神经浸润抑制剂的制作方法
【专利说明】
[0001] 本申请是申请号为200980131148. 6、申请日为2009年6月5日、发明名称为"神 经浸润抑制剂"的中国专利申请的分案申请。
技术领域
[0002] 本发明设及神经浸润抑制剂。更详细而言，本发明设及W白介素6(比-6)抑制剂 作为有效成分的神经浸润抑制剂。
【背景技术】
[0003] 白介素6 (比-6)是一种也称作B细胞刺激因子2炬SF2)或干扰素0 2的细胞因子。 IL-6是作为参与B淋己细胞类细胞的活化的分化因子被发现的（非专利文献1)，之后明确 了其是影响各种细胞的功能的多功能细胞因子（非专利文献2)。有报道称；IL-6诱导T淋 己细胞类细胞的成熟（非专利文献3)。
[0004]IL-6在细胞上经由两种蛋白来传递其生物学活性。一种蛋白是IL-6所结合的分 子量约80kD的配体结合性蛋白的IL-6受体（非专利文献4、5)。IL-6受体除了W跨膜而 在细胞膜上表达的膜结合型受体的形式存在W外，还主要W由其胞外区构成的可溶性IL-6 受体的形式存在。
[0005] 另一种蛋白是参与非配体结合性的信号传递的分子量约130kD的膜蛋白甜130。 IL-6和IL-6受体形成IL-6^L-6受体复合体，然后与甜130结合，从而向细胞内传递IL-6 的生物学活性（非专利文献6)。
[0006] 目前，大多数膜腺癌病例仍W不能切除的进展状态被诊断，而在唯一可W期待治 愈的切除病例中，大多数病例往往在术后早期又复发。此外，不能切除、且体力状态（P巧或 主要脏器功能良好的病例将采用化学疗法，但即使是目前的标准治疗，其疗效也不充分。例 如，即使是位于首选药位置的盐酸吉西他滨，其症状缓和效果的有效率为23. 8%，存活期间 中位数为5. 7个月，1年存活率为18% (海外3期临床试验结果）。在日本，每年有20000 人被诊断为膜腺癌，死亡人数达22, 260人（2004年厚生劳动省的人口动态调查），在癌症死 因中位于第5位。
[0007] 迄今为止，本发明人等明确了W下事实：神经浸润是膜腺癌的特征性浸润方式之 一，在膜腺癌中几乎100%确认到神经浸润；神经浸润是重要的预后因子；神经浸润导致肝 细胞功能异常，与贫血、体力状态（P巧下降或营养不良等恶病质症状有关等。另外，神经浸 润被认为是癌症性疼痛等的原因，有些报道称通过对神经浸润好发部位进行放射线照射或 切除位于其上位的神经可W使症状得到一定程度的控制。但神经浸润的机理W及由神经浸 润引起的症状所表现的机理尚不明确，因此，现实状况是：在神经浸润的控制W及神经浸润 所引起的症状的控制方面还缺乏经验。另一方面，不论癌症种类如何，普遍确认到神经浸 润，在前列腺癌、胃癌、头颈部癌中，神经浸润作为预后因子被报道。
[0008] 与本申请的发明相关的先行技术文献信息如下所示。
[0009] 先行技术文献
[0010] 非专利文献
[0011] 非专利文献 1 ;Hirano,T.等人，化Uire(1986)324,73-76
[0012] 非专利文献 2 ;Akira，S.等人，Adv.inImmunology(1993) 54,1-78
[0013] 非专利文献 3 ;Lotz，M.等人，J.Exp.Med. (1988) 167,1253-1258
[0014] 非专利文献 4 ;Taga，T.等人，J.Exp.Med. (1987) 166,967-981
[0015]非专利文献 5;Yamasaki，K.等人，Science(1988) 241，825-828
[0016] 非专利文献 6 ;Taga，T.等人，Cell(1989) 58, 573-581
【发明内容】
[0017] 发明所要解决的课题
[001引因此，本发明提供新的神经浸润抑制剂。本发明还提供新的膜腺癌治疗药。
[0019] 解决课题的方法
[0020] 本发明人等为了解决上述课题进行了深入研究，结果发现；在膜腺癌的神经浸润 模型中，通过抑制比-6,神经浸润得到抑制，从而完成了本发明。并进一步明确了；IL-6受 体在人膜腺癌细胞株中表达、W及IL-6使膜腺癌细胞的趋化能力、迁移能力和细胞内信号 亢进，发现通过抑制IL-6可W治疗膜腺癌。进一步发现：通过对小鼠神经浸润模型给予 IL-6抑制剂，可W抑制人膜腺癌神经浸润。
[0021] 即，更具体而言，本发明提供W下山~巧2]。
[0022] [1]膜腺癌治疗药，其W白介素6(比-6)抑制剂作为有效成分。
[0023] [2]细胞的神经浸润抑制剂，其WIL-6抑制剂作为有效成分。
[0024] [3]凹所述的抑制剂，其特征在于：抑制癌细胞的神经浸润。
[002引[句閒所述的抑制剂，其特征在于：抑制膜腺癌细胞的神经浸润。
[002引 [5]凹~W中任一项所述的抑制剂，其特征在于；抑制向中枢侧进行的神经浸 润。
[0027] [6]山~[5]中任一项所述的治疗药或抑制剂，其特征在于；比-6抑制剂是与 IL-6受体结合的物质。
[002引 [7] [6]所述的治疗药或抑制剂，其特征在于：比-6抑制剂为抗比-6受体抗体。
[0029] 巧][7]所述的治疗药或抑制剂，其中，抗IL-6受体抗体为嵌合抗体、人源化抗体 或人抗体。
[0030] [9]膜腺癌的治疗方法，该方法包括：将IL-6抑制剂给予对象的步骤。
[003。 [10]细胞的神经浸润抑制方法，该方法包括：将比-6抑制剂给予对象的步骤。
[003引[山[10]所述的方法，其特征在于：抑制癌细胞的神经浸润。
[003引[切[山所述的方法，其特征在于：抑制膜腺癌细胞的神经浸润。
[0034][切[10]~[切中任一项所述的方法，其特征在于；抑制向中枢侧进行的神经浸 润。
[003引 [M] [9]~山]中任一项所述的方法，其特征在于：比-6抑制剂是与比-6受体结 合的物质。
[003引 [1引[M]所述的方法，其特征在于：比-6抑制剂为抗比-6受体抗体。
[0037] [16] [1引所述的方法，其中，抗IL-6受体抗体为嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。
[003引 [17]IL-6抑制剂在制备膜腺癌治疗药中的应用。
[0039] [1引IL-6抑制剂在制备细胞的神经浸润抑制剂中的应用。
[0040] [19] [18]所述的应用，其特征在于：抑制癌细胞的神经浸润。
[0041] 巧0] [19]所述的应用，其特征在于：抑制膜腺癌细胞的神经浸润。
[004引 巧^ [18]~巧0]中任一项所述的应用，其特征在于；抑制向中枢侧进行的神经浸 润。
[004引 巧引[17]~巧U中任一项所述的应用，其特征在于：比-6抑制剂是与比-6受体 结合的物质。
[0044] 巧3]巧2]所述的应用，其特征在于JL-6抑制剂为抗IL-6受体抗体。
[0045] 巧4]巧3]所述的应用，其中，抗IL-6受体抗体为嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。
[0046] 巧5]比-6抑制剂，该比-6抑制剂在治疗膜腺癌的方法中使用。
[0047] 巧6]比-6抑制剂，该比-6抑制剂在用于抑制细胞的神经浸润的方法中使用。
[0048] 巧7]巧6]所述的IL-6抑制剂，其特征在于：抑制癌细胞的神经浸润。
[0049] 巧引巧7]所述的IL-6抑制剂，其特征在于：抑制膜腺癌细胞的神经浸润。
[0050] 巧9]巧6]~巧8]中任一项所述的比-6抑制剂，其特征在于：抑制向中枢侧进行 的神经浸润。
[0051] 巧0]巧引~巧9]中任一项所述的IL-6抑制剂，其特征在于JL-6抑制剂是与 IL-6受体结合的物质。
[0052] 巧1]巧0]所述的IL-6抑制剂，其特征在于JL-6抑制剂为抗IL-6受体抗体。
[005引 巧引巧^所述的比-6抑制剂，其中，抗比-6受体抗体为嵌合抗体、人源化抗体或 人抗体。
【附图说明】
[0054] 图1是显示人膜腺癌细胞株中IL-6a受体（IL6R)的mRNA表达量（A)和IL-6 0 受体（甜130)的mRNA表达量做的图。
[00巧]图2是显示使用人重组IL-6,测定IL-6对人膜腺癌细胞株的增殖能力、趋化能力、 迁移能力的影响的结果的图。A和B;显示通过经时性计测细胞数来测定细胞增殖能力的结 果；C;显示通过趋化性分析来测定趋化能力的结果；D;显示通过伤口愈合分析来测定迁移 能力的结果。
[0056] 图3是显示使用人重组IL-6(rhIL6)，利用蛋白质印迹法评价IL-6对人膜腺癌细 胞株Capan-1的细胞内信号的影响的结果的图。A;显示细胞内磯酸化STAT3蛋白表达、B; 显示细胞内磯酸化化kl/2蛋白表达、C;显示细胞内磯酸化Akt蛋白表达。
[0057] 图4是显示使用人膜腺癌细胞株的、小鼠神经浸润模型的照片和图。A;显示4周 后的神经浸润肉眼图像，B;显示经时性浸润距离的图，C;显示4周后的神经浸润组织图像。
[0058] 图5是显示在神经浸润模型和各种神经损伤模型中小鼠IL-6表达分布的照片和 图。A;显示神经浸润模型图像，B和C;显示通过RT-PCR做或巧光免疫染色似测定的、 神经浸润模型及其他神经损伤模型中的小鼠IL-6表达量。
[0059] 图6是显示在神经浸润部分膜腺癌细胞的磯酸化STAT3蛋白表达的结果的图。
[0060] 图7是显示由甜130击倒（knockdown)产生的神经浸润距离抑制效果的图。
[0061] 图8是显示由IL-6R击倒产生的神经浸润距离抑制效果的图。
[0062] 图9是显示对小鼠神经浸润模型给予JAK抑制剂AG490或抗IL-6受体抗体对神 经浸润的影响的图。A;显示给予JAK抑制剂AG490时的经时性浸润距离的图。DMS0 ;显示 对照组、AG490 ;显示AG490给药组。B;显示给予抗IL-6受体抗体时的经时性浸润距离的 图。hIgG;显示对照组、MRA;显示抗IL-6受体抗体给药组。
【具体实施方式】
[0063] 在本发明中，"IL-6抑制剂"是指阻断IL-6的信号传递、抑制IL-6的生物学活性的 物质。IL-6抑制剂的具体例子有：与IL-6结合的物质、与IL-6受体结合的物质、与gpl30 结合的物质等。作为IL-6抑制剂，可W列举；抑制作为IL-6的细胞内信号重要的STAT3磯 酸化的物质、例如AG490等。对IL-6抑制剂没有特别限定，包括抗IL-6抗体、抗IL-6受体 抗体、抗gpl30抗体、IL-6修饰体、可溶性IL-6受体修饰体、IL-6部分肤、IL-6受体部分 肤、与上述物质显示出同样的活性的低分子化合物等。
[0064] 作为比-6抑制剂的优选方案，可W列举；比-6受体抑制剂、特别是抗比-6受体抗 体。
[0065] 对本发明中使用的抗体的来源没有特别限定，但优选来自哺乳动物，更优选来源 于人的抗体。
[0066] 本发明中使用的抗体，可W利用公知的方法W多克隆或单克隆抗体的形式得到。 作为本发明中使用的抗体，特别优选来源于哺乳动物的单克隆抗体。来源于哺乳动物的单 克隆抗体有；由杂交瘤产生的单克隆抗体；W及利用基因工程学方法，通过携带抗体基因 的表达载体转化宿主，在所得宿主中产生的单克隆抗体。通常，该抗体通过与IL-6JL-6受 体、gpl30等结合，阻断向细胞内传递IL-6的生物学活性。
[0067] 产生单克隆抗体的杂交瘤基本上可W利用公知技术，如下操作来制作。目P，使