皮肤创伤修复外用溶液制剂及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医药技术领域，具体地说，是关于一种皮肤创伤修复外用溶液制 剂及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 在日常生活中，皮肤创伤时常发生，皮肤愈合过程较慢，处理不当还会引发进一步 感染，甚至引起更严重溃烂。常见的伤口包括皮肤烫伤、烧伤、挫伤、擦伤、以及外科手术、妇 科手术、整形手术引起的皮肤创伤等。如何加快伤口愈合的同时又能避免瘢痕的形成，一直 都是医学科研工作者试图解决的一大难题。
[0003]目前市面上用于创伤护理产品众多，其主要作用是防止伤口感染，利用皮肤自身 的修复作用对伤口进行自我修复。还有一些商品化的产品通过添加促表皮细胞增殖的作用 加速角质屏障的形成，如人表皮生长因子（EGF)，是一种人体自有的广泛存在于皮肤细胞 内的小分子蛋白，由53个氨基酸组成，能有效促进和调节表皮细胞的生长和增殖，对保护 和疗养皮肤、黏膜具有十分独特的功效。EGF已被广泛应用于皮肤外伤修复领域，包括治疗 烧伤、烫伤、手术伤、机械伤、微创以及皮肤其它病患如溃疡、疱疹、炎症、湿疹、过敏等；以及 防止治疗上述皮肤外伤过程中疤痕形成。此外，EGF还被广泛应用于护肤化妆品领域，包括 调节人体自我修复功能，深层解决皮肤问题，全面提高皮肤质量，实现延缓皮肤衰老、收缩 毛孔、紧致皮肤、增进皮肤光洁度和弹性、祛皱、淡化色斑等功效。
[0004] 然而当角质屏障快速形成之后，人表皮生长因子（EGF)天然的物理屏障则阻碍了 蛋白类药物的皮肤渗透，药物无法继续作用于表层皮肤，使得皮肤无法完成正常修复。
【发明内容】
[0005] 本发明的第一个目的在于提供一种外用溶液制剂，能够加速皮肤创伤的修复与愈 合。
[0006] 为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
[0007] 本发明的皮肤创伤修复外用溶液制剂以透皮EGF和蛋清溶菌酶为原料，以甘油、 海藻糖、和羟丙基甲基纤维素为辅料制成。
[0008] 根据本发明的优选实施例，所述外用溶液制剂的配方如下：
[0011] 根据本发明，所述的溶液制剂的形式包括喷剂、乳剂、凝胶、软膏、硬膏和油剂。
[0012] 本发明的第二个目的在于提供一种上述皮肤创伤修复外用溶液制剂的制备方法， 该方法包括以下步骤：
[0013] A、将透皮EGF、甘油、海藻糖、羟丙基甲基纤维素、蛋清溶菌酶按上述配比准备好， 备用；
[0014] B、配制溶液基质：
[0015] 将步骤A中的羟丙基甲基纤维素、海藻糖、甘油加入容器中，加入去离子水，搅拌 混匀，高温高压灭菌，取出，冷却，备用；
[0016] C、加入原料，在无菌条件下，将步骤A中的透皮EGF过滤除菌；
[0017] D、用去离子水溶解溶菌酶，并过滤除菌；
[0018] E、将过滤好的透皮EGF溶液和溶菌酶溶液加入到溶液基质中，加去离子水，采用 灭菌玻璃棒搅拌均匀，分装至灭菌的喷雾瓶中，15ml/瓶。
[0019] 根据本发明，步骤B中的高温高压灭菌时间为20min。
[0020] 根据本发明，步骤C和步骤D均采用0. 22um针头过滤器过滤除菌。
[0021] 本发明的第三个目的在于提供一种上述外用溶液制剂的用于皮肤创伤修复与愈 合的应用。
[0022] 本发明的皮肤创伤修复外用溶液制剂，其有益效果是：在皮肤修复动态过程中，其 比常规EGF具有明显优势，愈合时间更短，同等剂量下治疗效果更佳。
【附图说明】
[0023] 图1为药效学试验中正常组对烫伤模型小鼠的治疗作用皮肤组织病理学照片。
[0024] 图2为药效学试验中模型组对烫伤模型小鼠的治疗作用皮肤组织病理学照片。
[0025] 图3为药效学试验中阳性组对烫伤模型小鼠的治疗作用皮肤组织病理学照片。
[0026] 图4为药效学试验中透皮EGF(0. 004% )组对烫伤模型小鼠的治疗作用皮肤组织 病理学照片。
[0027] 图5为药效学试验中透皮EGF(0. 008% )组对烫伤模型小鼠的治疗作用皮肤组织 病理学照片。
[0028] 图6为药效学试验中透皮EGF(0. 012% )组对烫伤模型小鼠的治疗作用皮肤组织 病理学照片。
[0029] 图7为药效学试验中透皮EGF(0. 016% )组对烫伤模型小鼠的治疗作用皮肤组织 病理学照片。
[0030] 图8为药效学试验中透皮EGF(0. 02% )组对烫伤模型小鼠的治疗作用皮肤组织病 理学照片。
【具体实施方式】
[0031] 以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本 发明而非用于限定本发明的范围。
[0032] 本实施例中所述的透皮EGF为中国专利文献CN102247603B中公开的透皮EGF，是 一种通过将蛋白类药物与透皮增强肽融合组成的融合蛋白。
[0033] 实施例1-5皮肤创伤修复外用溶液制剂的制备
[0034] 本实施例的皮肤创伤修复外用溶液制剂的配方如以下表1所示：
[0035] 表1外用溶液制剂配方
[0037] 按表1所示的配方，通过以下步骤制备外用溶液制剂：
[0038] A、将原料和辅料按表1的用量准备好，备用；
[0039] B、配制溶液基质：
[0040] 将步骤A中的羟丙基甲基纤维素、海藻糖、甘油加入容器中，加入去离子水，搅拌 混匀，高温高压灭菌，取出，冷却，备用；
[0041] C、加入原料，在无菌条件下，将步骤A中的透皮EGF过滤除菌；
[0042] D、用去离子水溶解溶菌酶，并过滤除菌；
[0043] E、将过滤好的透皮EGF溶液和溶菌酶溶液加入到溶液基质中，加去离子水，采用 灭菌玻璃棒搅拌，搅拌均匀，分装至灭菌的喷雾瓶中，15ml/瓶。
[0044] 其中，步骤B中的高温高压灭菌时间为20min ;步骤C和步骤D均采用0. 22 μ m针 头过滤器过滤除菌。
[0045] 实施例6外用溶液制剂的药效学试验
[0046] 本实施例中的外用溶液制剂均为喷剂，采用实施例1-5的配方制成。
[0047] 1、动物种属及试验分组：
[0048] 本实施例采用的动物种属为昆明种小鼠，体重18~22g，性别为雄性。取体重 18~22g雄性小鼠80只，适应性饲养5天后，称重、编号，随机均分为8组，每组10只，即正 常对照组（无创伤组）、模型对照组（创伤，无药物处理）、阳性药物组（烫伤治疗药物金因 肽处理组）、本实施例1-5的受试药物组（外用溶液制剂组）。
[0049] 2、实验方法
[0050] (1)烫伤建模的方法
[0051] 于实验前1天背部脱毛2cmX2cm，次日除正常对照组（10只小鼠）外，取70只小 鼠腹腔注射10%水合氯醛〇. 〇3ml/10g麻醉，将去毛的背部皮肤浸入90°C恒温水浴中持续 6s，使之造成烫伤（浅ΙΓ烫伤），烫伤面积为直径18_。以1/5000呋喃西林清洁伤口，随 后腹腔注射灭菌生理盐水I. 5ml/只。造模后可见皮肤发红、水肿，将造模小鼠随机均分为7 组（雌雄各半），分别为受试药物组、阳性对照组和模型对照组。其中，受试药物组为五组， 分别喷实施例1-5所述的五个浓度的外用溶液制剂；模型对照组（生理盐水处理）为一组， 行烫伤处理，但不接受药物治疗；阳性对照组为一组，经烫伤治疗药物金因肽处理。各组喷 药后均以纱布、保鲜膜覆盖，胶布固定，每天保持烫伤部位与药物接触6h。6h后以生理盐水 洗净药物，连续用药12天。
[0052] (2)检测指标
[0053] 烫伤创面面积计算：于烫伤第1天、第4天及第8天以硫酸纸覆盖烫伤溃疡面沿创 缘描记，剪下描绘的图形，再将图形描至小方格纸，测定小方格的格数表示烫伤创面面积。
[0054] 烫伤皮肤病理组织学检查：末次用药后次日，小鼠处死，剪取烫伤部位皮肤，固定 于10%甲醛溶液中，石蜡包埋切片，HE染色，显微镜下观察比较各组小鼠烫伤皮肤的愈合 程度：〃_〃皮肤角质层、鳞状上皮层、皮下组织的毛囊、毛囊腺均正常；〃+〃皮肤角质层、鳞状 上皮层、皮下组织的大量炎细胞侵润；〃++〃皮肤角质层、鳞状上皮层坏死，皮下组织的大量 炎细胞侵润；〃+++〃皮肤角质层鳞状上皮层、皮下组织的毛囊、毛囊腺均坏死。
[0055] (3)统计方法
[0056] 将试验数据用SPASS软件统计分析，结果以i土S表示，并进行t检验，Ρ〈0· 05有 统计学意义。
[0057] (4)实验结果
[0058] 1)外用溶液制剂对模型小鼠烫伤皮肤面积的影响
[0059] 造模第1天，小鼠烫伤部位皮肤出现明显红斑及水肿，各组无明显差别，说明分 组均匀。造模第4天、第8天，各用药组小鼠皮肤明显好转，烫伤面积显著缩小，与模型组 比较有显著性差异（Ρ〈〇. 01)，且在0. 004%、0. 008%、0. 016%、0. 02%剂量间，呈现一定的 量-效依赖关系；在同等用药体积下，受试药物组各组小鼠烫伤面积明显小于阳性组，与其 比较有显著性差异（Ρ〈〇. 05或Ρ〈0. 01)，详见表2-1。
[0060] 表2_1外用溶液制剂对小鼠烫伤皮肤面积的影响（X土s，)
[0062] 注：与模