Adrb2抑制剂与索拉菲尼联用在制备治疗肝癌药物中的应用
【技术领域】
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[0001]本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种ADRB2抑制剂与索拉菲尼联用在制备治疗肝癌药物中的应用。
【背景技术】
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[0002]原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是世界上第五大常见肿瘤，在癌症相关死亡原因中排名第三。肝细胞癌常见于发展中国家，尤其多发于东亚、东南亚、太平洋盆地和非洲撒哈拉沙漠南部地区。在已报告的626，000例肝细胞癌患者中，大约410，000例分布于东亚地区(其中中国346，000例，日本40，000例)。但是，由于治疗前侵袭和转移的发生率较高，肝细胞癌的预后较差。
[0003]索拉菲尼是由Bayer和Onyx联合研发的多靶点抗肿瘤药物，具有显著抑制肿瘤增殖和血管再生的作用，是被美国FDA批准的第一个用于临床治疗肝细胞癌的靶向药物。索拉菲尼通过对ERK1/2信号通路中抑制丝/苏氨酸蛋白激酶RAF，肿瘤的增殖被显著地控制。此外，索拉菲尼也抑制了 VEGF和TOGFR，从而阻止了肿瘤的血管形成(WilhelmSM, Carter C，Tang Lj Wilkie D，McNabola A，Rong H，，et al.:BAY 43_9006exhibitsbroad spectrum oral antitumor activity and targets the RAF/MEK/ERK pathway andreceptor tyrosine kinases involved in tumor progress1n and ang1genesis.CancerRes 2004，64(19):7099-7109.)。但肝癌患者中使用索拉菲尼易产生耐药性，治疗效果也不理想。
[0004]随着研宄水平的不断深入，神经内分泌系统异常在肿瘤发生、发展中的作用越来越受到关注。其中，β肾上腺素受体广泛表达于大多数哺乳动物细胞，是调节机体应对应激反应过程的重要功能分子。根据结构和效应不同，β肾上腺素受体可分为β?，β2和β3三个亚型。β肾上腺素受体阻滞剂的使用(如非选择性β 1，β 2肾上腺素受体抑制剂，普萘洛尔)有助于延缓乳腺癌和前列腺癌患者的疾病进展，改善患者预后(Bairon TI, ConnollyRMj Sharp L，Bennett Kj Visvanathan K.Beta blockers and breast cancer mortality:apopulat1n-based study.J Clin Oncol.Jul 12011 ;29(19):2635-2644.)0
[0005]近年来，β 2肾上腺素受体(ADRB2)及其信号通路在肿瘤预防和治疗研宄领域受到越来越多的关注。IC1-118, 551为特异性β 2肾上腺素受体抑制剂，其抑制肿瘤的作用也逐渐受到重视。但β 2肾上腺素受体(ADRB2)抑制剂在肝癌治疗中的作用仍不清楚，目前尚未有文献报道联合应用ADRB2抑制剂与索拉菲尼在治疗肝癌中的作用。
【发明内容】
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[0006]本发明的目的在于提供ADRB2抑制剂的新的医药用途，本发明的另一目的在于提供ADRB2抑制剂与索拉菲尼联用在制备治疗肝癌药物中的应用。
[0007]为了克服现有的肝癌治疗方法难以抑制肝癌生长和转移、复发，以及索拉菲尼治疗肝癌耐药性高等不足，本发明提供了 β 2肾上腺素受体(ADRB2)抑制剂的新医药用途。
[0008]本发明提供了 β 2肾上腺素受体(ADRB2)抑制剂在制备治疗肝癌药物中的应用，特别是β2肾上腺素受体抑制剂作为肝癌化疗药物的增效剂或者增敏剂。
[0009]所述的肝癌化疗药物，为索拉菲尼、顺铂或表柔比星等。
[0010]进一步地，本发明还提供了 β 2肾上腺素受体抑制剂在制备治疗肝癌药物中的应用，所述的药物为β2肾上腺素受体抑制剂与索拉菲尼联用。
[0011]本发明提供了 β 2肾上腺素受体抑制剂与索拉菲尼联用在制备治疗肝癌药物中的应用。
[0012]本发明所述的β 2肾上腺素受体抑制剂，是抑制或降低ADRB2基因转录(翻译)的物质，或能抑制ADRB2受体正常生物学功能的物质，例如通过siRNA或shRNA等方法降低ADRB2基因转录；使用非选择性β 1，β 2肾上腺素受体抑制剂普萘洛尔或特异性β 2肾上腺素受体抑制剂IC1-118，551抑制ADRB2受体正常生物学功能等。
[0013]本发明的主要技术方案为:将ADRB2抑制剂与索拉菲尼同时对患者进行给药。
[0014]在本发明的优选实施例，所述的肝癌包括肝细胞癌和胆管细胞癌。
[0015]在本发明的优选实施例，所述的ADRB2抑制剂为口服制剂、针剂或者缓释制剂等。
[0016]在本发明的优选实施例，以ADRB2抑制剂与索拉菲尼作为活性成份的药物的给药方式包括静脉注射、口服和局部给药等。
[0017]在本发明的优选实施例，ADRB2抑制剂与索拉菲尼可以联合给药，或分开给药。
[0018]本发明经细胞实验证实，ICI在24h就能够明显减慢肝癌细胞的增殖速度，并且这种趋势随着时间的延长而逐渐显著。
[0019]ICI能够明显抑制克隆形成，并存在浓度依赖性，提示ICI确实能够抑制肿瘤细胞的增殖。
[0020]干扰肝癌细胞中ADRB2表达之后，细胞增殖速度明显减慢。
[0021]ICI联用Sorafenib能够明显增加Sorafenib对肝癌细胞的生长抑制，并且这种抑制水平要高于单独使用ICI或Sorafenib所引起的细胞抑制之和。
[0022]ICI联用Sorafenib后发生凋亡的肝癌细胞明显增多，提示了更强的杀伤效果。
[0023]联合应用ADRB2抑制剂与索拉菲尼可显著抑制肝细胞癌移植瘤的生长。
[0024]本发明的有益效果是，这种联合应用ADRB2抑制剂与索拉菲尼治疗肝癌的方法能有效抑制肝癌生长，并能有效抑制肝癌细胞的移植成瘤效率，降低了肝癌的进展，易于临床使用推广。利用本发明的方法能抑制肝癌细胞的增殖和克隆形成能力，促进肝癌细胞凋亡，抑制肝癌细胞移植瘤的生长，大大增强了肝癌细胞对索拉菲尼的敏感性，易于临床推广使用。
【附图说明】
[0025]图1是本发明使用ADRB2抑制剂抑制肝癌细胞生长的示意图，其中A为ICI抑制肝癌细胞增殖速度的图，B为ICI抑制肝癌细胞克隆形成的照片，C为ICI抑制肝癌细胞克隆形成实验克隆数量计数图；
[0026]图2是本发明干扰ADRB2表达抑制肝癌细胞生长的示意图；
[0027]图3是本发明联合应用ADRB2抑制剂与索拉菲尼后肝癌的生长示意图，其中A为SMMC-7721细胞的结果，B为H印G2细胞的结果，C为HCC-LM3细胞的结果；
[0028]图4是本发明联合应用ADRB2抑制剂与索拉菲尼后肝癌细胞的克隆形成能力示意图，其中A为克隆形成的照片，B为克隆形成数目的计数图；
[0029]图5是本发明联合应用ADRB2抑制剂与索拉菲尼后肝癌细胞的凋亡比例示意图；
[0030]图6是本发明联合应用ADRB2抑制剂与索拉菲尼后肝癌细胞移植效率的示意图。
【具体实施方式】
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[0031]以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。
[0032]IC1-118, 551 (以下简称为ICI)为特异性β 2肾上腺素受体抑制剂，购自Sigma公司，货号 I127-5MG。
[0033]普萘洛尔为非选择性β?，β 2肾上腺素受体抑制剂，购自Sigma公司，货号P0884-1G。
[0034]索拉菲尼(Sorafenib)，购自LC laboratories，货号 S_8502。
[0035]肝细胞癌细胞系SMMC-7721、H印G2、PVTT, HMCC-LM3购自中科院细胞所。
[0036]实施例1:
[0037]将肝癌细胞系SMMC-7721、!fepG2、& PVTT分别传入96孔板，每孔3000个细胞，每种细胞分为DMSO及ICI两组，每组设5个副孔。待细胞贴壁后计为O时刻，同时各组分别给予DMSO或ICI 10 μ M。分别在0、24、48、72、96h吸掉培养基，加入用DMEM稀释的10%的CCK8检测试剂，37°C孵箱孵育Ih后检测450nm处的吸光度值。用各时间点所测的吸光度值绘制生长曲线。
[0038]由图1中A可知，ICI在24h就能够明显减慢肝癌细胞的增殖速度，并且这种趋势随着时间的延长而逐渐显著。
[0039]为了进一步证明ICI能够抑制肝癌细胞的增殖，我们进行了细胞克隆实验。具体实施如下:将MHCC-LM3细胞传入6孔板中，每孔500个细胞。分为D