(QIAGEN，CA， USA)，进行离心处理（12000rpm，15秒)。离心之后移除上清液，再加入700微升RWl缓冲液 (QIAGEN，CA, USA)，进行离心处理（12000rpm，15秒）;离心之后移除上清液，再加入500微升 RPE缓冲液（QIAGEN，CA, USA)，进行离心处理（12000rpm，15秒）;离心之后移除上清液，重复 RPE缓冲液的步骤一次，并进行离心处理（12000rpm，1分钟）以去除残余试剂。将RNeasy mini colum移至新的1.5毫升微量离心管，于RNeasy mini colum内膜的正中央加入30微 升尺似86仕66￥3丨61'(〇^^^1〇4，旧4)，静置5分钟后，进行离心处理（12000卬111，1分钟）， 并收集流出的滤液（即，间质干细胞的全细胞RNA，可保存于-80°C冰箱，供下述反转录聚合 酶连锁反应及胶体分析用），并利用分光光度计（DU-800, Beckman)测量波长260奈米的吸 光值，以估算RNA的浓度。
[0054] (2)反转录聚合酶连锁反应（RT-PCR)及胶体分析
[0055] 将上述（1)所提供的全细胞RNA反转录成cDNA后，取2. 5微升cDNA，并加入 2. 5微升如表1A所示的引子（10微微莫耳浓度)、7. 5微升的去离子水、以及12. 5微升的 Ec〇n〇Taq? PLUS GREEN2X Master Mix (Lucigen,Middleton, Wisconsin, USA),再将前 述样品置于聚合酶连锁反应器中，并设定反应条件如下：i ) 94°C，30秒、55°C，30秒、94°C， 60秒，以上步骤进行30个循环；ii)72°C，10分钟；iii)最后降温至4°C以结束反应。将所 得的聚合酶连锁反应（PCR)产物，以1. 5%琼脂胶体进行30分钟电泳（电压：100伏特)，接 着将该胶体置于溴化乙锭（ethidium bromide,EtBr)中染色10分钟，再利用照胶系统（D0C PRINT DP_001FDC，VilberLourmat France)拍摄影像，结果示于图 1，最后以软件（Image J) 定量基因表现量的强弱，结果示于表1B。
[0056] 表1A
[0057]
【主权项】
1. 一种源自动物组织的间质干细胞萃取物，其包含选自以下群组的趋化因子： 骨成形蛋白质 _7(bonemorphogeneticprotein-7，BMP-7)、基质细胞衍生因子-1 (stromalcell-derivedfactor-l，SDF_l)、血管内皮生长因子（vascularendothelial growthfactor，VEGF)、C-X-C趋化激素受体-4 (C-X-Cchemokinereceptortype-4， CXCR4)、脑衍生神经滋长因子（brain-derivedneurotrophicfactor，BDNF)、介白素-17 (interleukin-17,IL-17)、及前述各项的任意组合。
2. 根据权利要求1所述的间质干细胞萃取物，其特征在于，该组织选自以下群组：脐 带、脐带血、胎盘、华顿氏凝胶（Wharton'sjelly)、骨髓、血液、肌肉、脂肪、毛囊、及前述各 项的任意组合。
3. 根据权利要求1所述的间质干细胞萃取物，其特征在于，该组织是脂肪。
4. 根据权利要求1至3中任一项所述的间质干细胞萃取物，其特征在于，所述萃取物是 通过使用一蛋白质裂解缓冲液以萃取一取自该动物组织的间质干细胞而得到。
5. -种使用一间质干细胞萃取物于制造用于修复皮肤老化的保养品、化妆品或药剂的 用途，其特征在于，该间质干细胞萃取物是根据权利要求1至4中任一项所限定的萃取物。
6. 根据权利要求5所述的用途，其特征在于，该保养品、化妆品或药剂呈一选自以下群 组的型态：乳液、乳霜、凝胶、膏状物、喷雾剂、及溶液，其中该凝胶包含水凝胶；该膏状物包 含分散膏、及软膏；以及该溶液包含洗液、及悬浮液。
7. 根据权利要求5所述的用途，其特征在于，该保养品、化妆品或药剂以施用于皮肤表面。
8. 根据权利要求5所述的用途，其特征在于，该保养品、化妆品或药剂与一加热手段（a heatingmeans)并用。
9. 根据权利要求8所述的用途，其特征在于，该加热手段是直接接触的加热手段及非 直接接触的加热手段的至少一者。
10. 根据权利要求8所述的用途，其特征在于，该直接接触的加热手段选自以下群组的 至少一者：面膜、暖暖包、热毛巾、加热垫片以及加热面板。
11. 根据权利要求8所述的用途，其特征在于，该非直接接触的加热手段包含蒸气加热 以及加热灯照射的至少一者。
12. 根据权利要求5至11中任一项所述的用途，其特征在于，该保养品、化妆品或药剂 用于选自以下群组的至少一者：促进皮肤中玻尿酸生成、促进皮肤中弹性蛋白生成、促进皮 肤中胶原蛋白生成、促进皮肤中网状蛋白生成、刺激施用部位的细胞增生、刺激施用部位的 细胞分泌趋化因子、及刺激内生性造血干细胞聚集至施用部位并增生。
13. 根据权利要求5至11中任一项所述的用途，其特征在于，该保养品、化妆品或药剂 用于选自以下群组的至少一者：减少掉发、促进毛囊细胞活化、促进毛囊细胞增生、及促进 毛发生长。
14. 一种套组，其系包含（1) 一加热工具、以及（2) -间质干细胞萃取物，其特征在于， 该干细胞萃取物是根据权利要求1至4中任一项所界定的萃取物。
15. 根据权利要求14所述的套组，其特征在于，该加热工具包含面膜、暖暖包、热毛巾、 加热垫片以及加热面板的至少一者。
16. 根据权利要求14所述的套组，其特征在于，该加热工具包含面膜及暖暖包、热毛巾 的至少一者。
【专利摘要】一种间质干细胞萃取物及其用途，其中该间质干细胞萃取物包含骨成形蛋白质-7（bone morphogenetic protein-7，BMP-7）、基质细胞衍生因子-1（stromal cell-derived factor-1，SDF-1）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、C-X-C趋化激素受体-4（C-X-C chemokine receptor type-4，CXCR4）、脑衍生神经滋长因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）、及／或介白素-17（interleukin-17，IL-17）等趋化因子，该萃取物尤其适用于皮肤老化的修复。
【IPC分类】A61K38-18, A61K8-64, A61K38-17, A61Q7-00, A61K38-21, A61P17-00, A61Q19-08, A61P17-14, A61K38-20, A61K38-19
【公开号】CN104840371
【申请号】CN201410066522
【发明人】林欣荣, 韩鸿志, 邱紫文, 林珀丞
【申请人】国玺干细胞应用技术股份有限公司
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2014年2月26日
【公告号】US20150231052