一种甘薯提取物及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及一种甘薯提取物及其制备方法与应用。
【背景技术】
[0002] 目前，癌症是导致人类死亡的主要疾病之一，世界卫生组织发布的最新数据显示， 预计全球癌症发病率将从2012年的1400万急剧上升到2032年的2200万。而在同一期间， 癌症死亡人数也将由每年820万人升高到每年1300万人。而我国的癌症在2012年的发病 个案几乎占了全球一半，高居第一位。传统的癌症治疗方法（如放疗和化疗）在一定程度 上可有效杀伤癌细胞，但是也会损伤及破坏正常细胞。与传统的癌症治疗相比，天然抗癌活 性成分的优点就在于高活性、以及无或低不良反应。
[0003] 甘薯（Ipomoea batatas)是旋花科甘薯属的一个重要栽培品种，原产于南美洲，由 于其高产稳产并具有抗干旱、耐瘠薄、适应性强、营养丰富等特点，在我国被大量种植，年产 量约0. 8亿吨，仅次于水稻、小麦和玉米，占世界甘薯总产量的80%以上。经研究发现，甘 薯不仅营养丰富，同时具有很高的药用价值。已有研究报道指出，从海藻、菠菜和灵芝孢子 中分离出的活性物质对乳腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肺腺癌和胃癌细胞等均有一定的抑制作 用。然而，有关甘薯抗癌活性物质的研究还未见报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种甘薯提取物及其制备方法。
[0005] 本发明所提供的甘薯提取物是按照包括下述步骤的方法制备得到的：
[0006] 1)原料预处理：将收获的新鲜甘薯洗净、浙干、切片、干燥后粉碎，得甘薯粉；
[0007] 2)甘薯粗提物的提取：以氯仿和甲醇的混合溶液为提取剂对所述甘薯粉进行提 取，收集提取液，并除去所述提取液中的提取剂得到甘薯粗提物；
[0008] 3)甘薯粗提物的初步分离：对步骤2)中所制得的甘薯粗提物进行固相萃取分离， 得到初步纯化的甘薯粗提物；
[0009] 所述固相萃取分离的步骤为：将所述甘薯粗提物加入固相萃取柱中，依次以氯仿、 丙酮为洗脱剂进行洗脱，收集丙酮洗脱组分，并除去其中所含的溶剂，得到所述初步纯化的 甘薯粗提物；
[0010] 4)甘薯提取物的制备：将步骤3)中所制得的初步纯化的甘薯粗提物溶于甲醇中， 得到甲醇溶液，将所述甲醇溶液通过以大孔吸附树脂为吸附剂的层析柱进行吸附层析，得 到甘薯提取物；
[0011] 所述吸附层析中依次采用水、体积分数为20% -40%的乙醇溶液（优选体积分数 为30% -40%的乙醇溶液）、体积分数为50% -60%的乙醇溶液对层析柱进行洗脱，收集体 积分数为50% -60%的乙醇溶液的洗脱组分，并除去其中所含的溶剂，得到所述甘薯提取 物。
[0012] 其中，上述方法步骤1)中，所述新鲜甘薯可为任一甘薯品种，优选徐薯18。
[0013] 步骤1)中，所述干燥的方式具体可为热风干燥或冷冻干燥，优选冷冻干燥。
[0014] 所述冷冻干燥在真空冷冻干燥机中进行。所述冷冻干燥的条件如下：真空度为 50-1OOPa，温度为-60--70°C，时间为36-60小时，优选48小时。
[0015] 所述冷冻干燥前还包括在_20°C--40°C冰箱里预冻24h-36h的步骤。
[0016] 所述粉碎是在万能粉碎机中进行的，粉碎后所得甘薯粉的粒径为：80-100目。
[0017] 上述方法步骤2)中，所述提取剂中氯仿和甲醇的体积比可为具体可为 1:1、2:1 或 3:1。
[0018] 所述提取的方法具体可为浸提法。
[0019] 所述浸提至少进行一次，具体可进行2-5次，优选进行3次。每次浸提的温度 为-4一-20°C，时间为12-48小时，优选24小时。每次浸提时，所述甘薯粉与提取剂的配比 为 lg: (2_5)mL，具体可为 lg:2mL、lg:3mL 或 lg:5mL。
[0020] 当所述浸提进行两次或两次以上时，所述步骤2)中还包括合并提取液的步骤。
[0021] 步骤2)中所述提取液中所含的提取剂可通过旋转蒸发的方法去除，旋转蒸发的 条件为：温度为35-40°C，转速为50-70rpm，真空度为0. 05-0. 09MPa。
[0022] 上述方法步骤3)中，所述固相萃取分离之前，还包括：将所述甘薯粗提物溶于氯 仿和甲醇混合液中，制备甘薯粗提物溶液的步骤。所述氯仿和甲醇混合液中，氯仿和甲醇的 体积比为具体可为或3:1 ;所述甘薯粗提物与氯仿和甲醇混合液的配比 可为 lg: (l_3)mL。
[0023] 所述固相萃取柱具体可为反相萃取柱、键合柱或硅胶柱，优选硅胶柱；所述固相萃 取柱的规格为：（3-5)mg/20mL。
[0024] 步骤3)中每种洗脱剂的用量均为3-5倍柱体积，优选3倍柱体积。
[0025] 上述方法步骤4)中，所述甲醇溶液中初步纯化的甘薯粗提物与甲醇的配比为Ig : (10-15)mL。所述大孔树脂的型号可为D4020、D101和HP-20,优选D4020。
[0026] 所述大孔树脂在使用前需进行活化，具体活化步骤如下：称取大孔树脂，用体积 分数为95 %乙醇溶液浸泡24-48h，蒸馏水反复清洗至无醇味，加入2mol/L NaOH溶液浸泡 4_6h，用蒸馏水洗至中性，加入2mol/L HCl溶液浸泡4-6h，用蒸馏水洗至中性，抽滤去除水 分，即得；
[0027] 其中，所述大孔树脂与体积分数为95%的乙醇溶液、2mol/L NaOH溶液和2mol/ LHCl溶液的配比分别为Ig : (5-10)mL。
[0028] 步骤4)中，所述吸附层析中，所述水的用量为所述层析柱柱体积的2-5倍，具体可 为5倍或4倍柱体积。
[0029] 所述体积分数为20% -40%的乙醇溶液和体积分数为50% -60%的乙醇溶液的用 量均为所述层析柱柱体积的3-5倍，具体可为4倍或5倍柱体积。
[0030] 所述吸附层析的洗脱条件可具体选自下述任意一种：
[0031] 1)依次采用水、体积分数为40%的乙醇溶液、体积分数为60%的乙醇溶液对层析 柱进行洗脱，收集体积分数为60%的乙醇溶液的洗脱组分；
[0032] 2)依次采用水、体积分数为20%的乙醇溶液、体积分数为50%的乙醇溶液对层析 柱进行洗脱，收集体积分数为50%的乙醇溶液的洗脱组分；
[0033] 3)依次采用水、体积分数为30%的乙醇溶液、体积分数为50%的乙醇溶液对层析 柱进行洗脱，收集体积分数为55%的乙醇溶液的洗脱组分。
[0034] 所述洗脱的流速为0. 5-2. OmL/min，具体可为1.0 mL/min或2. OmL/min。
[0035] 步骤4)中，所述吸附层析中上样的方式具体采用干法上样。
[0036] 具体方法如下：将所述甲醇溶液加入到活化的大孔吸附树脂中，减压浓缩至干，使 所述初步纯化的甘薯粗提物完全吸附于大孔吸附树脂上，得到样品大孔吸附树脂混合物； 然后将所述样品大孔吸附树脂混合物加于大孔吸附树脂层析柱上层，完成上样操作。
[0037] 上述方法中，所述甲醇溶液与活化的大孔吸附树脂的配比为（10-20)mL:lg; 所述大孔吸附树脂层析柱的规格（内径X长度）为：（15-35) X (300-500)mm，具体为 15 X 400mm、20 X 500mm、30 X 500mm。
[0038] 大孔吸附树脂层析柱中空白大孔吸附树脂（即未与样品混合的大孔吸附树脂）与 样品大孔吸附树脂混合物的体积比可为3 :1_5 :1，优选5 :1。
[0039] 本发明的再一个目的是提供所述甘薯提取物的应用。
[0040] 本发明所提供的甘薯提取物的应用是其在下述方面的应用：
[0041] 1)制备真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂中的应用；2)制备真核生物肿瘤细胞粘附 抑制剂中的应用；3)制备真核生物肿瘤细胞迁移抑制剂中的应用；4)在制备预防和/或治 疗肿瘤药物中的应用。
[0042] 所述真核生物为哺乳动物；所述肿瘤细胞为癌细胞；所述癌细胞为乳腺癌细胞或 结肠癌细胞；所述乳腺癌细胞具体为人乳腺癌细胞Bcap-37,所述结肠癌细胞具体为人结 肠癌细胞HT-29。
[0043] 所述肿瘤为癌；所述癌为乳腺癌或结肠癌。
[0044] 以本发明提供的甘薯提取物为活性成分制备的预防和/或治疗肿瘤药物或真核 生物肿瘤细胞增殖抑制剂或真核生物肿瘤细胞粘附抑制剂或真核生物肿瘤细胞迁移抑制 剂也属于本发明的保护范围。
[0045] 所述预防和/或治疗肿瘤药物可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或 化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其他物质混合或包裹 后导入机体。
[0046] 需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载 体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面 活性剂、吸附载体、润滑剂等。
[0047] 以甘薯提取物为活性成分制备的预防和/或治疗肿瘤药物可以制成注射液、片 剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药 学领域的常规方法制备。
[0048] 本发明提供的甘薯提取物及其制备方法具有以下优点：
[0049] (1)该方法操作简单，可实现规模化批量生产；
[0050] (2)该方法所用到的试剂、材料、仪器设备均是常见规格，生产成本低，且无毒环 保；
[0051] (3)该方法所制得的抗癌活性物质，对结肠癌细胞、乳腺癌细胞等均具有较强的增 殖抑制能力，具有较高的商业应用开发价值。