在胰岛移植中作为佐剂的cxcr1/2抑制剂的制作方法
【专利说明】在肢岛移植中作为佐剂的CXCR1/2抑制剂
[0001]本申请是申请号为201080045208.5、发明名称为"在膜岛移植中作为佐剂的 CXCR1/2抑制剂"的申请的分案申请，该母案申请是2010年10月6日提交的PCT申请PCT/ EP2010/064921进入中国国家阶段的申请。
技术领域
[0002] 本发明设及可用于在1型糖尿病患者膜岛移植中作为佐剂的化合物。
【背景技术】
[0003] W整个膜腺或分离之膜岛形式进行的膜腺组织移植已经成为治疗1型膜岛素依 赖性糖尿病的临床选择。
[0004] 膜岛移植特别具有吸引力，该是因为与移植整个膜腺相比，膜岛移植具有更小的 创伤并且与较低的严重并发症的风险；但是，该种方法仍然受限于低效率。
[0005] 膜岛移植的早期策略基于已在实质器官移植中得到成功证明的方案（包括施用 免疫抑制剂（如硫挫嚷岭、环抱菌素和糖皮质激素）。结果证明该种策略在膜岛移植的具 体情形中不是有效的并且结果非常差，大多数的植入在移植起一年内都失败（Sulaiman和 化apiro，Di油etes，Obesity and Met油olism，8,2006，15-25)。
[0006] 近年来，引入了新的特异性免疫抑制方案和膜岛制备技术的埃德蒙顿方案 巧dmonton Protocol)的开发已显著地改善了膜岛移植的临床结果。
[0007] 根据埃德蒙顿方案，将膜岛从已故供者的膜腺中分离、纯化接着通过经上腹部 并进入肝口静脉放置的导管移植到受者中；当膜岛细胞输入肝脏后不久，该细胞开始释 放膜岛素。为了防止发生排斥，使用新的免疫抑制方案，该方案需要使用免疫抑制药物 (即西罗莫司（Sirolimus)和他克莫司（Tacrolimus))与CD25单克隆抗体达利珠单抗 值aclizum油）的组合（Saphiro等，N 化gl.JMed，2000，：M3(4) ;230-238)。
[000引遗憾的是，仍然有许多膜岛移植的缺陷没有解决，并且该些缺陷阻碍该方法成为 针对患有1型糖尿病患者的标准治疗方法。
[0009] 有关膜岛移植的第一个缺点是，即使埃德蒙顿方案显著地提高了成功率，由于一 系列复杂的现象（如血液介导的即刻炎症反应（IBMIR)、炎性细胞的动员和非特异性免 疫）所致，仍有高百分率的早期移植失败。事实上，在人体中肝内输入膜岛与血液介导的 即刻炎症反应、血栓W及伴随有血液肝酶升高的肝组织缺血有关炬arshes NR等，J Am Coll Surg，2005,200(3) ;353-361;Barshes NR等，J Leukoc Biol，2005,77(5) ;587-97; Be;rtuzzi等，J Clin Elndocrinol Met油，2004,89(11) ;5724-8;Miargava R等Di油etes， 2004,53(5)，；l3ll_7;Con1:reras等，2004,53(11) ;2894-14;Johansson等，Diabetes, 2005,54(6) ;1755-62)。在肝脏中植入过程中有多达50%至75%的膜岛损失（Contreras 等，同上），该被认为是造成为实现血糖量正常而需要巨大数目膜岛的主要原因炬arshes 等，同上）。
[0010] 另外，甚至当移植获得最初成功并且产生不依赖于受者的膜岛素时，该移植的膜 岛似乎也随时间失去其功能。该一事件限制了在移植患者中实现长期不依赖于膜岛素 的可能，从移植起两年后只有14%的患者表现出不依赖于膜岛素[MelocheRMWorldJ Gastroenterol2007; 13(47) ;6；M7-6355]。
[0011] 另一个缺点是埃德蒙顿方案需要使用免疫抑制药物组合；西罗莫司和他克莫司必 须终生服用或者只要移植的膜岛继续起作用就要服用。但是该些药物具有明显的副作用， 减少该些副作用是所期望的。来自免疫抑制治疗法的并发症是在该移植类型中报道的第二 常见的严重事件。
[0012] 因此，仍然有必要进一步的开发，W改善植入物的长期存活和功能，从而使对葡萄 糖随时间的控制并减少免疫抑制治疗。
[0013]CXCL8是一种由炎性介质诱导的趋化因子，其参与早期组织修复并且已被证实 通过诱导趋化、内皮细胞的存活和增殖来促进血管生成（Li等，JImmunol，2003，170 ; 3369-3376)，W及作为中性粒细胞引诱剂起作用。CXCL8通过与其同源的G蛋白偶联受体 CXCR1和CXCR2结合来发挥其作用。
[0014] 近来的文献假定CXCL8可W通过诱导植入组织的血管重建来促进植入（Mov址edi 等，Di油etes，2008,57 ;2128_36)。
[0015]EP1123276公开了N-(2-芳基-丙酷基）-横酷胺类及其可药用盐（其中包括 R(-)-2-[(4-异了基苯基）丙酷基]-甲横酷胺（I))，其作为CX化-8诱导的中性粒细胞趋 化和脱颗粒的抑制剂使用，特别是用于治疗诸如牛皮癖、类风湿性关节炎、溃瘍性结肠炎、 急性呼吸功能不全（ARD巧、先天性纤维化和肾小球肾炎等疾病。
[0016]EP1355641公开了R(-)-2-[(4-异了基苯基）丙酷基]-甲横酷胺及其可药用盐 (特别是其赖氨酸盐）在预防和治疗移植器官的缺血/再灌注损伤W及在实质器官（特别 是需要从供者取得并在移植前储存的肾）移植后由于排斥反应而导致的功能性损伤。所述 损伤被认为是造成植入物功能延迟的原因，该使得有必要在肾移植后进行透析。
[0017]EP1579859公开了N-(2-芳基-丙酷基）-横酷胺类（其中包括R(-)-2-[(4-异了 基苯基）丙酷基]-甲横酷胺及其赖氨酸盐）在制备用于治疗脊髓损伤的药物中的用途。
【发明内容】
[001引本发明人出乎意料地发现，与从现有技术教导中所期望的相反，CXCR1和/或CXCR2的激动剂对膜岛移植后的膜岛存活是有害的。如在之后的实施例中将描述的，与野生 型小鼠相比，当将膜岛移植到CXCR2敲除的BALB/C小鼠中时，膜岛表现出增强的功能和存 活，并且与对照小鼠相比具有持续更好的葡萄糖耐量和更低的葡萄糖浓度。
[0019] 另外，本发明人实施的实验清楚地证明了抑制CXCR1和/或CXCR2信号转导的化 合物能够有效地改善膜岛移植后植入物的存活和功能。
[0020] 因此，本申请的第一个目的是CXCR1和/或CXCR2的抑制剂作为佐剂在1型糖尿 病患者膜岛移植中的用途。
[0021] 对于根据本发明的"CXCR1和/或CXCR2的抑制剂"而言，其意指能够阻遏CX化8 之源自CXCR1和/或CXCR2活化的生物学活性的化合物。该些化合物可W是所述受体的竞 争性括抗剂或变构抑制剂。
[0022] 本发明优选的化合物是式I化合物或其可药用盐：
[0023]
[0024] 其中，R选自直链或支链的4- (Ci-Ce)烷基、4-S氣甲横酷氧基或3-苯甲酯基，并 且Ri是直链或支链的（Ci-Ce)烷基。具体地，根据本发明优选的化合物是R(-)-2-[(4-异 了基苯基）丙酷基]-甲横酷胺（通常称为瑞帕他辛化epertaxin)或瑞帕利辛，在下文中 称为瑞帕利辛）和R(-)-2-[(4'-=氣甲横酷氧基）苯基]-丙酷基-甲横酷胺（通常并且 在下文中称为莫瑞辛（Meraxin))。
[0025] 本发明化合物的优选的盐是赖氨酸盐和钢盐。本发明化合物的特别优选的盐是瑞 帕利辛的赖氨酸盐和莫瑞辛的钢盐。
【附图说明】
[0026] 图1 ;图A表示在敲除小鼠（淡色线）和野生型小鼠（黑线）中从同系移植400膜 岛的-1天至移植后巧天测量的非禁食性血糖（单位为mg/dl)。图B表示口服葡萄糖耐 量试验（OGTT)的结果。在施用葡萄糖之前W及口服葡萄糖后10分钟、20分钟、30分钟、60 分钟和90分钟后立即测定血糖（单位为mg/dl)。示出每只动物的血液葡萄糖曲线。
[0027] 图2;图A表示移植后在瑞帕利辛巧巧arixin)处理的小鼠（实线）或对照小鼠 (虚线）中在不同时间时的血糖。图B表示Cox回归多变量分析。
[002引图3a和3b用散点示出在瑞帕利辛存在或不存在时移植有来自同一分离物之膜岛 的小鼠在口服葡萄糖耐量试验（0GTT)(图3a)和静脉葡萄糖耐量试验（IVGTT)(图3b)中 获得的平均值。标记指明该分离物的数目。方形和圆形分别表示移植有250膜岛当量（1巧 或150膜岛当量的小鼠。上图和下图分别示出移植后1个月和3个月的数据。实线是鉴 别线；在鉴别线上方的圆形表示在瑞帕利辛组中比在载剂处理组（A+)中具有更高的观测 值。
[0029] 图4表示在移植有150膜岛当量（图A)或250膜岛当量（图B)的瑞帕利辛处理 的动物和载剂处理的动物移植后24小时和48小时时的丙氨酸氨基转移酶（ALT)的循环水 平。
[0030] 图5 ;图A表示在用瑞帕利辛、雷帕霉素、瑞帕利辛+雷帕霉素或载剂处理的小鼠