一种球虫佐剂及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及免疫技术领域，具体的涉及一种球虫佐剂及其应用。
【背景技术】
[0002] 佐剂不仅是弱毒疫苗的重要组成成分，对增强灭活疫苗与新型基因工程疫苗的免 疫效果亦发挥着不可替代的作用。
[0003]随着人们对免疫反应尤其是先天性免疫的认识的加深，佐剂研宄已从凭经验反复 试验转向更为理性。如弗氏完全佐剂（CFA)含有灭活的分枝杆菌（卡介苗）成份，是典型 的促进机体产生体液免疫和细胞免疫应答的佐剂，可诱导产生Thl型细胞因子，促进IgG的 产生，抑制IgM的产生，从而抑制免疫耐受的产生，推迟超敏反应，增加移植排斥，促进抗肿 瘤作用。MPL(单磷酸脂质A)是沙门氏菌（Salmonella Minnesote)LPS的衍生物，可激活 TLR4受体，诱导Thl型细胞免疫应答，并且可以活化CTLs细胞。由MPL和铝构成的AS04佐 剂已经被批准用于人HPV和HBV疫苗中。相比于铝佐剂，AS04能够诱导产生更早和更长久 的体液免疫应答。目前还有很多Toll样受体激动剂被开发成佐剂，包括poly (I:C)、GLA、 鞭毛蛋白、鸟苷类似物、CpG DNA等。
[0004] 球虫含有6000余种蛋白质、多种脂类和糖类等大分子物质，其抗原组分是弗氏佐 剂中卡介苗组分的几十倍，相比于细菌，球虫具有激发机体更多模式识别受体（PRRs)的潜 能。有研宄表明球虫可以通过调节先天性免疫和适应性免疫应答，增强机体对其他病原微 生物的免疫应答。而且球虫的宿主具有专一性，不会跨种间传播，因而其生物安全性较高。
[0005]因此有必要开发一种基于球虫复杂的抗原组分的佐剂，从而为提升疫苗的免疫效 果提供新的途径。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于提供一种可以诱导机体产生更有效的保护性体液免疫和细胞 免疫应答的免疫佐剂。
[0007]为达到以上目的，本发明提供了一种球虫佐剂，所述球虫佐剂包括顶复门真球虫 目原虫和/或其提取物。
[0008]可选的，所述顶复门真球虫目原虫选自艾美耳球虫、弓形虫、隐孢子虫和疟原虫中 的至少一种。
[0009]可选的，所述提取物为顶复门球虫卵囊提取物。
[0010]可选的，所述提取物选自顶复门球虫的DNA、RNA、脂类、糖类及蛋白质中的至少一 种。
[0011] 本发明还提供了所述球虫佐剂在制备针对病原体的疫苗中的应用。
[0012] 可选的，所述疫苗为禽用疫苗、至少两种禽用疫苗的联苗、牛用疫苗、至少两种牛 用疫苗的联苗、猪用疫苗、至少两种猪用疫苗的联苗、羊用疫苗、至少两种羊用疫苗的联苗、 人用疫苗或至少两种人用疫苗的联苗。
[0013] 可选的，所述禽用疫苗包括禽流感酶活疫苗、鸡新城疫灭活疫苗、鸡减蛋综合症灭 活疫苗和鸡传染性法氏囊活疫苗；
[0014] 所述猪用疫苗包括猪蓝耳病弱毒活疫苗、猪口蹄疫灭活疫苗、猪伪狂犬灭活疫苗、 猪喘气病弱毒菌苗、猪链球菌双价灭活菌苗、副猪嗜血杆菌灭活疫苗、牛传染性鼻气管炎灭 活疫苗、支原体灭活疫苗；
[0015] 所述牛用疫苗包括牛口蹄疫0型灭活疫苗、牛传染性胸膜肺炎弱毒苗、牛巴氏杆 菌病油乳剂疫苗、牛传染性鼻气管炎弱毒疫苗、牛沙门氏菌灭活苗；
[0016] 所述羊用疫苗包括羔羊大肠杆菌疫苗、羔羊大肠杆菌疫苗、氢氧化铝菌羔羊痢疾 苗、羊痘鸡胚化弱毒疫苗、II号炭疽菌苗、口疮弱毒细胞冻干苗；
[0017] 所述人用疫苗包括乙肝疫苗、卡介苗、麻瘆疫苗、脊髓灰质炎疫苗。
[0018] 本发明还提供了所述球虫佐剂在制备抗肿瘤疫苗中的应用。
[0019] 本发明还提供了所述球虫佐剂在制备免疫调节复合物中的应用。
[0020] 相比于传统的油乳佐剂，本发明的球虫佐剂具有严格的宿主特异性（对非宿主动 物的安全性）及激发宿主免疫应答的有效性，可以使疫苗产生的免疫效果提高两个抗体滴 度，而且能够诱导对预防病毒及其它胞内病原体感染更为有效的Thl型和CTL型细胞免疫 应答。
【附图说明】
[0021] 图1为本发明球虫佐剂用于鸡重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-4株 +Re-6株）后对禽流感病毒H5亚型Re-4株及Re-6株血凝抑制抗体效价的测试结果。
[0022] 图2为本发明球虫佐剂用于鸡新支流三联灭活疫苗后，血清中ND、H9血凝抑制抗 体效价的测试结果。
[0023] 图3为本发明球虫佐剂添加于鸡新支流三联灭活疫苗（La Sota株+M41株+H9WD 株）后，同时滴鼻免疫鸡传染性法氏囊病活疫苗（Gumboro D78)检测其对传染性法氏囊病 活疫苗的免疫增强效果。
[0024] 图4为本发明球虫佐剂用于鸡新支减流四联灭活疫苗免疫蛋鸡后产生的针对ND、 IB、EDS及H9抗体效价的测试结果。
[0025] 图5为本发明球虫卵囊提取物佐剂用于H7N9病毒灭活疫苗免疫小鼠后血清中的 抗体效价测试结果。
[0026] 图6为本发明球虫卵囊提取物佐剂用于H7N9病毒灭活疫苗免疫小鼠后对H7N9的 保护效果。
[0027] 图7为本发明球虫卵囊提取物佐剂用于H7N9病毒灭活疫苗免疫小鼠后激发机体 产生的细胞免疫应答水平。
[0028] 图8为本发明球虫卵囊提取物佐剂用于H7N9病毒灭活疫苗免疫小鼠后检测其对 疫苗使用剂量的影响。
【具体实施方式】
[0029] 下面将通过【具体实施方式】对本发明进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给 出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在 不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。
[0030] 本发明提供了一种球虫佐剂，所述球虫佐剂包括顶复门真球虫目原虫和/或其提 取物。
[0031] 其中，所述顶复门真球虫目原虫（apicomplexanparasites)是一类专一性的细胞 内寄生虫，包括隐孢子虫、艾美耳球虫、等孢球虫、弓形虫、疟原虫等。这类原虫具有相似的 亚细胞结构和保守的入侵机制。
[0032] 在本发明的一种【具体实施方式】中，所述顶复门真球虫目原虫选自艾美耳球虫 (Eimeriaspp.)、弓形虫（Toxoplasmagondii)、隐抱子虫（Cryptosporidiumspp.)和痕原 虫（Plasmodiumspp.)中的至少一种。
[0033] 其中，艾美耳属球虫包括柔嫩艾美耳球虫（Eimeriatenella)、巨型艾 美耳属球虫（Eimeriamaxima)、和缓艾美耳球虫（Eimeriamitis)、堆型艾美耳 球虫（Eimeriaacervulina)、斯氏艾美耳球虫（Eimeriastiedae)、肠艾美耳球虫 (Eimeriaintestimalis)及无残艾美耳球虫（Eimeriairresidua)。优选的，当所述艾美耳 球虫为柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫或巨型艾美耳球虫时，获得的免疫佐剂激发免疫 应答的效果更好。
[0034] 其中，弓形虫包括刚地弓形虫（T.gondii) 〇
[0035] 其中，隐孢子虫包括微小隐孢子虫（C.parvum)。
[0036] 其中，疱原虫包括恶性疱原虫（Plasmodiumfalciparum)、间日疱原虫 (Plasmodiumvivax)、三日痕原虫（Plasmodiummalariae)和卵形痕原虫（Plasmodium ovale)，优选的，所述疟原虫为恶性疟原虫。
[0037] 在一个优选的实施方式中，所述佐剂包括柔嫩艾美耳球虫（E.tenella)以及刚第 弓形虫（T.gondii)成分。
[0038] 在另一个优选的实施方式中，所述顶复门真球虫原虫选自由刚第弓形虫 (T.gondii)、柔嫩艾美耳球虫（E.tenella)、巨型艾美耳属球虫（E.maxima)、和缓艾美