3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸的新应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药领域，具体地说，涉及3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮 氨酸作为活性成分在制备用于预防和治疗炎症疾病和与炎症相关的感染疾病的药物制剂 中的新应用。
【背景技术】
[0002] 炎症是一种十分常见而又重要的基本病理过程，任何能够引起组织损伤的因素， 如感染、非感染性组织损伤（如创伤、手术等）均可导致炎症的发生，且这些炎症具有很 多相似的特征（Barton GM. A calculated response: control of inflammation by the innate immune system. J. Clin. Invest.，2008, 118:413-420)。以细菌感染导致的炎症为 例，细菌分泌的内毒素（细菌脂多糖lipopolysaccharides，简称LPS)是细菌致病的主要 因素，可引起机体的一系列炎症反应。LPS诱导的炎症信号与Toll样受体（TLRs)家族等有 关。当机体受到细菌感染时，LPS作用于细胞膜上TLRs受体，通过胞内信号传递，级联基因 表达发生变化，LPS可刺激体内多种细胞因子合成和释放炎性因子（如NO, TNF-a，IL-6， IL-Ιβ等），导致全身性炎症反应发生，引起中毒性休克、全身炎症反应综合征（SIRS)和多 器官功能障碍综合征（MODS)等炎症疾病（王晓东，内毒素中和蛋白及其在脓毒症防治中的 作用[J]，国外医学生理、病理科学与临床分册，2001，21⑵：144-146;丽颖、王兴鹏，阻断 内毒素信号传导通路治疗脓毒症或脓毒性休克的研宄进展[J]，中华急诊医学杂志，2003， 12(2) :135-137 ;王颖、郭在晨，感染性休克的治疗[J]，中华实用儿科临床杂志，2007， 22(6) :403-405 ;张雪梅、熊焕章，LPS诱导的炎症反应信号传导通路研宄进展，中国兽医杂 志，2010,46 (7) :45-47)。因此，LPS可视为细菌的主要致病因子，在细菌感染的发病机理中 起着十分重要的作用。同样，在组织损伤时，机体会分泌大量细胞因子以修复损伤，但当反 应过度时，也会引发SIRS、MODS等炎症疾病。
[0003] 乌苯美司（Ubenimex，又名Bestatin)是常见的抗肿瘤辅助药物，可增强免 疫功能，用于抗癌化疗、放疗的辅助治疗等（Umezawa, H.，Aoyagi, T.，Suda, H.，Hamada ,M. &Takeuchi,T. (1976). Bestatin,an inhibitor of aminopeptidase B,produced by actinomycetes, (29). Pp. 97-99 ；Muskardin, D. T. , Voelkel. N. F. &Fitzpatrick, F. A. (1994). Modulation of pulmonary leukotriene formation and perfusion pressure by bestatin,an inhibitor of leukotriene A4hydrolase. (48). pp. 131-137 ； Hirayama, Y ；Sakamaki, S ；Takayanagi, N ；Tsuji, Y ；Sagawa, T ；Chiba, H ；Matsunaga, T ； Niitsu, Y. (2003). "Chemotherapy with ubenimex corresponding to patient age and organ disorder for 18cases of acute myelogeneous leukemia in elderly patients-effects, complications and long-term survival"· Gan to kagakuryoho. Cancer&chemotherapy 30(8) :1113-8)。乌苯美司的化学结构式为：
[0004]
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[0005] 3-氨基-2-羟基-4-苯基-缴氨酰-异壳氨酸是与乌苯美司（Bestatin)结构相 似的新型衍生物，本发明的申请人在申请号为201110076554. 6的中国发明专利中首次公 开该化合物3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸，其化学结构式为：
[0007] 在申请号为201110076555. 0的中国发明专利中进一步公开了化合物3-氨 基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸作为氨肽酶抑制剂的应用，其活性优于乌苯美司 (Bestatin)，可用作肿瘤治疗或辅助治疗药物，具有更好的体内免疫增强作用，如能增强T 细胞和杀伤性NK细胞活性和功能等，但对在如细菌引起的急性炎症中的作用尚未见报道。
【发明内容】
[0008] 本发明的发明人在对化合物3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸的功 能做进一步研宄中发现，该化合物对于LPS引起的急性炎症具有明显的抑制作用。因此，本 发明的目的在于提供一种3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸作为活性成分在 制备炎症抑制剂或制备用于预防和治疗炎症疾病的药物制剂中的新应用。
[0009] 为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
[0010] 本发明的第一个方面是提供3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸作为 活性成分在制备用于预防和治疗炎症疾病和与炎症相关的感染疾病的药物制剂中的应用， 所述3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸的化学结构式为：
[0012] 其中，所述炎症疾病和与炎症相关的感染疾病包括细菌感染、无并发症的膀胱炎、 支气管炎、外伤、术后炎症反应、意外伤害、心肌梗塞、结核病或肉状瘤病、脓毒症、转移性肿 瘤、活动期类风湿性关节炎、血清阴性的脊椎关节炎、免疫性血管炎、风湿性多肌病、局限性 回肠炎、深部静脉血栓形成的炎症等。
[0013] 发明人通过构建细菌内毒素 LPS诱导的小鼠急性肺损伤模型，腹腔给予3-氨 基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸药物，检测药物对LPS引起的急性肺损伤的作用， 并检验3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸对细胞因子、炎症分子等表达的影响。 同时，还评价了 3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸的抗炎效果，发明人选择小 鼠单核-巨噬细胞系Raw264. 7进行测试，检测LPS诱导的炎性因子NO表达和释放，检测后 发现，LPS诱导的炎性因子NO的释放量大幅减少。
[0014] 还通过髓过氧化物酶（Myeloperoxidase，MP0)活性检测、肺篮洗液中总蛋白含量 检测和HE染色组织切片，观测并检验嗜中性粒细胞的浸润情况，以评价LPS诱导的急性肺 损伤严重程度。检测结果表明，3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸对LPS诱导 的小鼠肺部嗜中性粒细胞浸润有抑制作用。
[0015] 本发明的第二个方面是提供一种用于预防和治疗炎症疾病和与炎症相关的感染 疾病的药物制剂，含有治疗有效量的活性成分和药学上可接受的载体或赋形剂，所述活性 成分为3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸、其旋光异构体或其药物学上可接受 的盐。
[0016] 优选地，所述药物制剂的剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂或注射剂（如冻 干粉针剂）。
[0017] 药物学上可接受的盐可以是药理学上和其药物学上都接受的。药理学上和其药物 学上可接受的盐可以是碱金属盐或碱土金属盐，优选钠盐、钾盐、镁盐或钙盐。
[0018] 所述药物制剂涉及经肠的（例如口服、舌下含服或直肠给药）、胃肠外的或局部的 (如透皮药物制剂）剂型。不与活性成分反应的有机或无机物可以作为载体，如水、油、苯甲 醇、聚乙二醇、甘油三乙酸酯或其它脂肪酸甘油酯、明胶、卵磷脂、环糊精、乳二糖或淀粉等 糖类、硬脂酸镁、滑石或纤维素。口服用药优选片剂、糖衣丸剂、胶囊、粉、糖浆、浓缩剂或滴 剂，直肠给药优选栓剂，胃肠外给药优选水溶液或油溶液，或冻干剂。也可以使用混悬剂、乳 剂或植入剂，局部用药可以用贴剂或乳膏剂。胃肠外使用的药物制剂包括活性化合物的无 菌含水或无水注射液，在此优选与受体血液等渗的溶液。
[0019] 这些药物制剂可以含有稳定剂、控制药学活性化合物释放的添加剂、抗氧剂、缓冲 剂、抑菌剂和用于制备等渗溶液的佐剂。含水和无水的无菌混悬剂可以含有混悬添加剂和 增稠剂。药物制剂可以分装在单剂量或多剂量容器如密封剂瓶中，也可以作为经冻干的制 品保存，如需要，使用时可用无菌液体如水或盐溶液配制。还可以以同样的方式使用无菌粉 剂、颗粒剂或片剂。
[0020] 所述药物制剂可用于人和动物中预防和治疗炎症和炎症相关疾病。
【附图说明】
[0021] 图1为构建的LPS诱导的小鼠急性肺损伤模型中，髓过氧化物酶（MPO)活性检测 结果图表；
[0022] 图2A和图2B为构建的LPS诱导的小鼠急性肺损伤模型中，肺盥洗液中总蛋白含 量检测结果图表；其中，图2A为LPS给药4小时后肺盥洗液的总蛋白浓度测定，图2B为LPS 给药12小时后肺盥洗液的总蛋白浓度测定；
[0023] 图3为LPS诱导4小时后，在有无3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸 (LYRM03)的情况下，小鼠肺组织中细胞因子和炎症因子的表达水平图表；
[0024] 图4为3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸（LYRM03)对LPS诱导的肺 组织中iNOS和COX-2蛋白表达的免疫印迹结果图表；
[0025] 图5A为LPS诱导的Raw264. 7细胞中，iNOS蛋白表达的两次免疫印迹结果图表；
[0026] 图5B为LPS诱导的Raw264. 7细胞中，iNOS蛋白表达的量化分析图表；
[0027] 图6为Griess法检测培养上清中NO释放量的检测结果图表。
【具体实施方式】
[0028] 下面通过具体实施例对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发明， 但是下述实施例并不限制本发明范围。
[0029] 本发明提供了 3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸作为活性成分在制备 用于预防和治疗炎症疾病和与炎症相关的感染疾病的药物制剂中的应用。在本实施例中， 发明人将3-氨基-2-羟基-4-苯基-缬氨酰-异亮氨酸编号为LYRM03。
[0030] 以下实施例中所使用的检测方法的具体操作如下：
[0031] 1、构建LPS诱导的急性炎症模型：
[0032] 将C57/BL小鼠分组，每组至少5只，称重，分别用生理盐水