富均匀（图2a);模型组肝细胞管排列无序，严重充血，核固缩碎裂，脂肪变性，空 泡严重（图2b);阳性组肝细胞有一定的充血，但未大面积出现脂肪空泡变性（图2c);低剂 量组肝细胞充血减轻，略见空泡变性，细胞排列略微松散（图2d);中剂量组肝细胞充血减 轻，未见脂滴空泡，排列整齐，细胞质丰富而均匀（图2e);高剂量组肝细胞充血减轻，未见 脂滴空泡，排列有序，细胞质丰富而均匀（图2f)。外观观察，空白对照组的鸡只精神状态和 食欲良好，并没有表现出任何临床症状。经14、28日龄两次灌胃四氯化碳豆油溶液，模型组 鸡只表现精神萎靡和采食量下降；饲喂复合中药微生态制剂组的鸡只精神状态均较好，食 欲也正常。因此结合数据分析，表明，该复合中药微生态制剂可减少肉鸡肝细胞坏死，降低 血清转氨酶（ALT和AST)活性，降低总胆红素水平，并对CCl 4诱导的肝损伤有保护作用。
[0112] 实施例6复合中药微生态制剂对肉鸡的应用试验
[0113] 1材料与方法
[0114] 1.1试验材料
[0115] 1日龄健康白羽肉雏鸡；
[0116] 本发明实施例1制备的复合中药微生态制剂；
[0117] 抗生素种类包括强力霉素、氟苯尼考。
[0118] 1.2试验设计
[0119] 126只1日龄健康白羽肉雏鸡，随机分成7组，I - IV组为试验组，V、VI组为阴性 组，W组为空白组，每组2个重复，每个重复9只鸡。其中I组为低剂量组（按1%。添加量饮 水使用本实施例1制备的复合中药微生态制剂），II组为中剂量组（按2%。添加量饮水使用 本实施例1制备的复合中药微生态制剂），III组为低剂量组（按1%。添加量饮水使用本实施 例1制备的复合中药微生态制剂），IV组为中剂量组（按2%。添加量饮水使用本实施例1制 备的复合中药微生态制剂）。其中I、II组，在8日龄起上午饮水给药产品，12日龄攻毒大 肠杆菌（109cfU/mL，ImL/只），13日龄起晚上饮水抗生素；VI组为I组II组的阴性对照组， 仅在12日龄攻毒大肠杆菌（10 9cfu/mL，ImL/只），13日龄起晚上饮水抗生素；III组、IV组， 在8日龄起上午饮水给药产品，9日龄起晚上饮水抗生素；V组为III组、IV组的阴性对照组， 仅在9日龄起晚上饮水抗生素；W组为空白组。
[0120] L 3饲养管理
[0121] 试验鸡各重复采用分笼饲养，自由采食和饮水。舍内光照、温度和湿度严格按照常 规饲养管理要求进行控制，按常规免疫程序对雏鸡进行新城疫及法氏囊免疫。每日换食换 水前进行食槽和饮水器具杀菌消毒。试验期间详细记录各组饲料消耗及试验鸡的健康状 况。
[0122] 1.4测定指标和方法
[0123] 1.4. 1免疫器官指数
[0124] 分别在试验肉鸡14、28和42日龄时，从各重复中随机取3只鸡，空腹称重后，颈静 脉放血处死，分离脾脏、法氏囊和肝脏，剔除脂肪后称重，计算其免疫器官指数，计算公式如 下：免疫器官指数（g/g)=(免疫器官重量/鸡活体重）X100%。
[0125] 1.4. 2血清生化指标
[0126] 在试验肉鸡14、28和42日龄时，分别从各组中选择6只鸡通过宰杀采血，然后分 离血清，21、35日龄时翅静脉采血，分离血清，由全自动生化分析仪检测血清生化指标谷丙 转氨酶、谷草转氨酶、白蛋白、总胆红素的含量，ELISA试剂盒检测血清内毒素和分泌性免疫 球蛋白水平。
[0127] 1.4. 3肠道菌群数量测定
[0128] 分别于14、28和42日龄从每个重复中随机抽取3只肉鸡称重，采用心脏注入空 气法处死鸡只，无菌操作取盲、直肠内容物，在灭菌生理盐水中摇匀，用平板培养计数法计 数肠道乳酸菌和大肠杆菌，其中乳酸菌接种于乳酸菌选择性培养基（LBS)上培养，在37°C 生化培养箱中厌氧培养48h后进行菌落计数；大肠杆菌则接种于伊红美兰琼脂培养基上培 养，在37°C生化培养箱中有氧培养24h后进行菌落计数；菌群数量以每克肠道内容物所含 细菌群落总数的对数[(IgCFUVg]表示。
[0129] 1.5数据统计与处理
[0130] 试验数据采用SPSSl 1. 5进行统计，采用one-way ANOVA进行方差分析，采用LSD 法进行组间多重比较，结果均以平均值土标准差表示。
[0131] 2 结果
[0132] 2. 1复合中药微生态制剂对肉鸡肝脏的保护作用
[0133] 2. I. 1复合中药微生态制剂对肉鸡血清中谷丙转氨酶水平的影响结果见表3。
[0134] 表3复合中药微生态制剂对肉鸡血清中谷丙转氨酶水平的影响（单位：U/L)
[0135]
[0136] 注：*表示与空白组比较差异显著（P < 0.05) 表示与空白组比较差异极显著 (P < 0. 01)；
[0137] #表示与阴性组比较差异显著（P < 0. 05) ;##表示与阴性组比较差异极显著（P < 0. 01) 〇
[0138] 谷丙转氨酶被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。由表3结果显 示，42日龄时，I、II组谷丙转氨酶水平分别低于VI组（阴性组）35. 7%、20% (P < 0.05)。 III、IV组谷丙转氨酶水平分别低于V组（阴性组）10. 6%、3. 8%，接近于空白组。结果表明， 复合中药微生态制剂在肝脏受到损害时可一定程度的降低血清中谷丙转氨酶水平。
[0139] 2. 1. 2复合中药微生态制剂对肉鸡血清中谷草转氨酶水平的影响结果见表4。
[0140] 表4复合中药微生态制剂对肉鸡血清中谷草转氨酶水平的影响（单位：U/L)
[0142] 注表示与空白组比较差异显著（P < 0.05) 表示与空白组比较差异极显著 (P < 0.01) ;#表示与阴性组比较差异显著（P < 0.05) ;##表示与阴性组比较差异极显著 (P < 0· 01) 〇
[0143] 由表4结果显示，35日龄时，I、II、III、IV组谷草转氨酶水平分别与阴性组谷草转 氨酶水平差异不显著，但均低于各自阴性组，42日龄时，I、11组谷草转氨酶水平分别低于 /1组（阴性组）37.1%、30.25%(?<0.01)，111、1￥组谷草转氨酶水平分别比￥组（阴性 组）低15. 48%、4. 05%，接近于空白组。表明，在攻毒后，肝脏受损，谷草转氨酶上升，给予 抗生素治疗的同时饲喂该复合中药微生态制剂对降低谷草转氨酶水平的效果较好。
[0144] 2. 1. 3复合中药微生态制剂对肉鸡血清中总胆红素水平的影响结果见表5。
[0145] 表5复合中药微生态制剂对肉鸡血清中总胆红素水平的影响（单位：U)
[0146]
[0147] 注：*表示与空白组比较差异显著（P < 0.05) 表示与空白组比较差异极显著 (P < 0.01) ;#表示与阴性组比较差异显著（P < 0.05) ;##表示与阴性组比较差异极显著 (P < 0· 01) 〇
[0148] 当肝细胞受损时，肝脏将间接胆红素转化为直接胆红素的能力下降，这时会引起 直接胆红素和间接胆红素同时偏高，进而引起总胆红素升高。由表5结果显示，21日龄时， I、II组总胆红素水平分别比VI组（阴性组）低31. 65%、37· 36%;35日龄时，I、II组总胆 红素水平分别比VI组（阴性组）低27%、8. 2%，接近于空白组。28日龄时，III、IV组总胆红 素水平分别比￥组（阴性组）低26.9%、49.8%;42日龄时，111、1￥组总胆红素水平分别比 V组（阴性组）低19%、28.4%。表明在用抗生素治疗攻毒发病的肉鸡和日常添加抗生素 饲喂中，该复合中药微生态制剂对肝脏损伤的保护修复具有一定作用。
[0149] 2. 1.4复合中药微生态制剂对肉鸡血清中白蛋白水平的影响结果见表6。
[0150] 表6复合中药微生态制剂对肉鸡血清中白蛋白水平的影响（单位：g/L)
[0152] 注表示与空白组比较差异显著（P < 0.05) 表示与空白组比较差异极显著 (P < 0.01) ;#表示与阴性组比较差异显著（P < 0.05) ;##表示与阴性组比较差异极显著 (P < 0· 01) 〇
[0153] 在肝脏受到损伤时，白蛋白合成会减少。由表6结果显示，21日龄时，I、II组白蛋 白水分别高于VI组（阴性组）11. 1%、14.9% (p<0.05) ;111组在28、35日龄时分别高于V 组（阴性组）28. 1 %、13. 1 % (ρ < 0. 05)，表明，该复合中药微生态制剂对受损肝脏具有一 定的修复作用，提高白蛋白的合成率。
[0154] 2. 1. 5复合中药微生态制剂对肉鸡血清中内毒素水平的影响结果见表7。
[0155] 表7复合中药微生态制剂对肉鸡血清中内毒素水平的影响（单位：(u/L)
[0157] 注：*表示与空白组比较差异显著（P < 0.05) 表示与空白组比较差异极显著 (P < 0.01) ;Λ表示与阴性组比较差异显著（P < 0.05) ;ΛΛ表示与阴性组比较差异极显 著（Ρ < 0· 01) 〇
[0158] 内毒素不仅对肝细胞有直接毒性，更为重要的是与内毒素结合蛋白结合后，促 进各种细胞因子和化学因子的转录合成和释放，进而引起肝细胞损伤。一般革兰氏阴性 菌产生内毒素。由表7结果显示，42日龄时，I、11组内毒素水平分别低于VI组（阴性 组）23. 4%、25. 99%，III、IV组内毒素水平分别低于V组（阴性组）8. 3%、8. 9 %，接近于空 白组。表明该复合中药微生态制剂可以降低血清内毒素水平。
[0159] 2. 1