一种用于治疗血瘀疾病的植物提取物及药物制剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药提取物领域，具体涉及一种延胡索提取物及含有该提取物的药物 制剂，该提取物可以应用于制备治疗血瘀疾病的药物。
【背景技术】
[0002] 延胡索为罂粟科植物延胡索CorydalisyanhusuoW.T.Wang的干燥块莖，是一味 古老的止痛良药，又称玄胡、元胡，为著名的浙八味之一，主产浙江省东阳、磐安一带。延胡 索具有显著的镇痛、镇静和催眠作用，对冠心病、心律失常、胃溃疡等多种疾病有较好的临 床效果。正因为延胡索效果显著，临床应用广泛，在《中国药典》2010年版中，接近30%的 复方制剂中使用了延胡索。
[0003] 延胡索主要成分为生物碱，主要为叔胺、季胺类生物碱。叔胺类生物碱在原药材 中的量约为0.65%，季铵类生物碱（如延胡索甲素、乙素）约为0.3%。到目前为止，从 延胡索中分离得到的生物碱类成分约有30种。从延胡索的块茎中共提出生物碱10余种， 其中经鉴定的有紫堇碱（Corydaline)、dl-四氢掌叶防己碱（dl-Tetrahydropalmatine)、 原阿片碱（Protopine)、L-四氢黄连碱、dl-四氢黄连碱、L-四氢非洲防己碱、紫堇鳞茎碱 (Corybulbine)、(6-高白屈菜碱（0-Homoche-lidonine)、黄连碱（Coptisine)、去氢紫堇 碱（De-hydrocorydaline)，还有紫堇达明碱（Corydalmine即紫堇鳞莖碱）、去氢紫堇达明 碱等。除生物碱外，延胡索中尚含有大量淀粉，少量黏液质、树脂、挥发油，另含无机微量元 素。还含有多糖、羟链霉素（reticulin)、豆留醇、谷留醇、油酸、亚油酸、亚麻酸、延胡索酸、 10-二十九碳醇等。
[0004] 延胡索中的生物碱具有很强的镇痛、镇静、降压和抗心律失常作用。目前，很多新 的研究表明，延胡索还具有其他广泛的生理活性，如抗心肌缺血、抗实验性胃溃疡、抗肿瘤、 抗氧化、保肝等。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种含有延胡索用于治疗血瘀疾病的植物提取物，其制备 方法和液相分析方法，含有该提取物的药物制剂及利用该提取物制备治疗血瘀疾病的药物 的用途。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] -种用于治疗血瘀疾病的植物提取物，该提取物由以下方法制备：(a)以重量计， 每100份药材包含干燥的延胡索块茎80~90份和干燥的大黄10~20份，混合粉碎，用 乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；(b)将步骤（a)所 得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩， 分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用水溶解，过 滤，用大孔树脂富集活性成分，先用5~15%乙醇冲洗7~9个柱体积除去大极性成分，再 用65~75%乙醇洗脱11~13个柱体积，收集65~75%洗脱液，减压浓缩即得。
[0008] 进一步地，步骤（a)所述用乙醇溶液热回流提取中乙醇溶液浓度为55~65%。
[0009] 进一步地，步骤（a)所述用乙醇溶液热回流提取中乙醇溶液浓度为60%。
[0010] 进一步地，步骤（c)中所述大孔树脂为AB-8型大孔树脂。
[0011] 进一步地，步骤（c)为：正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用AB-8型大孔树脂富集活 性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积除去大极性成分，再用70 %乙醇洗脱12个柱体积， 收集70%洗脱液，减压浓缩即得。
[0012] 为了能够通过建立HPLC指纹图谱的方法控制不同批次制备的提取物的批间差 异，所述提取物的液相分析方法为：
[0013]色谱柱：AgilentZorbaxExtent_C18 柱（4. 6mmX250mm，5ym);
[0014] 流动相：A为乙腈，B为0. 5%磷酸溶液；
[0015] 梯度洗脱程序：0? 01 ~5min，A10% - 15% ;5 ~lOmin，A15% - 48% ; 10 ~ 25min，A48%- 78% ;25 ~30min，A78%- 10% ;
[0016] 流动相流速：1.OmL?minS检测波长：270nm;柱温：35°C;进样量：10yL。
[0017] 药物制剂，含有治疗有效量的所述提取物和药学上可接受的载体。
[0018] 所述的提取物在制备治疗血瘀疾病的药物中的应用。
[0019] 所述的药物制剂在制备治疗血瘀疾病的药物中的应用。
[0020] 本发明提取物用作药物时，可以直接使用，或者以药物制剂的形式使用。
[0021] 所述药物制剂含有治疗有效量的本发明延胡索提取物，其余为药物学上可接受 的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0022] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物制剂以单位体重服用量的形式使用。本发明提取物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
[0023] 本发明的优点：本发明通过对干燥的延胡索块茎和大黄进行提取、除杂、富集处 理，能得到具有治疗血瘀疾病的提取物；本发明提供的液相分析方法可以用于建立该提取 物的指纹图谱，用于控制不同批次制备的提取物的批间差异。
【附图说明】
[0024] 图1为延胡索提取物HPLC液相图谱。
【具体实施方式】
[0025] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0026] 实施例1:延胡索提取物①制备（85份延胡索，15份大黄）
[0027] 药材来源：延胡索和大黄购自安徽亳州中药材市场。
[0028] 主要试剂：食品级乙醇购自上海凌峰化学试剂有限公司；医药级AB-8大孔树脂购 自天津波鸿树脂有限公司；乙腈为HPLC级，购于TEDIA;85 %磷酸为HPLC级，购于TEDIA; 色谱用纯净水为哇哈哈纯净水。
[0029] 制备方法：将8. 5kg干燥延胡索块茎和I. 5kg干燥大黄混合粉碎，用60 %乙醇溶 液热回流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液（2L);将所得 乙醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱和 的正丁醇（3LX3次）萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃 取物232g;(c)正丁醇萃取物用I. 5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂（2kg，柱体 积1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积（12L)除去大极性成分，再用70% 乙醇洗脱12个柱体积（18L)，收集70 %洗脱液，减压浓缩，即得延胡索提取物约150g。
[0030] 实施例2 :延胡索提取物②制备（80份延胡索，20份大黄）
[0031] 制备方法：将8.Okg干燥延胡索块茎和2.Okg干燥大黄混合粉碎，用60%乙醇溶 液热回流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液（2L);将所得 乙醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱和 的正丁醇（3LX3次）萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃 取物232g; (c)正丁醇萃取物用I. 5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂（2kg，柱体 积1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积（12L)除去大极性成分，再用70% 乙醇洗脱12个柱体积（18L)，收集70 %洗脱液，减压浓缩，即得延胡索提取物约150g。
[0032] 实施例3:延胡索提取物③制备（90份延胡索，10份大黄）
[0033] 制备方法：将9.Okg干燥延胡索块茎和I.Okg干燥大黄混合粉碎，用60 %乙醇溶 液热回流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液（2L);将所得 乙醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱和 的正丁醇（3LX3次）萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃 取物232g;(c)正丁醇萃取物用I. 5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂（2kg，柱体 积1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积（12L)除去大极性成分，再用70% 乙醇洗脱12个柱体积（18L)，收集70 %洗脱液，减压浓缩，即得延胡索提取物约150g。
[0034] 实施例4:延胡索提取物④制备（75份延胡索，25份大黄）
[0035] 制备方法：将7. 5kg干燥延胡索块茎和2. 5kg干燥大黄混合粉碎，用60 %乙醇溶 液热回流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液（2L);将所得 乙醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱和 的正丁醇（3LX3次）萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃 取物232g;(c)正丁醇萃取物用I. 5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂（2kg，柱体 积1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积（12L)除去大极性成分，再用70% 乙醇洗脱12个柱体积（18L)，收集70 %洗脱液，减压浓缩，即得延胡索提取物约150g。
[0036] 实施例5:延胡索提取物⑤制备（95份延胡索，5份大黄）
[0037] 制备方法：将9. 5kg干燥延胡索块茎和0. 5kg干燥大黄混合粉碎，用60 %乙醇溶 液热回流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液（2L);将所得 乙醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱和 的正丁醇（3LX3次）萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃 取物232g;(c)正丁醇萃取物用I. 5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂（2kg，柱体 积1.5L)富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积（12L)除去大极性成分，再用70% 乙醇洗脱12个柱体积（18L)，收集70%洗脱液，减压浓缩，即得延胡索提取物约150g。
[0038] 实施例6 :液相色谱分析
[0039] 供试品溶液配制：取实施例1方法制得的提取物5mg至50mL棕色容量瓶中，加 30mL10 %乙腈水溶液超声溶解，冷却至室温后，继续加10 %乙腈水溶液定容。分析方法如 下：
[0040] 高效液相色谱仪：Agilent1260,二元栗；
[0041]色谱柱：AgilentZorbaxExtent_C18柱（4. 6mmX250mm，5ym);
[0042] 流动相：A为乙腈，B为0? 5%磷酸