一枝黄花提取物，该提取物的制备方法及医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药提取物领域，具体涉及一种一枝黄花提取物，该提取物的制备方 法及医药用途，该提取物可以应用于制备治疗痛风性关节炎的药物。
【背景技术】
[0002] -枝黄花为菊科植物一枝黄花的全草或带根全草。夏、秋间采收。别名野黄菊（《南 宁市药物志》）、山边半枝香、洒金花（《江西民间草药》），黄花细辛、黄花一枝香（《广西中 药志》），千根癀（《闽南民间草药》），土泽兰，百条根、铁金拐《泉州本草》），莶子草、小白龙 须、黄花马兰、大败毒、红柴胡（《湖南药物末》)，黄花仔、红胶苦莱（《闽东本草》)、一枝香、 大叶七星剑（《广东中药》），蛇头王（《上海常用中草药》），金锁匙、满山黄、黄花儿（《浙 江民间常用草药》），黄柴胡（四川）。
[0003] 原植物一枝黄花多年生草本，高15~80厘米。茎直立，下部光滑无毛，上部微有 茸毛。叶互生；卵形至矩圆形，长1~5厘米，阔0. 2~2. 5厘米，下部叶具柄，有极小的锯 齿，上部叶较小而狭，近于全缘，上面深绿色，下面灰绿色，两面近光滑无毛。圆锥花序，由腋 生的总状花序再聚集而成；头状花序小，直径5~8毫米，单生或2~4聚生于腋生的短花 序柄上；总苞片狭而尖，具干膜质边缘，长2~5毫米，大小不等，数列呈覆瓦状排列；花托 秃裸；外围的舌状花黄色，雌性，约8枚；中央筒状花，两性，花冠5裂，花药聚合，基部钝。瘦 果近圆柱形，秃净或有柔毛.花期10月。果期11月。生于山野、林缘。全国大部分地区有 分布。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种一枝黄花提取物，其制备方法和液相分析方法，含有 该提取物的药物制剂及利用该提取物制备治疗痛风性关节炎的药物的用途。
[0005] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0006] -种一枝黄花提取物，该提取物由以下方法制备：
[0007] (a)以重量计，每100份药材包含干燥的一枝黄花80~90份和干燥的薄荷10~ 20份，混合粉碎，用75 %乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓 缩液；(b)将步骤（a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的 正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c)正 丁醇萃取物用水溶解，过滤，用大孔树脂富集活性成分，先用10%乙醇冲洗8个柱体积除去 大极性成分，再用70%乙醇洗脱12个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩即得。
[0008] 为了能够通过建立HPLC指纹图谱的方法控制不同批次制备的提取物的批间差 异，所述提取物的液相分析方法为：
[0009] 色谱柱：Agilent Zorbax Extent_C18 柱（4. 6mmX 250mm，5 μ m);
[0010] 流动相：A为乙腈，B为0. 5%磷酸溶液；
[0011] 梯度洗脱程序：0 ~5min，A 10%-15%;5 ~10min，A 15%-48%;10 ~25min， A48%- 78% ;25 ~30min，A 78%- 10% ;
[0012] 流动相流速：1. OmL · min S检测波长：240nm ;
[0013] 柱温：35°C ;进样量：10yL。
[0014] 药物制剂，含有治疗有效量的所述提取物和药学上可接受的载体。
[0015] 所述的提取物在制备治疗痛风性关节炎的药物中的应用。
[0016] 所述的药物制剂在制备治疗痛风性关节炎的药物中的应用。
[0017] 本发明提取物用作药物时，可以直接使用，或者以药物制剂的形式使用。
[0018] 所述药物制剂含有治疗有效量的本发明一枝黄花提取物，其余为药物学上可接受 的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0019] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物制剂以单位体重服用量的形式使用。本发明提取物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
[0020] 本发明的优点：本发明通过对干燥的一枝黄花和薄荷进行提取、除杂、富集处理， 能得到具有治疗痛风性关节炎的提取物；本发明提供的液相分析方法可以用于建立该提取 物的指纹图谱，用于控制不同批次制备的提取物的批间差异。
【附图说明】
[0021] 图1为一枝黄花提取物HPLC液相图谱。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0023] 实施例1 :一枝黄花提取物①制备（85份一枝黄花，15份薄荷）
[0024] 药材来源：一枝黄花和薄荷购自安徽亳州中药材市场。
[0025] 主要试剂：食品级乙醇购自上海凌峰化学试剂有限公司；医药级AB-8大孔树脂购 自天津波鸿树脂有限公司；乙腈为HPLC级，购于TEDIA ;85 %磷酸为HPLC级，购于TEDIA ; 色谱用纯净水为哇哈哈纯净水。
[0026] 制备方法：将8. 5kg干燥一枝黄花根茎和1. 5kg干燥薄荷混合粉碎，用75 %乙醇 溶液热回流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液（2L);将所 得乙醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱 和的正丁醇（3LX3次）萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇 萃取物232g ; (c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂（2kg，柱 体积1. 5L)富集活性成分，先用10 %乙醇冲洗8个柱体积（12L)除去大极性成分，再用70 % 乙醇洗脱12个柱体积（18L)，收集70 %洗脱液，减压浓缩，即得一枝黄花提取物约150g。
[0027] 实施例2 :-枝黄花提取物②制备（80份一枝黄花，20份薄荷）
[0028] 制备方法：将8. 0kg干燥一枝黄花根茎和2. 0kg干燥薄荷混合粉碎，用75 %乙醇 溶液热回流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液（2L);将所 得乙醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱 和的正丁醇（3LX3次）萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇 萃取物232g ; (c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂（2kg，柱 体积1. 5L)富集活性成分，先用10 %乙醇冲洗8个柱体积（12L)除去大极性成分，再用70 % 乙醇洗脱12个柱体积（18L)，收集70 %洗脱液，减压浓缩，即得一枝黄花提取物约150g。
[0029] 实施例3 :-枝黄花提取物③制备（90份一枝黄花，10份薄荷）
[0030] 制备方法：将9. 0kg干燥一枝黄花根茎和1. 0kg干燥薄荷混合粉碎，用75 %乙醇 溶液热回流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液（2L);将所 得乙醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱 和的正丁醇（3LX3次）萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇 萃取物232g ; (c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂（2kg，柱 体积1. 5L)富集活性成分，先用10 %乙醇冲洗8个柱体积（12L)除去大极性成分，再用70 % 乙醇洗脱12个柱体积（18L)，收集70 %洗脱液，减压浓缩，即得一枝黄花提取物约150g。
[0031] 实施例4 :一枝黄花提取物④制备（75份一枝黄花，25份薄荷）
[0032] 制备方法：将7. 5kg干燥一枝黄花根茎和2. 5kg干燥薄荷混合粉碎，用75 %乙醇 溶液热回流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液（2L);将所 得乙醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱 和的正丁醇（3LX3次）萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇 萃取物232g ; (c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂（2kg，柱 体积1. 5L)富集活性成分，先用10 %乙醇冲洗8个柱体积（12L)除去大极性成分，再用70 % 乙醇洗脱12个柱体积（18L)，收集70 %洗脱液，减压浓缩，即得一枝黄花提取物约150g。
[0033] 实施例5 :-枝黄花提取物⑤制备（95份一枝黄花，5份薄荷）
[0034] 制备方法：将9. 5kg干燥一枝黄花根茎和0. 5kg干燥薄荷混合粉碎，用75 %乙醇 溶液热回流提取（25LX3次），合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液（2L);将所 得乙醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚（3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次）和水饱 和的正丁醇（3LX3次）萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇 萃取物232g ; (c)正丁醇萃取物用1. 5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂（2kg，柱 体积1. 5L)富集活性成分，先用10 %乙醇冲洗8个柱体积（12L)除去大极性成分，再用70 % 乙醇洗脱12个柱体积（18L)，收集70 %洗脱液，减压浓缩，即得一枝黄花提取物约150g。
[0035] 实施例6 :液相色谱分析
[0036] 供试品溶液配制：取实施例1方法制得的提取物5mg至50mL棕色容量瓶中，加 30mL 10 %乙腈水溶液超声溶解，冷却至室温后，继续加10 %乙腈水溶液定容。分析方法如 下：
[0037] 高效液相色谱仪：Agilent 1260,二元栗；
[0038] 色谱柱：Agilent Zorbax Extent_C18 柱（4. 6mmX 250mm，5 μ m);
[0039] 流动相：A为乙腈，B为0. 5%磷酸溶液；
[0040] 梯度洗脱程序
[0041] 流动相流速：1. OmL · min S检测波长：240nm ;柱温：35°C ;进样量：10 μ L。
[0042] 用制备的10批次的一枝黄花提取物进行分析，进行色谱峰匹配，结果1~10号峰 在10批样品色谱图中均出现。因此标定10个峰为共有色谱峰，据此建立该提取物的HPLC 质量控制图谱，结果见图1。该10批次的一枝黄花提取物药理活性相似。
[0043] 实施例7 :提取物药理试验
[0044] 一、材料与方法
[0045] 1. 1药物：一枝黄花提取物①~⑤分别按照实施例1~5制得。秋水仙碱片，批号 100206,规格0. 5mg/s，西双版纳版纳药业有限责任公司；取6片秋水仙碱，研磨，加蒸馏水