簕菜提取物抑制α-葡萄糖苷酶的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及簕菜提取物的一种新用途，具体涉及簕菜提取物制备α-葡萄糖苷酶 抑制剂的应用。
【背景技术】
[0002] 糖尿病是一类代谢性疾病，它的特征是血糖长时间高于标准值。高血糖会造成三 多一少的症状：吃多、喝多、尿多、以及体重下降。如果未经治疗，糖尿病可能引发许多并发 症。急性并发症包括糖尿病酮酸血症与高渗透压高血糖非酮酸性昏迷；严重的长程并发症 贝抱括心血管疾病、中风、慢性肾脏病、糖尿病足、以及视网膜病变等。
[0003] 世界卫生组织2011年的的报告指出全世界有3. 46亿人患有糖尿病，2004年估计 有340万人死于高血糖，超过80 %的糖尿病死亡发生在低收入和中等收入国家。2013年全 球共有3. 82亿名糖尿病患者，当中有90%是第二型糖尿病。在成年人中患有糖尿病的比例 已经达到8. 3 %，预期到2035年全世界糖尿病患者将增加到5. 92亿人。2012-2013年间，糖 尿病每年造成1500万至5100万人死亡，在死因中排名第八。因此，糖尿病已经成为一种严 重威胁人类健康的慢性疾病，如何防治糖尿病已经成为目前医药界重点关注的一大课题。
[0004] 目前市场上治疗糖尿病药物的作用机制主要有：（1)刺激胰岛β细胞分泌胰岛 素；（2)降低肠道对葡萄糖的吸收；（3)抑制肝糖产生；(4)增强周缘组织对胰岛素敏感性。 口服降糖药有以下几类：（1)磺脲类药物：属于促胰岛素分泌剂，主要药理作用是通过刺激 胰岛β细胞分泌胰岛素，增加体内的胰岛素水平而降低血糖；（2)噻唑烷二酮类药物：主要 通过增加靶细胞对胰岛素作用的敏感性而降低血糖；(3)格列奈类药物：为非磺脲类的胰 岛素促泌剂，主要通过刺激胰岛素的早期分泌而降低餐后血糖；(4) α -糖苷酶抑制剂：通 过抑制碳水化合物在小肠上部的吸收而降低餐后血糖；(5)二肽基肽酶-4 (DPP-4)抑制剂： 通过抑制DPP-4而减少GLP-I在体内的失活，增加 GLP-I在体内的水平；(6)双胍类药物： 主要药理作用是通过减少肝葡萄糖的输出和改善外周胰岛素抵抗而降低血糖。
[0005] α -葡萄糖苷酶抑制剂是一类以延缓肠道碳水化合物吸收而达到治疗糖尿病的口 服降糖药物。α -葡萄糖苷酶抑制剂是比较成熟的治疗糖尿病药物，已广泛应用于临床。 其作用机制为：竞争性抑制位于小肠的各种α-葡萄糖苷酶，使淀粉类分解为葡萄糖的速 度减慢，从而减缓肠道内葡萄糖的吸收，降低餐后高血糖。目前已上市并在临床上应用的 α -葡萄糖苷酶抑制剂类降糖药主要有阿卡波糖、伏格列波糖等。
[0006] 簕菜，学名为白簕（Acanthopanax trifoliatus (Linn. )Merr.)，又称鶴掌簕、三叶 五加、三加皮、苦刺、刺三加，为五加科（Araliaceae)五加属（Acanthopanax)植物。广泛分 布于我国中部和南部，印度、菲律宾、缅甸、泰国、越南和孟加拉国等地也有分布。簕菜是药 食两用植物，簕菜产地民间自古就有采集簕菜作为鲜食蔬菜和保健药材的习俗。李时珍曰： "五加治风湿痪库，壮筋骨，其功良深"。明代《食物本草》中记有"五加，叶作蔬食，去皮肤风 湿"。据《广东药用植物简编》（吴修仁编）记载，簕菜根、茎、叶均可入药，其辛、微苦、涩、 凉，气微香。根，祛风除湿、散痕、止痛。叶，疏风，消肿，止痒，有舒筋活血、消肿解毒之功效。 据《中国高等植物图鉴》，簕菜味苦、辛、凉，具有清热解毒、祛风利湿、舒筋活血、止咳平喘之 功效。簕菜在广东江门市的恩平等地盛产，并且十多年前已经开始了人工种植。目前为止， 并未见有关于簕菜降血糖作用方面的研宄报道。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是为现有制备治疗糖尿病药物领域提供一种新途径。
[0008] 为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：
[0009] 簕菜提取物制备α -葡萄糖苷酶抑制剂的应用。
[0010] 进一步地，所述簕菜提取物按照以下方法提取而得：
[0011] (1)采集新鲜簕菜原料，常温干燥后粉碎，得簕菜粉末；
[0012] (2)将簕菜粉末用乙醇进行冷浸提取，每隔一天进行过滤，共提取三次，合并提取 液，浓缩得簕菜醇提物；
[0013] (3)将簕菜醇提物依次使用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，萃取液分别进行 浓缩，得到石油醚层、乙酸乙酯层、正丁醇层，簕菜提取物为簕菜醇提物和/或乙酸乙酯层。
[0014] 进一步地，所述簕菜原料是簕菜的根、茎、叶和全植物的至少一种。
[0015] 进一步地，所述乙醇的体积浓度是30~95%。
[0016] 进一步地，所述步骤（2)中每千克簕菜粉末用10~30升的乙醇进行提取。
[0017] 进一步地，述簕菜提取物含有以下化合物1~9中的至少一种：
[0018]
[0019] 一种α -葡萄糖苷酶抑制剂，其含有上述簕菜提取物，以及一种或多种在药学上 可接受的辅助剂。
[0020] 进一步地，所述α -葡萄糖苷酶抑制剂是胶囊剂、片剂、颗粒剂或口服液。
[0021] 本发明以对硝基苯-a -D-吡喃葡萄糖苷（PNPG)为底物的酶抑制剂筛选模型测定 了簕菜提取物及其化学成分对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。实验结果表明：不同部位的簕 菜中的抑制α-葡萄糖苷酶的活性物质都可以通过有机溶剂萃取步骤进行浓缩；簕菜叶、 茎、根的乙酸乙酯层都表现出最高的抑制活性；簕菜乙酸乙酯层的9个萜类化学成分中，二 猫化合物ent-kaur-15-en-17-al_19-〇ic acid具有最好的抑制α -葡萄糖苷酶的活性，远 高于对照品阿卡波糖。
[0022] 本发明的有益效果是：本发明从簕菜中分离得到簕菜提取物，从簕菜乙酸乙酯层 中鉴定了9个萜类化合物。通过实验证明簕菜提取物具有α-葡萄糖苷酶的抑制活性，尤 其是簕菜叶和根的乙酸乙酯层对α-葡萄糖苷酶的抑制活性高于现有药物阿卡波糖，在9 个萜类化合物中，化合物6具有最好的抑制α -葡萄糖苷酶的活性，所以簕菜提取物可以用 于制备治疗糖尿病的药物制剂，包括胶囊剂、片剂、颗粒剂或口服液。
【附图说明】
[0023] 图1是实施例3簕菜不同部位提取物对α -葡萄糖苷酶的抑制率；
[0024] 图2是实施例4簕菜化学成分对α -葡萄糖苷酶的抑制率。
【具体实施方式】
[0025] 簕菜：2012年4月份采于广东省江门市恩平雪壮簕菜厂，经中国科学院华南植物 园叶华谷研宄员鉴定为五加科植物簕菜。
[0026] α -葡萄糖苷酶、牛血清白蛋白（BSA)和对硝基苯-a -D-吡喃葡萄糖苷（PNPG)均 购自美国Sigma-Aldrich公司；拜唐苹（每片含50mg阿卡波糖）为拜耳医药保健有限公司 生产；其它试剂均为国产分析纯。
[0027] Inf inite F200多功能酶标仪，奥地利TECAN公司；单道、多道移液器，德国 Eppendorf公司；96孔酶标板，德国Greiner公司。
[0028] 实施例1
[0029] 簕菜提取物的制备
[0030] 采集簕菜新鲜叶、茎、根，常温干燥后粉碎，分别取出200g，加入2L 95%食用酒精 进行冷浸提取，每隔一天进行过滤，共提取三次，合并提取液，用旋转蒸发仪进行浓缩得不 同部位的醇提物（叶：L ;茎：S ;根：R)。各醇提物依次使用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行 萃取，浓缩干燥后分别得到石油醚层（叶：LP ;茎：SP ;根：RP)、乙酸乙酯层（叶：LE ;茎：SE ; 根：RE)、正丁醇层（叶：LN ;茎：SN ;根：RN)。所有提取物真空干燥后均4°C保存备用。
[0031] 实施例2
[0032] 簕菜提取物的化学成分
[0033] 簕菜乙酸乙醋层提取物经反复硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱层析、反相硅胶 柱层析、制备薄层层析（PTLC)、MCI树脂柱层析等分离手段，分离纯化得到单体化合物， 综合运用现代波谱技术（IR、UV、MS^H-NMR^C-NMR、DEPlVH- 1H COSY、HSQC、HMBC)以 及与文献比对确定了 9个已知的猫类化合物的结构，它们的化学名分别为impressic acid(l) ；3a , 11 a-dihydroxy-lup-20(29)-en-23-al-28-〇ic acid(2) ；3a-hydro xy-lup-20 (29) _en_2 3, 28-dioic acid(3);3a ,11a -di hydroxy-1 up-20 (29) _en_2 3, 28-dioic acid(4) ；3a-hydroxy-lup-20(29)-en-3〇-〇l-23, 28-dioic acid(5)； en