一种疫苗组合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种疫苗组合物，以及该组合物的制备方法和应用，属于兽用生物制 品领域。
【背景技术】
[0002] 猪支原体肺炎（Mycoplasma pneumonia of swine，MPS)是由猪肺炎支原体 (Mycoplasma hyopneumoniae, Mhp)引起的一种慢性、接触性传染病，是一种重要的免疫抑 制性疾病，也是猪呼吸道疾病综合征（Porcine respiratory disease complex, PRDC)的 重要病原之一。该病长期危害养猪业，并广泛分布于世界各国。该病主要危害育肥猪，尤其 是14~20周龄的猪生长率降低，使其饲料转化率降低，还可出现食欲减退、发热、咳嗽、呼 吸困难等症状。
[0003] 副猪嗜血杆菌病是副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis, Hps)引起的猪的多发 性浆膜炎和关节炎，该病又称为猪革拉泽氏病（Glasser's Disease)。副猪嗜血杆菌主要 危害4到8周龄的断奶仔猪，也可感染10日龄左右仔猪和4月龄的生长育成猪。主要临床 症状表现为咳嗽、呼吸困难、消瘦、跛行和被毛粗乱；主要剖检病变表现为纤维素性胸膜炎、 心包炎、腹膜炎、关节炎和脑膜炎等。此外副猪嗜血杆菌还可引起败血症，并且在急性感染 后可能留下后遗症，即母猪流产、公猪慢性跛行。根据我国血清流行病学调查和分离菌株的 鉴定，以4、5型最为流行。近年来，由于我国目前饲养技术的调整进行不当，以及突发新的 呼吸道综合征，使得该病日趋流行，危害日渐严重。
[0004] 单独试验当猪感染猪肺炎支原体后，仅出现咳嗽等症状的温和型慢性肺炎，对生 产性能影响较轻微，容易被养殖者忽视；而当与副猪嗜血杆菌等病菌混合感染时，可以引起 猪呼吸道综合征和地方性肺炎，使呼吸道疾病加重。
[0005] 目前针对这两种病原的混合感染的疫苗仅有猪肺炎支原体单苗和副猪嗜血杆菌 单苗。猪肺炎支原体单苗通常是在仔猪早期进行免疫，7日龄首免，2~3周后二免。对于 副猪嗜血杆菌病防治，则使用副猪嗜血杆菌灭活疫苗分别在7日龄和21日龄免疫2次。尽 管如此，由于猪场仔猪普遍存在母源抗体的影响，造成单苗免疫效果不尽理想，常常造成免 疫失败的情况出现。
[0006] 不仅如此，要预防Mhp和Hps混合感染，单苗至少需要免疫四针才能预防疾病，成 本较高，操作程序繁琐，使感染的风险加大，引起猪群的应激反应加大，不同疫苗使用会造 成免疫干扰导致部分猪群免疫失败等问题。
[0007] 目前的技术无法实现一种疫苗免疫一针即可抵抗这两种病原引起的混合感染，不 仅如此，联合疫苗不仅方便、多效、低成本，与单一疫苗相比，还可以减少疫苗接种次数，避 免因漏种而不能得到全程免疫；另外，疫苗大多不耐热，其生产、运输、存贮、销售乃至全部 使用过程均需在较低温度下进行，即所谓的"冷链"，这种环环相扣的冷链运作，费用极高， 使疫苗成本居高不下，而使用联合疫苗，则可以大大降低冷链运作的费用，因此具有显著的 优越性。
【发明内容】
[0008] 为解决现有技术的不足，本发明旨在提供一种疫苗，含有猪肺炎支原体、副猪嗜血 杆菌两种抗原，免疫一针即可有效预防和控制由这两种病原混合感染时造成的猪呼吸道综 合征或地方性肺炎。
[0009] 本发明的主要目的是提供一种疫苗组合物，其中，所述疫苗组合物包括：免疫量的 猪肺炎支原体抗原，免疫量的副猪嗜血杆菌抗原以及药学上可接受的载体。
[0010] 本发明中的疫苗组合物在对约3~10日龄的猪单剂有效量免疫时，不仅两种抗原 之间无免疫干扰，而且可以抵抗母源抗体的干扰，有效的治疗和预防两种病原导致的症状。 [0011] 本发明所述的猪肺炎支原体抗原是指，包含至少一种在对猪给药后能诱导、刺激 或增强抗猪肺炎支原体感染的免疫应答的抗原的任何组合物。该组合物可以包含猪肺炎支 原体全细胞菌苗和一个或多个猪肺炎支原体衍生多肽或蛋白质或者所述多肽或蛋白质的 免疫原性片段，或编码所述多肽、蛋白质或免疫原性片段的一个或多个猪肺炎支原体基因， 所述基因或核酸能在体内进行表达。猪肺炎支原体疫苗中提供的猪肺炎支原体多肽、蛋白 质及其免疫原性片段和基因或核酸可以用本领域公知技术来合成或重组制备。
[0012] 本发明所述的副猪嗜血杆菌抗原是指含有至少一种副猪嗜血杆菌抗原形式的任 何组合物，所述副猪嗜血杆菌抗原接种猪可诱导、刺激或增强抵抗副猪嗜血杆菌感染的免 疫应答。副猪嗜血杆菌为包括本领域技术人员熟知的临床分离的野毒株，包含目前已鉴定 的1~15个血清型。优选地，所述副猪嗜血杆菌抗原是完整的副猪嗜血杆菌，优选为灭活 形式，更优选，所述副猪嗜血杆菌抗原是灭活的血清型为4型和5型的混合抗原；最优选为 灭活的副猪嗜血杆菌血清4型JS株，和灭活的副猪嗜血杆菌血清5型ZJ株。
[0013] 优选地，所述的猪肺炎支原体抗原包括灭活形式、改良的活的形式或减毒形式的 猪肺炎支原体全支原体抗原，猪肺炎支原体亚单位抗原、合成肽抗原或基因工程抗原；以及 所述的副猪嗜血杆菌抗原包括灭活形式、改良的活的形式或减毒形式的副猪嗜血杆菌全菌 抗原，副猪嗜血杆菌亚单位抗原、合成肽抗原或基因工程抗原。
[0014] 优选地，所述猪肺炎支原体抗原是猪肺炎支原体全细胞菌苗，优选灭活形式、改良 的活的形式或减毒形式的猪肺炎支原体细菌，含有至少猪肺炎支原体的免疫原性氨基酸序 列的嵌合病毒，任何其它含至少猪肺炎支原体的免疫原性氨基酸序列的多肽或成分。优选 地猪肺炎支原体抗原是灭活形式的J株或HN0613株全细胞菌体。最优选地，猪肺炎支原体 抗原是灭活形式的HN0613株全细胞菌体。
[0015] 所述的猪支原体肺炎抗原还可以包含以下疫苗组合物中的任一种抗原如勃林格 殷格翰公司的【HgelvaC? M. hyo ;哈药集团公司的瑞倍适Respisure和RespisureOne ;美 国先灵葆雅的Myco Silencer?;西班牙海博莱生物大药厂的J株(喜可舒）；美国普泰克公 司的MycoGard;美国辉瑞公司的RespiFend MH;梅里亚动物保健公司的猪克喘；南京天邦 生物科技有限公司的168株活疫苗。
[0016] 所述的副猪嗜血杆菌抗原可以包含以下组合物的抗原，如勃林格殷格翰公司的 Ingelvac HP-I ;海博莱公司（Hipra)的Hiprasuis-Glasser ;武汉科前动物生物制品有限 责任公司的副猪嗜血杆菌灭活疫苗（4型MD0322株+5型SH0165株)。
[0017] 更优选地，所述的猪肺炎支原体抗原为灭活的猪肺炎支原体HN0613株全支原体 抗原、所述的副猪嗜血杆菌抗原为灭活的副猪嗜血杆菌血清4型JS株和血清5型ZJ株全 菌抗原。
[0018] 所述猪肺炎支原体 HN0613 株（Mycoplasma hyopneumoniae Strain HN0613)， 已在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏日期：2012年6月13日，保藏号为CCTCC No. M2012230,保藏地址：中国武汉?武汉大学。
[0019] 所述的副猪嗜血杆菌血清 4 型 JS 株（Haemophilus Parasuis Serotype4Strain JS)保藏号为CCTCC No. M2011172 ;所述的副猪嗜血杆菌血清5型ZJ株（Haemophilus Parasuis Serotype5Strain ZJ)保藏号为CCTCC Ν〇·Μ2011173,均已在中国典型培养物保 藏中心保藏，保藏日期：2011年5月18日，保藏地址：中国武汉?武汉大学。
[0020] 优选地，所述的猪肺炎支原体抗原含量为Sexio8CXU/头份，所述的副猪嗜血杆 菌抗原含量为5X IO8~4X IO9CFU/头份。
[0021] 更优选地，所述的猪肺炎支原体抗原含量为7X IO8CXU/头份，所述的副猪嗜血杆 菌抗原含量为2 X IO9CFU/头份。
[0022] 优选地，所述的药学上可接受的载体包括佐剂、防腐剂、溶剂、分散介质、稳定剂、 等渗剂、稀释剂；其中，所述的佐剂包括ISA206、氢氧化铝胶、矿物油、卡波姆、GelOU蜂胶、 ISA760VG的一种或几种的组合。
[0023] 其中，免疫佐剂为氢氧化错胶、矿物油、卡波姆（Carbomer)(商品名Carbopol)、 GelOl (法国 SEPPIC)、蜂胶、ISA206 (法国 SEPPIC)、ISA760VG (法国 SEPPIC)，优选的矿物 油、卡波姆（Carbomer)(商品名Carbopol)、GelOl (法国SEPPIC)，更优选为GelOl (法国 SEPPIOo
[0024] 优选地，所述疫苗组合物包括：所述的猪肺炎支原体抗原为7 X IO8CXU/头份灭活 的猪肺炎支原体HN0613株全支原体抗原，所述的副猪嗜血杆菌抗原为2X IO9CFU