测miR-148b与MAP3K9的调控作用。
[0030]图6:在肾癌细胞中miR-148b在mRNA水平并没有影响MAP3K9的转录。
[0031]图7:在肾癌细胞中miR-148b下调了 MAP3K9在蛋白水平的表达。
[0032]图8:在肾癌细胞中转染mimics后磷酸化JNK的表达变化。
[0033]图9:MAP3K9和pJNK在肾癌组织中的表达情况。
【具体实施方式】
[0034]本发明经过广泛而深入的研宄，发现miR_148b在人肾癌组织和肾癌细胞株中均呈现低表达。接着，本发明的发明人发现miR-148b在转录后水平上抑制了 MAP3K9的表达，而MAP3K9是一个已知的MKK/JNK信号通路的上游激活因子。而后，研宄发现在肾癌细胞中过表达miR-148b可下调MAPK/JNK信号通路。
[0035]在此基础上完成了本发明。
[0036]以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其它优点与功效。本发明还可以通过另外不同的【具体实施方式】加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
[0037]在进一步描述本发明【具体实施方式】之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发