黄精多糖在治疗糖尿病并发神经系统疾病中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及黄精多糖在治疗糖尿病并发神经系统疾病中的应用，本发明还涉及一 种治疗糖尿病并发神经系统疾病的药物。
【背景技术】
[0002] 糖尿病是一组以慢性血葡萄糖（简称血糖）水平升高为特征的代谢性疾病，是由 于胰岛素分泌和（或）作用缺陷所引起。糖尿病是常见病、多发病，在世界范围内，其患病 率正随着人民生活水平的提高、人口老龄化、生活方式的改变而迅速增加，呈现逐年上升的 趋势。糖尿病已成为发达国家继心血管疾病和肿瘤之后的第三大非传染性疾病，对社会和 经济带来沉重负担，是严重威胁全人类健康的世界性公共卫生难题。我国也面临着同样的 问题，保守估计到2025年我国的糖尿病患病人数将高达6千万。
[0003] 糖尿病是一种累及多系统的内分泌疾病，若血糖控制不佳，随着病程的进展，可以 出现临床各系统不可逆的损伤。研究表明糖尿病所导致的脑卒中、认知功能障碍、帕金森综 合征等神经系统病变的患者明显增加，脑卒中的致残率高居各种疾病之首。目前，糖尿病已 被公认为卒中的独立危险因素。糖尿病性神经系统疾病多提示预后不良，如糖尿病性痴呆、 糖尿病性周围神经病等。糖尿病导致的碳水化合物、蛋白质、脂肪代谢紊乱不仅可以导致 目艮、肾、心脏、血管、神经等组织器官的慢性进行性病变、功能减退及衰竭，而且也可以引起 多种组织器官转运蛋白功能和表达的改变，其中就包括血脑屏障（bloodbrainbarrier, BBB)上的P-糖蛋白（P-glycoprotein，P_gP)。
[0004] P-gP是多药耐药基因编码的一种分子量为170kD的膜运输蛋白，其位于脑毛细血 管内皮细胞的腔面，是血脑屏障上的能量依赖性的物质转运体。P-gP作为血脑屏障上的药 物外排泵，具有广泛结构类型的底物，可以调节许多药物的吸收、分布和排泄过程，目前其 在中枢神经系统BBB处的药物转运机制已被广泛的研究。P-gP除了介导化学试剂的转运， 同时也介导内源性生理物质如(6-淀粉状蛋白、类固醇激素等的转运，从而参与糖尿病并 发神经系统疾病的发生发展全过程。
[0005]P-gp在不同疾病条件下，其在BBB上的表达是有变化的，甚至是截然相反的。如人 们发现癫痫、化疗药耐药、精神病等患者脑内P-糖蛋白的含量较高，而另外一种情况，如认 知功能障碍、神经系统性病变等情况下，脑内P-糖蛋白含量却是减少的。
[0006] 从此可知，糖尿病病理状态下BBB上的P-gP的改变，不仅可以导致颅内药物分布 的显著改变,从而影响中枢神经系统药物的药理毒理效应,而且P-gP的改变也是糖尿病并 发神经系统疾病的重要原因之一。因此，研究糖尿病状态下药物对BBB上P-gP表达的影响， 对于神经系统疾病的治疗及临床合理用药尤为重要。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是针对上述技术问题进行研究，得到黄精多糖能显著提高糖尿病状 态下BBB上P-糖蛋白的表达水平，从而得到黄精多糖能应用于治疗糖尿病并发神经系统疾 病治疗的结论。
[0008] 本发明的技术方案是：
[0009] 黄精多糖在治疗糖尿病并发神经系统疾病中的应用。
[0010] 进一步地，所述糖尿病并发神经系统疾病包括糖尿病脑病、脑卒中、帕金森病中的 至少一种。
[0011] -种治疗糖尿病并发神经系统疾病的药物，所述药物的活性成分为黄精多糖。
[0012] -种P-糖蛋白促进剂，所述P-糖蛋白促进剂的活性成分为黄精多糖。
[0013] 本发明通过使用黄精多糖对小鼠进行实验，实验结果显示黄精多糖可显著降低实 验性糖尿病鼠血糖和血清糖化血红蛋白浓度，表明黄精多糖具有调节糖代谢和治疗实验性 糖尿病的作用；并且，黄精多糖能显著提高糖尿病状态下小鼠海马组织上P-gP表达水平， 表明黄精多糖对糖尿病并发神经系统疾病具有干预作用，即黄精多糖能应用于治疗糖尿病 并发神经系统疾病。
【附图说明】
[0014] 为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用 的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本 领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他 的附图。
[0015] 图1表示正常对照组、黄精多糖治疗组、糖尿病模型组通过westernblot检测得 到P-gP的表达，n= 1、2、3 ;
[0016] 图2表示正常对照组、黄精多糖治疗组、糖尿病模型组通过westernblot检测得 到P-gP的表达，n= 4、5、6 ;
[0017] 其中，1组为正常对照组，2组为黄精多糖治疗组，3组为糖尿病模型组，n表示各对 照组的检测序号。
【具体实施方式】
[0018] 下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施 例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通 技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范 围。
[0019] 1、实验材料
[0020] I. 1主要试剂，具体见表1
[0021] 表1.实验过程中所用试剂及其公司
[0022]
[0027] I. 3实验药物由中南大学湘雅二医院药理研究室提供。
[0028] 1. 4动物正常8w龄雄性SPF级昆明小鼠30只，体重30_40g，购自湖南斯莱克景达 实验动物公司。动物生产许可证号=SYXK(湘）2010-0013。室内温度保持在25°C左右，湿 度维持在50%左右，明暗周期12小时，通风干燥、安静，自由饮水和进食。
[0029] 1. 5饲料所需标准小鼠饲料购自湖南省人民医院动物实验中心。
[0030] 2、实验方法
[0031] 2. 1黄精多糖溶液的制备：黄精多糖成药由中南大学湘雅二医院临床药学研究所 提供。将其配置成4%的黄精多糖溶液备用，每日黄精多糖组小鼠灌胃Iml(相当于生药 40g/kg?d)，分两次灌胃给予。
[0032] 2. 2糖尿病模型的建立及实验设计：适应性喂养7天后，根据体重随机分出6只为 正常对照组，另外24只小鼠为模型组。模型鼠连续5d腹腔注射链脲佐菌素（STZ;45mg/ kg)，注射前禁食14h，不禁水。注射时将STZ溶于0.lmol/L柠檬酸缓冲液中（pH4. 5)，避光 冰上配制，溶解后尽量在30分钟内完成注射。正常对照组腹腔注射等量的单纯柠檬酸缓冲 液。注射72h后，通过断尾采血测定空腹血糖值，血糖>11.lmmol/1的小鼠视为造模成功。 将造模失败以及出现感染等严重并发症的小鼠剔除实验。将造模成功的小鼠根据血糖随机 分为糖尿病模型组、黄精多糖药物组，每组8只。整个实验过程中所有小鼠均以普通饲料喂 养。黄精多糖组将4ml/kg?d的黄精多糖（相当于生药40g/kg?d)溶入Iml生理盐水,分 两次灌胃给予。正常对照组及糖尿病模型组以等容量的蒸馏水灌胃，连续给药6周。
[0033] 3、观测指标
[0034] 3. 1 -般情况及体重增长。实验期间对3组小鼠一般情况进行仔细观察，包括小鼠 的饮水量、食量、小便量、体重、精神状态等。于造模前、造模后〇W、2W、4W、6W对小鼠的体重 进行监测，详细记录。
[0035] 3. 2血糖监测。各组小鼠禁食不禁水6h后，剪尾采血，利用便携式血糖仪监测血糖 值。分别于造模前，STZ注射后72小时，造膜后2W、4W、6W通过断尾取血对小鼠的血糖进行 系统监测。
[0036] 3. 3糖化血红蛋白含量的测定。实验结束后用水合氯醛腹腔麻醉（0.lml/10g)小 鼠，各组小鼠眼球放血收集血液，分离血清，保存于-20°C冰箱中待查。
[0037] 3. 4海马组织上P-gP表达的测定。麻醉小鼠收集完血液后，开胸暴露心脏，针穿刺 入左心室至主动脉根部，剪开右心耳，从左心室快速灌注生理盐水，将血液冲洗干净后，断 头取脑，取出两侧海马结构，迅速置入液氮中，-70°C冰箱保存。采用WesternBlot方法测 定海马组织中的P-gP，具体步骤如下：
[0038] 3. 4. 1样品制备
[0039] ①剪取0.25g的组织块，用冰预冷PBS洗涤组织一次，吸尽PBS。将组织块加入到 玻璃匀浆器内，加入500ulRIPA裂解液，上下手动匀浆15次；然后转移至I. 5ml的离心管 中。
[0040] ②冰上，蛋白裂解30分钟
[0041] ③4°C，12000rpm离心5min。（提前开离心机预冷）
[0042] ④将离心后的上清分装转移倒0. 5ml的离心管中，冻存于_20°C。
[0043] 3. 4. 2蛋白浓度检测
[0044] 按照BCA蛋白定量试剂盒（We