石胆酸作为活性成分在制备治疗细粒棘球蚴病药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及石胆酸的药学应用，属于药物化学领域。
【背景技术】
[0002]细粒棘球蝴病(echinococcosis)又称囊性包虫病(cysticechinococcosis,CE)，是由细粒棘球蝴绦虫(Echinococcus granulosus，Eg)的中绦期幼虫所致的一种严重危害人民健康和畜牧业发展的人兽共患寄生虫病。该病呈全球性分布，在我国主要流行于新疆、青海、内蒙古、西藏等畜牧业发达的省区。囊性包虫病主要影响肝脏，也可以在肺中发展。目前，针对于该病的治疗主要是外科手术的方法，即肝包虫外膜内外囊完整切除术。近年来所采用的肝包虫外膜内外囊完整摘除术尽管能大大降低包虫病的复发率，最大程度地减少手术对肝实质的损伤，但当包虫囊肿体积较大或贴近重要脏器或管道(肝门或胆管)时，则需要选择开放式外膜内外囊完整摘除术。此种术式可能会有头节的外漏和残留，术中和术后需要药物辅助治疗预防包虫复发。因此总体来看，术中头节外溢及头节的处理不当是手术治疗囊性包虫病存在的难以克服的缺陷。
[0003]针对上述问题，本领域尝试在体外采用高浓度酸性(HCl)和碱性溶液(KOH)，临床常用的局部化疗药物有20%高渗盐水，但对周围正常肝组织有一定的破坏作用；本领域也曾有研究发现胆汁可以抑制包虫囊肿的发育，但是胆汁成分复杂，作用目标多，药学效果多变，例如胆汁、胆汁酸在肝脏和血液中滞留会产生多种毒性作用，包括细胞毒作用及急、慢性毒性作用，造成肝损伤及全身多系统、多器官损害，最终导致肝硬化、肝功能衰竭和死亡；也曾有研究发现胆汁酸对胰腺腺泡细胞形成损伤等。
[0004]因此，获得一种作用确切、疗效明确、能有效防治细粒棘球蝴病的药物依旧是本领域亟待解决的课题。
【发明内容】
[0005]申请人在长期研究过程中发现石胆酸(LCA)可以有效抑制和杀灭原头节的生长，从而可用于细粒棘球蝴病的临床治疗。
[0006]在本发明中，石胆酸(LCA)，其化学名称为3a_羟基-5 β -胆烷酸，是由鹅脱氧胆酸在肠内通过细菌代谢产生的物质。
[0007]首先，本发明公开了石胆酸作为活性成分在制备治疗细粒棘球蝴病药物中的应用。
[0008]上述的药物，既可以是单纯的活性成分原料，还可以是将石胆酸作为活性成分与其他辅料做成的各种制剂，例如常见的片剂、胶囊、滴丸、输液、冻干粉针等，对于药物剂型及其相应辅料的选择，本领域技术人员可根据需要进行调整。
[0009]上述的细粒棘球蝴病，既可以是动物体上的，也可以是人体上的，根据该症的临床发病部位，通常指的是囊性肝包虫病。
[0010]因此，本发明还公开了石胆酸作为活性成分在制备治疗囊性肝包虫病药物中的应用。
[0011]根据需要，可使用不同浓度的石胆酸，一般来说，为了有效的杀灭病原，石胆酸的浓度不低于500 μ mol/L。
[0012]针对常见的原头节生长密度，优选的，石胆酸的浓度为2000-3000 μ mol/L。
[0013]优选的，连续用药时间不低于2天。
[0014]在上述浓度下，对细粒棘球蝴原头节具有比较理想的抑制和杀灭效果。
[0015]在此基础上，本发明还公开了石胆酸作为细粒棘球蝴原头节抑制剂的应用。
[0016]本领域技术人员可以理解，在多种实验环境下，尤其是动物离体实验情况下，为了防止由于动物体内的细粒棘球蝴原头节在体外的生长和头节外溢，需要加入必要的抑制剂，例如20%高渗盐水等。
[0017]与上述类似，石胆酸的浓度不低于500 ymol/L，优选的，石胆酸的浓度为2000-3000 μmol/L。
【附图说明】
[0018]图1石胆酸对细粒棘球蝴原头节形态的影响，其中，A:对照组原头节；B:500 μ mol/L LCA 作用 3d 的原头节；C:1000 μ mol/L LCA 作用 3d 的原头节;D:2000 μ mol/LLCA作用3d的原头节；E:3000 μ mol/L LCA作用3d的原头节。
[0019]图2为不同浓度的石胆酸对细粒棘球蝴原头节活力的影响。
[0020]图3为石胆酸对细粒棘球蝴原头节表面超微结构的影响，其中，A:对照组原头节；B、C:2000 μ mol/L石胆酸作用Id原头节。
[0021 ] 图4为石胆酸对细粒棘球蝴原头节内部超微结构的影响，其中，A:对照组原头节；B、C:2000 μ mol/L石胆酸作用Id原头节。
【具体实施方式】
[0022]为了说明石胆酸(LCA)的应用效果，申请人进行了体外实验说明石胆酸对细粒棘球蝴原头节的杀灭效果。
[0023]实验1:LCA体外作用于细粒棘球蝴原头节的效果
[0024]取新鲜的自然感染细粒棘球蝴的绵羊肝脏，清洁羊肝表面，用75%酒精消毒表面，无菌条件下抽取含原头节的囊液，移入无菌瓶中。用PBS (PH = 7.2)清洗原头节3次至澄清，用0.1%伊红染液做染色排斥实验，98%以上拒染。肉眼观察原头节呈细白沙样均匀颗粒，活性好的原头节沉降速率快，活性不好的或者死亡的原头节沉降速率相对比较慢。
[0025]倒置显微镜下观察原头节虫体呈内陷型，散在密布，虫体结构饱满，呈椭圆形，结构清晰完整，钙颗粒清亮而明显。然后将原头节分装至含10%小牛血清的RPMI1640培养基中(青霉素100U/mL，链霉素100U/mL)，置37°C、5% C02培养箱内培养。
[0026]实验分组:DMS0对照组、500 μ mol/L LCA 组、1000 ymol/L LCA 组、2000 ymol/LLCA组、3000 μ mol/L LCA。取六孔板，每孔设5mL体系，按以上分组，配好相应的培养液。
[0027]将在体外培养5天后的细粒棘球蝴原头节用PBS (pH = 7.2)清洗3遍，每组培养液中加入约2000个原头节，置37°C，5% C0J?育箱内培养，在倒置显微镜下观察LCA对细粒棘球蝴原头节形态和活力的影响