柴胡多糖在制备防治甲型流感与病毒肺炎的药物中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明属中药领域，涉及中药柴胡总多糖新的药用用途。具体涉及柴胡多糖在制 备防治甲型流感与病毒肺炎的药物中的用途。
【背景技术】
[0002] 病毒性肺炎（viral pneumonia)是由多种病毒感染而引起的肺部炎症，通常是由 上呼吸道病毒感染向下蔓延所致。引起肺炎的病毒以流行性感冒病毒为常见，还包括副流 感病毒，巨细胞病毒，腺病毒，鼻病毒，冠状病毒和某些肠道病毒等，也可导致病毒性肺炎。A 型流感病毒是引起人和禽类呼吸道疾病的重要病原体。流感病毒侵入细支气管上皮引起细 支气管炎，感染波及肺间质与肺泡而致肺炎。流感病毒一方面在呼吸道上皮细胞和血管内 皮细胞内复制，损伤肺组织，破坏气体交换屏障；另一方面，通过巨噬细胞、分叶核中性粒细 胞、淋巴细胞以及内皮细胞等释放大细胞因子，宿主免疫机制被过度激活并失控，导致急性 肺损伤（孙婉容，吴琦，邵世峰.国际呼吸杂志，2011，14:1094-1096.)。在机体抗病毒感染 免疫的过程中，早期起作用的是以巨噬细胞、干扰素和NK细胞为主的非特异性免疫，后期 则是特异性的细胞免疫和体液免疫起作用。在流感病毒感染的过程中，单核/巨噬细胞活 化产生多种细胞因子，他们以网络的形式在调节机体的免疫应答和炎症反应中起着重要作 用（侯佩莉，张茂林，李影，关振宏.动物医学进展，2010, 10:108-112.)。
[0003] 病毒性肺炎主要病理改变是肺泡水平的气体交换障碍，病毒感染后所致的急性肺 损伤（acute lung injury, ALI)可引发患者出现呼吸窘迫和严重的低氧血症。研究表明单 核细胞浸润、肺泡水肿是形成肺毛细血管通透性增高及肺水肿的病理基础，病毒感染诱发 的肺损伤，临床表现为呼吸困难，严重的可以导致急性呼吸窘迫综合征，甚至死亡。本发明 观察柴胡多糖对病毒诱导的急性肺损伤小鼠的治疗作用。
[0004] 柴胡为伞形科柴胡属（Bupleurum)植物。是我国的传统中药和常用中药，临 床应用十分广泛。其性味苦凉，有疏散退热、疏肝解郁、升阳举气之功效（中华人民共 和国卫生部药典委员会。中国药典。一部。北京：中国医药科技出版社，2010:263)，用 于治疗寒热往来，胸满胁痛，口苦耳聋，头痛目眩等。早期的研究认为，柴胡的主要有效 成分为柴胡皂苷和挥发油。药理学研究证明，柴胡具有解热、抗炎、镇痛、免疫增强、保肝 利胆、抗菌、抗病毒及抗肿瘤等作用（赵玉珍，陶上乘，王英华等.中药材，1998, 21(6): 307-309)。在抗呼吸道病毒研究中，已发现柴胡提取物有抗柯萨奇病毒、冠状病毒的作 用（ChengPW，ChiangLC，YenMH，LinCC.Food Chem Toxicol.2007,45(l):24-31;Cheng PW，Ng LT，Chiang LC，LinCC. Clin Exp Pharmacol Physiol. 2006, 33 (7) :612-616);含柴 胡的多味药水提物复方已证明具有显著的治疗流感病毒感染鼠的药效，降低死亡率。（赵 萍。实用医技杂志，2007,14(16) :2155-2156)。柴胡单味药的提取物对流感病毒感染的 宿主细胞能显著抑制的趋化因子的分泌，从而减轻对细胞的损伤。（WenS，Huifu X，Hao H. Immunopharmacol Immunotoxicol. 2011, 33(3):433-437.)
[0005] 近年来发现柴胡多糖在肺损伤、关节炎等炎性及自身免疫类疾病中发挥着很好 的疗效，已证实柴胡总多糖对体液免疫应答和细胞免疫应答有调节作用，其作用特点与机 体免疫功能状态及给药剂量有关。（王铮，程小芹等。中国临床药学杂志，2009，18(4): 200-204)。对LPS诱导的大鼠急性肺损伤有好的抗氧化作用。（林波，章蕴毅，徐晗，陈道 峰。中国临床药学杂志。2010,1:6-11)能提高LPS诱导的肺损伤大鼠巨噬细胞活性，抑制 炎症细胞因子的释放。（Xiao Qin Cheng, Hong Li, Xi Ling Yue. Journal of Ethnopharma cology. 2010. 130:363 - 368)。以上研究均未涉及柴胡多糖对流感病毒、相关呼吸道病毒、及 病毒诱导急性肺损伤的作用。
[0006] 综观国内外的研究，均未柴胡多糖治疗流感及病毒诱导急性肺损伤的药效及其药 物研究的报道。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供柴胡总多糖在防治甲型流感与病毒性肺炎中新的药物用途。
[0008] 本发明从中药柴胡中分离提取得到总多糖提取物，经整体动物模型试验证实其具 有较强的治疗流感病毒诱导的急性肺损伤的作用。
[0009] 本发明的柴胡总多糖通过下述方法制备：
[0010] 取柴胡药材以95%乙醇冷浸提取，药渣于室温下置通风处晾干，用热水提取3次， 滤过，合并提取液，浓缩，离心，上清液以S三氯醋酸去游离蛋白，离心，上清液用水透析3 天，透析液浓缩至小体积加乙醇至含醇量80 %，离心，沉淀冷冻干燥即得总多糖，产物收率 达3%以上，多糖含量超过65%。
[0011] 本发明中，所述的柴胡药材选自柴胡（Bupleurum chinense DC)，狭叶柴 古月(Bupleurum scorzonerifolium ffilld)或小叶黑柴古月(Bupleurum smithii var. parvifolium Wolff)〇
[0012] 本发明的目的通过下述方法实现：
[0013] 1.柴胡多糖用于治疗病毒诱导肺损伤试验：
[0014] 1)肺指数
[0015] 病毒感染第四天，动物称重，充分取血，解剖完整取下肺脏，将整个肺页置于滤纸， 待滤纸吸干表面水分后称重，以此为肺湿重；计算肺指数，肺指数=肺湿重（mg)/体重（g)。 实验结果显示，与模型组相比，柴胡多糖40mg/kg可显著抑制小鼠肺指数的增高（P〈0. 01)。
[0016] 2)肺总蛋白测定
[0017] 整个全肺留取用于病理切片的肺叶后，其余部分的肺叶盐水漂洗，用适量冰浴的 PBS匀浆，肺匀浆液分装，100ul肺匀浆液使用RIPA裂解法提取肺总蛋白，裂解液低温高 速离心，收获上清分装，应用BCA法检测蛋白含量。牛血清白蛋白作为标准蛋白溶液，制 作标准曲线。BCA工作液加入待测样品后，于自动酶标仪（Epoch，Bi〇-Tek)A562nm处读取 吸收度（A)值。结果显示，与模型组相比，柴胡多糖可显著抑制小鼠肺总蛋白水平的升高 (P〈0. 01)，抑制病毒诱导后肺部对炎性蛋白的募集。
[0018] 3)肺匀浆血凝效价测定
[0019] 根据流感病毒上的血凝素 HA能与鸡红细胞发生凝集反应的原理，来评价病毒的 毒力强弱。取肺匀浆液，高速离心获得上清液，将等倍系列稀释