重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子阴道膨胀栓及其制备方法和检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于阴道栓剂领域，特别涉及一种重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子阴道膨 胀栓及其制备方法和检测方法。
【背景技术】
[0002] 重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子（rhGM-CSF)是由活化的T细胞、B细胞、巨噬细 胞、肥大细胞、内皮细胞及成纤维细胞等细胞产生并分泌的一种酸性蛋白质。rhGM-CSF具有 生白细胞的作用，是一种调节造血和白细胞功能必须的细胞生长因子，它能够全面改善慢 性溃疡的病理特征，促进创伤修复，增强粒细胞和巨噬细胞的杀菌能力，在机体内广泛参与 免疫及抗感染等过程。
[0003] 近些年，由于基因工程技术可以大量的生产出rhGM-CSF，从而促进了对其的研宄 和临床应用，是已正式投放市场的细胞因子之一，且临床应用非常广泛，涉及很多领域。目 前rhGM-CSF的临床应用主要包括：在肿瘤性疾病中的应用、在骨髓移植中的应用、抗感染 治疗中的应用及促进伤口愈合中的应用等。
[0004] 宫颈炎（cervicitis)及诱发宫颈糜烂是已婚妇女的多发病，据统计已婚妇女宫 颈炎发病率高达36. 9%。目前，临床上对于宫颈炎的治疗，在排出早期宫颈癌之后，多以局 部治疗为主。对于糜烂面积小或炎症浸润较浅的病例可用腐蚀性药物局部敷用；糜烂面积 大或炎症浸润较深的病例，可用冷冻、激光或电熨疗法；急性宫颈炎一般口服广谱抗生素治 疗。上述临床治疗方法的局限性在于药物都不能深入达到炎性组织，因此患者远期效果不 满意，即使近期有疗效，但是不久又会复发。
[0005] rhGM-CSF有清除坏死组织、趋化血液循环中单核细胞进入组织成为巨噬细胞、 活化炎症局部聚集的巨噬细胞和中性粒细胞的功能。活化的巨噬细胞和中性粒细胞可以 产生和分泌胶原酶、弹性蛋白酶、纤溶酶激活剂等；另外，内皮细胞和上皮细胞表面含有 rhGM-CSF受体，rhGM-CSF可以直接促进内皮细胞迀移、增生及活化，使新的鳞状上皮覆盖 创面，最终使得疾病得到彻底治疗。
[0006] 迄今为止，rhGM-CSF外用制剂用于治疗宫颈炎和宫颈糜烂的研宄工作及相关文献 还较为少见。另外，rhGM-CSF作为一种蛋白质，本身性质不稳定，很容易发生脱氨作用、氧 化作用、水解作用、二硫键的错配及变性、聚集、沉淀等现象；同时其分子较大，并具有一定 的空间结构，在释放过程中更容易受到空间位阻的影响，影响其药物释放效果。专利申请 CN200510085861. 5中公开了粒细胞巨噬细胞刺激因子治疗宫颈炎和宫颈糜烂外用制剂的 新用途，但其未对其栓剂中rhGM-CSF稳定性进行考察，没有解决栓剂的长期贮存、运输等 问题。
【发明内容】
[0007] 为了解决上述技术问题，增加 rhGM-CSF的稳定性，充分发挥疗效，本发明研宄了 一种rhGM-CSF阴道膨胀栓及其制备方法；同时还提供了一种能够控制上述rhGM-CSF阴道 膨胀栓产品质量的科学检测方法。
[0008] 本发明具体技术方案如下：
[0009] 一种重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子（rhGM-CSF)阴道膨胀栓，所述膨胀栓包括 含药基质和可膨胀的膨胀载体；所述含药基质主要由rhGM-CSF和基质制成，含药基质涂敷 在膨胀载体表面，所述膨胀载体在饱和吸水后的膨胀值大于1. 1，所述膨胀栓各成分的重量 份数为：
[0010] 重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子 0.005-0.18
[0011] 基质 166-300
[0012] 膨胀载体 185-500
[0013] 所述基质选自合成脂肪酸酯、天然脂肪酸酯、类脂类基质、水溶性基质、凝胶基质、 氢化油、甘油酯、分馏油、硬脂酸酯或胶体化合物中的一种或多种；
[0014] 所述合成脂肪酸酯选自混合脂肪酸甘油酯、硬脂酸丙二醇酯、硬化油、半合成脂肪 酸甘油酯、半合成椰油酯、Witepsol、半合成棕榈油酯或半合成山苍子酯中的一种或多种；
[0015] 所述天然脂肪酸酯选自乌桕脂、香果脂、茴香脂、柯克姆脂或可可豆脂中的一种或 多种；
[0016] 所述类脂类基质选自羊毛脂或羊毛醇；
[0017] 所述水溶性基质选自聚乙二醇400、聚乙二醇1500、聚乙二醇4000、聚乙二醇 6000、甘油明胶、吐温60、吐温65、聚氧乙稀缩合物Idropostal、聚氧乙稀单硬脂酸醋或泊 洛沙姆中的一种或多种；
[0018] 所述凝胶基质选自羧甲基纤维素钠、羟丙甲纤维素、卡波姆、海藻酸或海藻酸钠中 的一种或多种；
[0019] 所述氢化油选自氢化花生油、氢化蓖麻油或氢化棉籽油中的一种或多种；
[0020] 所述甘油醋选自Adeps Solidus、Massa Estarinum(饱和12-18碳脂肪酸的甘油 酯）A、Massa Estarinum AS、Massa Estarinum B、Massa Estarinum C、Massa Estarinum D、 Massa Estarinum E、Massa Estarinum I、Massa Estarinum T、Massa Mf13、Suppository Base W、Suppository Base AB、Suppository Base A、Suppository Base B、Suppository Base BC、Suppository Base BD、Suppository Base BBC、Suppository Base E、Suppository Base BCF、Suppository Base C、Suppository Base D、Suppository Base 299、Wecobee W、 Wecobee K、Wecobee S、Wecobee M、Wecobee ES、Massuppol、Massuppoll5、Suppocire 0SI、 Suppocire OSIx Suppocire A、Suppocire B、Suppocire C、Suppocire D、Suppocire DM、 Suppocire H、 Suppocire L、 Tegester Triglyceride Bases-9、 Tegester Triglyceride Bases-MA、Tegester Triglyceride Bases-57、甘油三棕榈酸醋、甘油三硬脂酸醋、甘油山 嵛酸酯或月桂酸甘油三酯中的一种或多种；
[0021] 所述分馏油选自分馏棕榈油或分馏椰子油；
[0022] 所述硬脂酸酯选自木糖醇酐单硬脂酸酯、硬脂酸棕榈甘油酯、聚乙二醇单硬脂酸 酯、乙二醇单硬脂酸酯或单硬脂酸甘油酯中的一种或多种；
[0023] 所述胶体化合物选自阿拉伯胶、明胶或果胶中的一种或多种。
[0024] 本发明所述的英文名称的基质收录于《工业药剂学理论与实践》书中（L.拉赫 曼，H.A.利伯曼，J.L.卡尼希.工业药剂学理论与实践，化学工业出版社，第二版： 215-217)〇
[0025] 本发明采用了独创的"阴道内贴附式给药技术"，该技术通过在栓剂中加入膨胀载 体来实现。普通栓剂由于重力的关系，无论使用者是在站立、坐式或躺式体位下，总有阴道 不能或较少接触到含药基质，所述的膨胀载体膨胀后，含药基质可呈360°与阴道内壁接 触，充分给药，给药面积扩大6倍，药物直接贴附到病灶部位，使原来无法接触药物的部位 也能得到有效贴附治疗；并且由于药栓在阴道当中起到的隔离作用，使创面之间不再互相 接触，从而避免二次感染，使其不再反复发作。此外，膨胀载体的引入应用了"防侧漏栓体" 设计理念，因为膨胀载体尾端（非含药基质）的膨胀，可以与阴道壁紧贴，进而防止药物和 基质的外流，减少衣物的污染和保持药物的有效浓度。并且通过"内芯膨胀系数控制技术"， 可使膨胀载体在饱和吸水后的膨胀值大于1. 1。
[0026] 进一步，所述膨胀栓各成分的重量份数为：
[0027] 重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子 0. 05-0. 1
[0028] 基质 180-235
[0029] 膨胀载体 205-423
[0030] 所述基质为甘油酯、水溶性基质和胶体化合物的混合物，所述甘油酯、水溶性基质 和胶体化合物的重量份数为2-4:7-10:1。rhGM-CSF与水溶性基质制成栓剂后，可以有效克 服栓剂熔点低，保存困难等问题；本发明通过实验得出，加入甘油酯和胶体化合物后可以减 轻对人体的刺痛性，提高了患者依从性。
[0031] 甘油酯为Massa Estarinum E，所述水溶性基质为甘油明胶，所述胶体化合物为阿 拉伯胶，所述膨胀栓各成分的重量份数为：
[0032] 重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子 0. 06 Massa Fstarinum E 50 甘油明胶 1H4 阿拉伯胶 16.6 膨胀载体 360。
[0033] 优选，本发明所述含药基质还包括重量份为0. 12-1. 02份的克拉替醇、0. 23-1. 45 份的海克西定和〇. 51-2. 15份的角叉菜胶。
[0034] rhGM-CSF作为大分子蛋白质，稳定性较差，在水溶液或其他制品中很容易发生物 理或化学变化，本发明通过实验得出，在含药基质中加入一定比例的克拉替醇、海克西定和 角叉菜胶能有效降低rhGM-CSF的有害变化，所述优选比例下，所述阴道膨胀栓中rhGM-CSF 的活性变化最为微小，大大提高栓剂中主要活性成分rhGM-CSF的稳定性。
[0035] 进一步优选，本发明所述rhGM-CSF阴道膨胀栓的含药基质还包括重量份为1. 5-3 份的低芥酸菜籽油和1-2份的波拉克林钾，所述低芥酸菜籽油和波拉克林钾协同作用，可 以增加主要活性成分rhGM-CSF的溶出度，且同时促进皮肤黏膜对药物的吸收，从而进一步 提高栓剂的生物利用度。
[0036] 本发明所述膨胀载体在饱和吸水后的膨胀值大于1. 5,所述膨胀值为径向的膨胀 值；所述膨胀载体包括但不限于棉条，还可包括其他能够膨胀的无菌材料，如无纺布、弹性 纤维等。
[0037] 本发明的含药基质呈半包围式涂敷在所述膨胀载体的前端1/5-4/5处，根据"人 体工程学栓剂"形状，设计成鸭嘴形、球形、卵形、子弹形、鱼雷形、圆柱形、圆锥形或棒形等 形状。
[0038] 本发明所述的rhGM-CSF阴道膨胀栓的膨胀载体的后端连有拉线，膨胀后的药栓， 通过牵拉膨胀载体后端拉线，吸附在膨胀载体上的被杀灭的病毒、毒素、脱落的死皮也一并 拉出体外，每次换药就等于给阴道做一次彻底清洁，从根本上预防炎症再次复发，该膨胀栓 即属于"治疗清洗一体化剂型"。
[0039] 为了达到本发明的rhGM-CSF阴道膨胀栓遇水可迅速膨胀的效果，所述膨胀载体 吸水后，每粒的最大吸水量不小于1.5毫升