生物膜、具有生物膜性的闭合结构或细胞区室作为化妆品或化妆品载体的应用_2

文档序号:9280287阅读:来源:国知局
要从表皮角质层中去除脂质,就能使皮肤屏障功能丧失,皮肤 中水分含量显著降低,皮肤发生干燥;停止除去皮肤中的脂质,则角质层中水分含量随之恢 复,皮肤干燥得到改善。由此说明,脂质存在于皮肤角质细胞之间,填充了细胞间隙,起着粘 合剂作用,阻挡皮肤内水分向外扩散,保持水分、柔软皮肤,同时将异物隔绝于皮肤之外, 具有屏障和保湿功能。
[0028] 生物膜具有脂质双分子层结构,使其在化妆品领域应用时具有以下功能: 一、保湿作用:生物膜中的胆固醇、神经酰胺和棕榈酸等脂质成分,可以修复皮肤的脂 质屏障,同时还可明显增高皮肤电导率,使其具有很强缔合水分子的能力,在角质层中形成 网状结构,以维持皮肤水分,改善皮肤弹性。
[0029] 二、美白作用:生物膜中的神经酰胺等脂质成分往往作为信号分子,能够调节细胞 内的过氧化物和增强脂质的过氧化反应,具有增白作用;另一方面,生物膜中含有大量不饱 和脂肪酸,可以减少黑色素在皮肤上的沉积,使皮肤变白。
[0030] 三、抗衰老作用:生物膜中的磷脂可进入皮肤深层,并与皮肤深层细胞膜的磷脂起 源物结合,而使细胞膜流态化,如含亚油酸和α -亚麻酸的不饱和磷脂能增加膜的流动性 和渗透性,从而增强细胞的代谢功能,起到活化细胞的作用。当遇到细胞组织受损,疾病或 衰老时,能促进表皮生长因子的修复和生长作用,从而达到延缓细胞衰老。
[0031] 以上是生物膜作为化妆品的功效成分添加,发挥其独特的作用;同时生物膜还可 以作为功能性成分的载体,达到提高功能性成分的以下几个效果: 一、提高稳定性:由于生物膜脂质双分子层膜内和膜间的包封作用,可以使功能性成分 与外界不稳定因素接触机会减少,稳定性提高。例如维生素 A醇结构中含有较多的不饱和 双键,对光与热稳定性较差,接触空气后很容易被氧化,用生物膜包封后,其稳定性大大增 强。
[0032] 二、提高溶解性:美容功效成份很大多数为难溶性物质,使用时难以透过皮肤屏障 发挥其功效作用,由于脂质双分子层的双亲性,生物膜作为载体可以将包封的难溶功效能 分渗入到水溶性物质和脂溶性物质当中。
[0033] 三、长效性:生物膜作为载体还具有缓释作用。实验证明,生物膜及包封药物在血 循环中的保留时间,多数要比游离药物的保留时间要长的多。
[0034] 四、促进吸收:化妆品中的功能性成分必须透过角质层达到相应的作用部位,才能 起到营养、改善皮肤状况的作用。而人的皮肤的角质层具有极强的屏障作用,大分子的功能 性成分难以通透。用生物膜包封功能性成分,由于生物膜与角质层结构相似,具有很好的亲 和性,功能性成分在生物膜的携带下经皮透过量增加。
【附图说明】
[0035] 图1为乙型肝炎表面抗原含量。
[0036] 图2为苯乙基间苯二酚一生物膜使用效果图。
[0037] 图3为不同时间下透皮吸收浓度。
[0038] 图4黑色素合成抑制率。
【具体实施方式】
[0039] 下面结合具体实施例及附图,进一步阐述本发明。应当理解,这些实施例仅用于说 明本发明而不能用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常 按照常规条件,或按照制造厂商所建议的条件。
[0040] 实施例1生物膜的提取、纯化 采用密度梯度离心法提取、纯化得到所需的生物膜。具体过程如下: (1) 将断食18-24h的新西兰大白兔处死取肝脏,去掉大的血管后,将肝脏剪成2mm3左 右的小块,并用生理盐水冲洗至组织块变白; (2) 制备匀浆液:lmmol/L CaCl2,50mmol/L HEPES(pH 7.4),lmmol/L PMSF,2yg/mL 抑 肽酶,2 μ g/mL Antipain ; (3) 将肝脏组织和匀浆液按质量:体积的比例加入8倍体积的匀浆液,并在冰浴环境中 用电动匀浆机15, OOOrpm匀浆至组织液化; (4) 将匀浆液经四层纱布过滤,滤液在1,000Xg,10min,4°C条件下离心,收集沉淀; (5) 沉淀用鹿糖溶液A (0. 3mol/L鹿糖,50mmol/L Tris,3mmol/L MgCl2)充分悬浮沉 淀,加入9倍体积的鹿糖溶液B (2mol/L鹿糖,50mmol/L Tris,3mmol/L MgCl2),上层用鹿 糖溶液 C (0· 25mol/L 鹿糖,10mmol/L HEPES, lmmol/L EDTA)填满离心管,在 90, 000X g, 150min,4°C条件下离心,收集上层膜层; (6) 该膜层用洗液(50mmol/L HEPES,lmmol/L PMSF,2 μ g/mL 抑肽酶,2 μ g/mL Antipain)洗涤,在90, OOOX g,60min,4°C条件下离心,收集沉淀,即为所需的生物膜。
[0041] 实施例2生物膜的提取、纯化 采用两相分配法提取、纯化得到所需的生物膜。具体过程如下: (1) 筛选饱满一致的正常玉米种子,经l%NaC10浸泡消毒lOmin,冲洗干净,在25°C恒温 黑暗条件下催芽72h ; (2) 取玉米上胚轴,以质量:体积的比例加入2倍体积的提取缓冲液(5mmol/L EDTA, 25mmol/L Tris,0.25mmol/L 蔗糖,lmmol/L MgSO4,0.2% (W/V)BSA,0.5% (W/V)PVP-10,10% (W/V)甘油,15mmol/L β -疏基乙醇,lmmol/L PMSF,lmmol/L DTT),冰浴研磨至液化; (3) 将研磨液经四层纱布过滤,滤液在12, 000Xg,15min,4°C条件下离心,取上清液; (4) 上清液在80, 000乂8,301^11,4°(:条件下离心,收集沉淀; (5) 沉淀用悬浮液(25mmol/L Tris,0.25mmol/L 蔗糖,0.2% (W/V)BSA,10% (W/V)甘 露醇,lmmol/L DTT)充分悬浮沉淀; (6) 将悬浮液加入两相系统(每IOg两相系统中含:1.7g蔗糖,0. 003g DTT,2. 25mL 水,50mmol/L KCl 0.5mL,1.63 PEG,3.25g Dextran T_500,200mmol/L PBS 0.5mL),上下 摇匀50次,在4, 000 X g,5min,4°C条件下离心,取上相和下相继续进入两相系统,分离三次 后合并上相,稀释5倍后,在80, 000X g,60min,4°C条件下离心,收集沉淀,即为所需的生物 膜。
[0042] 实施例3生物膜的提取、纯化 采用差速离心法提取、纯化得到所需的生物膜。具体过程如下: (1) 南极冰藻(ia)是从南极海冰中分离纯化而来; (2) 将南极冰藻按1:100的比例接种到培养基中(每IOL培养基中含21. 2g NaCl,3. 6g NaSO4,0.6g KC1,0. 3g NaHCO3,0.1 g KBr,0.1 g H3BO3, 0.1 g NaF, 9. 6g MgCl2 · 6H20,1. Og CaCl2,0.1 g SrCl2 · 6H20),置于可控光照培养箱中培养。在-4°C,光强为1300~19001x,光 照周期12明/12暗,每天摇动4~5次条件下培养14天; (3) 将冰藻培养液在4, OOOrpm,20min,4°C条件下离心,收集冰藻沉淀,并用预冷的蒸馏 水迅速冲洗2次,以除去细胞外黏稠物、表面盐分及培养液中的杂质; (4) 将上述收集到的冰藻沉淀按质量:体积的比例加入4倍体积的匀浆缓冲液 (0.5mol/L K0H,0.5mol/L 蔗糖,3mmol/L EDTA,0.6% PVP,lmmol/L PMSF,lmmol/L DTT, 5mmol/L抗坏血酸,0.6% BSA),用挤压式细胞破碎仪破碎细胞; (5) 将得到的细胞匀浆液在8, OOOrpm,20min,4°C条件下离心,收集上清液; (6) 上清液在145,000\8,60!^11,4°(:条件下离心,收集沉淀,即为所需的生物膜。
[0043] 实施例4细胞区室的分离、纯化 采用双相萃取法分离、纯化得到所需的细胞区室。具体过程如下: (1) 水双相系统的制备:将混合物(每300g中含90g 20%(W/W)Dextran T-500,45g 40% (W/W)PEG 3350,33.9g 蔗糖,7.5g (X2mmol/L PBS,0.45g 2mmol/L KC1)在离心管中混合 均匀,制成等浓度葡聚糖/聚乙二醇(Dextran T-500 / PEG 3350)的水双相混合物,于分 液漏斗中混合均匀,4°C静置过夜分层,小心分离上下层,制成新鲜的上相和下相,于4°C分 别保存,用于后续纯化步骤; (2) 将实施例3中获得的生物膜沉淀用重悬浮缓冲液(5mmol/L PBS,0. 33mol/L蔗糖, 3mmol/L KCl,lmmol/L DTT,lmmol/L PMSF,0. lmmol/L EDTA)重悬浮; (3) 将上述重悬浮液以质量比1:3的比例加到步骤(I)中制备的Dextran T-500 / PEG 3350水双相混合物中,上下轻轻颠倒30~40次混合均匀; (4) 混合液在1,500rpm,10min,4°C条件下离心,取上相液和下相液继续进入两相系统, 分离三次后合并上相分离液,稀释5倍后,在100,000Xg,60min,4°C条件下离心,收集沉 淀,即为所需的细胞区室,且富含类囊体。
[0044] 实施例5细胞区室的分离、纯化 采用密度梯度离心法分离、纯化得到所需的细胞区室。具体过程如下: (1) 选取IOg生长健壮,最好是连续几个晴天下生长的菠菜叶片,洗净后去除中脉,按 质量:体积的比例加入6倍体积的提取缓冲液(50mmol/L磷酸钾缓冲液,0. 3mmol/L山梨 醇,2mmol/L EDTA, lmmol/L MgCl2, lmmol/L MnCl2,1% BSA, lmmol/L DTT),冰浴研磨; (2) 配置 Percoll 分层液(50mmol/L HEPES-K0H,0.3mmol/L 山梨醇,2mmol/L EDTA, lmmol/L M
当前第2页1 2 3 4 5 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1