吉西他滨-磷脂复合物的制备方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种医学的配制品，尤其是涉及一种吉西他滨-磷脂复合物的制备方 法及其应用。
【背景技术】
[0002] 吉西他滨（Gemcitabine，国产商品名为泽菲），化学名称为（+)_2' -脱 氧-2'，2' -二氟胞嘧啶，是一种新的胞嘧啶核苷衍生物，和阿糖胞苷一样，需要进入体内后 由脱氧胞嘧啶激酶活化才能起作用，形成吉西他滨磷酸盐、吉西他滨二磷酸盐和吉西他滨 三磷酸盐，其中吉西他滨二磷酸盐和吉西他滨三磷酸盐为活性物质可以抑制DNA的合成， 所以吉西他滨为细胞周期特异性抗代谢类药物，主要作用于DNA合成期的肿瘤细胞，即S期 细胞，在一定条件下，可以阻止G1期向S期的进展，从而发挥细胞毒作用。吉西他滨可以增 加铂类化疗药物与DNA嵌合的稳定性，抑制DNA损伤后的修复，故与铂类联合可以起到 协同和增效作用，吉西他滨与铂类联合是当今治疗非小细胞肺癌（NSCLC)的一线标准方案。 在美国更有80%的胰腺癌患者接受吉西他滨治疗，而成为胰腺癌治疗的"金标准"。吉西他 滨在欧洲已被批准用于进展期乳腺癌的二线治疗。此外，吉西他滨还被试用于膀胱癌、卵巢 癌、淋巴瘤及消化道癌等。
[0003] 吉西他滨为水溶性抗肿瘤药物，在体内很容易失活，其体内半衰期短（仅有32-94 分钟），并且水溶性的吉西他滨由于核苷转运蛋白缺失而产生耐药性。因此，寻找新型高效， 低毒副作用，对肿瘤组织或细胞有高渗透性的吉西他滨复合物成为提高其治疗指数的有效 措施。专利（CN 103130854 A)公开了一种维生素E琥珀酸酯化吉西他滨前药，维生素E琥 珀酸酯与吉西他滨的N4位氨基通过酰胺键相连，可以提高吉西他滨药物稳定性和降低毒 副作用。专利（CN 102617679 A)用共辄亚油酸修饰吉西他滨的氨基，可以改善吉西他滨因 核苷转运蛋白缺失而引起的耐药性。专利（CN 103221067 A)公开了一种磷脂药物修饰方 法。因此对吉西他滨进行磷脂化改造后可以提高药物分子在体内的半衰期，改善其药效动 力学性质，而且磷脂是细胞膜的重要组成部分，使其具有更好的膜渗透能力。此外，肿瘤生 长需要大量的磷脂作为能量来源及细胞膜组成部分，这就使得磷脂化后的药物能在肿瘤组 织中选择性聚集，从而产生更好地治疗效果，并降低对正常组织的毒副作用。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是针对现有技术不足之处而提供一种吉西他滨-磷脂复合物的制 备方法及其应用。本发明的吉西他滨-磷脂复合物通过其磷脂的高渗透性能将药物转运至 肿瘤细胞内，增加药物半衰期和药效活性，本复合物能用作制备治疗胰腺癌、乳腺癌、非小 细胞肺癌、膀胱癌、卵巢癌、淋巴瘤及消化道癌症等恶性肿瘤的药物。
[0005] 本发明的目的是通过以下措施来实现：一种吉西他滨-磷脂复合物的制备方法， 其特征在于，包括以下具体步骤：在氮气保护下，将吉西他滨、磷脂、钙盐、缓冲液和表面活 性剂配制成水溶液反应体系；反应温度为30-50摄氏度，加入磷脂酶D后持续机械搅拌，搅 拌时间3-10小时；反应结束后加入有机溶液萃取2次，将有机相合并、并加入无水硫酸钠干 燥，旋转蒸发去除溶剂，真空干燥，得到吉西他滨-磷脂复合物，其结构式为
式中Rl、R2均为C6-C30烷基。
[0006] 所述吉西他滨的添加量是20-40 g/L，L为配制成的水溶液反应体系体积，磷脂与 吉西他滨的投料摩尔比为1:2-5。
[0007] 所述磷脂来源于大豆、葵花籽、蛋黄、鱼肝油、磷虾油等一种或者几种混合物，一种 或者几种混合物中的磷脂酰胆碱在总磷脂中的含量为20-95%之间。
[0008] 所述钙盐包括氯化钙，碳酸钙，醋酸钙，硫酸钙，磷酸钙等一种或者几种以不同比 例混合而成的混合物，钙盐的添加量是吉西他滨重量的1-5%。
[0009] 所述缓冲液为乙酸-乙酸钠缓冲液，浓度为0? 1mol/L，缓冲液pH值在4. 0-6.0 内，乙酸钠的添加量是1. 5-8. 1 g/L，乙酸的添加量是0. 9-5 g/L，各式中，L为配制成的水 溶液反应体系体积。
[0010] 所述表面活性剂包括单月桂基磷酸酯（MAP)、1，4-二（2-乙基己基）丁二酸酯磺 酸钠盐（A0T)或者Tween 80 (R)中的一种或者以任何比例混合得到的混合表面活性剂体 系，添加量为吉西他滨重量的5-10%。
[0011] 所述磷脂酶D的来源包括植物来源的或酵母菌、或链霉菌、或大肠杆菌的基因工 程菌发酵得到的磷脂酶D，添加量为吉西他滨重量的1-5%。
[0012] 所述有机溶液为C5-C8烷烃与短链烃醇按1:0. 1-0. 3的比例混合而成，最终形成 的吉西他滨-磷脂复合物溶液的浓度为0. 05-0. 2 g/mL ; 所述C5-C8烷烃有机溶剂为从下列物品中任选：戊烷、己烷、环己烷、庚烷、辛烷、壬 烷、癸烷或它们的同分异构体中的任何一种溶剂或这些溶剂以任何比例混合形成的混合溶 剂； 所述短链烃醇为从下列物品中任选：乙醇、丙醇、丁醇、戊醇、异丙醇、异丁醇、异戊醇它 们的同分异构体中的任何一种溶剂或这些溶剂以任何比例混合形成的混合溶剂。
[0013] 所述吉西他滨-磷脂复合物在癌症治疗上的应用，将所述吉西他滨-磷脂复合物 制备成注射用针剂，步骤如下：取吉西他滨-磷脂复合物40g，氢化磷脂酰胆碱HSPC 120g， 胆固醇40g，聚氧乙烯化磷脂酰乙醇胺MPEG2000-DSPE 40g，抗氧剂a -生育酚1. 2g，加注射 水800mL，加入葡萄糖432克作为赋形剂，加入磷酸氢二钠5. 7g，磷酸二氢钠11. 0g，调节药 液pH值至7. 0,常温以60rpm搅拌30min，然后将物料高压均质，均质压力为23-25MPa，透射 电镜图显示得到比较完整的球形，粒径在120 ± 60 nm，再加活性炭粗滤后用0.2um滤膜进 行过滤，分装制成1000瓶针剂备用。
[0014] 与现有技术相比，采用了本发明提出的吉西他滨-磷脂复合物的制备方法及其应 用方法，具有如下优点：采用磷脂对吉西他滨进行修饰，将磷脂和吉西他滨在磷脂酶D的作 用下，生成吉西他滨-磷脂复合物，磷脂相对于其它修饰方法具有许多优点：1、磷脂本身无 毒和免疫原性，适合于生物体内降解。2、磷脂是细胞膜的主要成分，也是一种表面活性剂， 与细胞的亲和力强，能增加被修饰药物透过细胞的能力，易于被组织吸收，提高了药物的吸 收利用率，降低耐药性的产生。3、磷脂可形成双分子层，将所修饰的吉西他滨包裹在磷脂 中，可以降低其对机体特定部位的毒性，被包裹的吉西他滨也可以避免被人体内酶分解，改 善了吉西他滨在体内半衰期，从而减少药物用量，使药物具有缓释和控释作用。4、肿瘤生长 需要大量的磷脂作为能量来源及细胞膜组成部分，这就使得磷脂化后的药物能在肿瘤组织 中选择性聚集，从而产生更好地治疗效果。
【具体实施方式】
[0015] 下面对【具体实施方式】作详细说明： 一种吉西他滨-磷脂复合物的制备方法，包括以下具体步骤：在氮气保护下，将吉西他 滨、磷脂、钙盐、缓冲液和表面活性剂配制成水溶液反应体系；反应温度为30-50摄氏度，加 入磷脂酶D后持续机械搅拌，搅拌时间3-10小时；反应结束后加入有机溶液萃取2次，将有 机相合并、并加入无水硫酸钠干燥，旋转蒸发去除溶剂，真空干燥，得到吉西他滨-磷脂复 合物。
[0016] 所述吉西他滨的结构式为
所述磷脂酰胆碱PC的结构式为
在磷脂酶D、钙盐的作用下发生反应得到吉西他滨-磷脂复合物，吉西他滨-磷脂复合 物的结构式为
式中Rl、R2均为C6-C30烷基。
[0017] 所述吉西他滨-磷脂复合物在癌症治疗上的应用，将所述吉西他滨-磷脂复合物 制备成注射用针剂，步骤如下：取吉西他滨-磷脂复合物40g，氢化磷脂酰胆碱HSPC120g， 胆固醇40g，聚氧乙烯化磷脂酰乙醇胺MPEG2000-DSPE40g，抗氧剂a-生育酚1. 2g，加注射 水800mL，加入葡萄糖432克作为赋形剂，加入磷酸氢二