unt01ive，N.J.)溶于去离子水（15,733g)中。将溶液保持在0· 1°C，加入 2335.lg的（NH4)2S04。在2°C平衡溶液，形成完全不同的两相后，弃掉下层相，收集上层相并 称重（2060g)。加入去离子水（14159g)，让溶液平衡到2°C。接下来边搅拌边加入2171.6g 的（NH4)2S04。在该盐溶解后，让溶液保持在大约2°C，直到形成两相。分离上层相（3340g) 并用12879g去离子水稀释。让溶液冷却到约2. 2°C，加入2062g的（NH4)2S04。如上分开各 相。分离出上层相并用4升二氯甲烷萃取。过夜以形成两相。分离出有机（下层）相，将大 约2kg硫酸钠（Na2S04)加入其中以除去残留的水。通过PTFE过滤器（0.45μπι孔径）过滤 二氯甲烷相以除去未溶解的盐。在大约30°C时真空下除去二氯甲烷。通过在约30°C时于烤 箱中过夜干燥除去最后痕量的二氯甲烷。总共收获了 297. 6g分级分离的泊洛沙姆407 (批 号00115001)。在图5的表1中对分级分离的泊洛沙姆407及其原料的化学及物理性质进 行了比较。
[0252] 实施例4-样品粘度的体外测定：可用带温度控制的Brookfield锥杯式粘度计 测量粘度变化。例如，泊洛沙姆407的粘度变化图（图4)清楚地表明，聚合物浓度从大约 12. 5w%直到至少20w%将显示溶液粘度随温度急剧增加。胶凝化的开始依赖温度，聚合物 浓度越高，导致胶凝化开始得越早。此外，实验证明聚合物浓度低于大约12. 5w%时，溶液粘 度不随温度升高而增加，即使在体温时也保持液态。
[0253]这两个发现证明了纯化的逆向热敏聚合物的可能的工作原理。在特定温度（例如 典型的手术室温度）时可将聚合物溶液作为软凝胶注入切开动脉中，温度升高导致形成硬 凝胶。凝胶在血液中将开始溶解，并且当聚合物浓度降低时，在生理温度下没有重新固化为 凝胶的任何可能性。或者，用冰或冷盐水使凝胶冷却，当温度降到低于胶凝点时，凝胶将液 化。作为液态，它很快稀释到血液中，再次在生理温度时它没有重新回到凝胶的可能性。
[0254] 实施例5-精选的Huronie·和Tetrode?聚合物溶液的胶凝温度：将聚合物称 重后加到塑料管中。为了达到所需浓度，将重量乘以4为25%重量（w%)，乘以5为20% 重量（w% )，通过加入盐水得到所需的最终重量。将溶液置于4°C冰箱中，通常在24小时内 准备好。用Brookfield粘度计测量胶凝点，将超过板/锥范围的粘度（大于约102,OOOcP) 点称为胶凝温度。参见图5中的表2。
[0255] 实施例6a-对脊椎动物的研究：动物研究可进一步支持在部分肾切除术期间用 逆向热敏聚合物达到有效止血的可行性。这涉及肾的动脉系统和静脉系统以及骨髓的解 剖学和生理学细节等所有方面，这些是无法在体外模型中复制的。杂食动物猪的解剖结构 与人相似，藉此形成了人手术条件的最好模拟，猪肾是典型的人肾模型。M.M.Swindle等， "Swineasmodelsinexperimentalsurgery(猪在实验性手术中作为模型），"JInvest Surg. 1988, 1(1)，65-79。
[0256] 急性实验用农场养的普通猪进行。猪重约30_40kg，比人体型稍小一点，但足以评 估我们的止血剂的可行性。每头猪都将实施部分肾切除术。将评估应用本发明瞬时凝胶获 得暂时性止血作用。
[0257]猪用含有乙酰丙嗪（acepromazine) (1.lmg/kg)和阿托品（atropine) (0· 05mg/ kg)的混合物作为预麻醉剂通过肌肉注射来进行诱导。给予预麻醉剂5-15分钟后，猪用氯 胺酮（ketamine) (20mg/kg)和噻拉嗪（xylazine) (2.Omg/kg)通过肌内（IM)注射来进行诱 导。在猪达到允许气管内插管的麻醉水平后，插入管子。插管后，动物在整个准备和手术期 间都将维持吸入麻醉状态（依靠半封闭的途径吸入异氟烷（isoflurane)来实现）。如果需 要，将用通风设备实现辅助性通风换气。将静脉内导管在无菌条件下置于耳静脉或其它合 适的血管内。
[0258] 诱导麻醉后，将猪准备好，剃掉猪毛后推入手术室。如上所述为该动物通风换气。 通过划分其直肌止端（rectusinsertion)侧面约1英寸处的斜腹肌，从腹股沟韧带正上方 的前缘右正中切口打开腹膜。从肾部位摺叠腹膜，露出腔静脉和主动脉。清洁肾、肾动脉和 肾静脉并使其裸露。将热敏电阻置于正好最接近肾动脉的主动脉中用于监测注入时候的血 液温度。
[0259] 为了诱导肾暂时缺血，通过穿刺将25号导管引入肾动脉并往里进1. 5cm。在实验 期间一直让其留在适当位置。将注入大约l-2cc聚合物。在手术前，部分基于粘度测量和聚 合温度资料确定注入体积和注入速率。关于每次注入的数据包括：注入时间、注入速率、注 入体积、血液温度、停止血流的时间、血流停止的完全程度、实施部分肾切除术的时间（包 括切开肾表面折叠）和恢复血流的时间。这些数据将与聚合物的物理性质有关。
[0260] 保持动物不动直到完全恢复血流和肾的正常外貌。然后在稳定条件下再保持一个 小时，以确保保留的肾实质完全再灌注。用过量戊巴比妥和苯妥英对动物实施安乐死。将 切除的肾部分和再灌注的肾部分送到显微镜下分析。处理掉剩下的猪尸体。按下述方案静 脉内注入戊巴比妥钠和苯妥英将实现安乐死：药物：戊巴比妥钠和苯妥英钠；剂量：lcc/10 镑；途径：快速静脉内注射。如果动物处于深度麻醉状态，可静脉内给予饱和KC1溶液实现 安乐死。在给予药物后，检查动物以确保呼吸功能已经停止并且没有可触知的心功能。
[0261] 实施例6b-用于猪麻醉的部分实验程序：下面是在实施了实施例6a的方法后可 接着进行的部分实验方案。
[0262] 动物识别：通过耳廓上的刺纹或耳牌来识别每只动物。
[0263] 麻醉；#1号选项：猪用含有泰拉瑞（Telazol) (4. 4mg/kg)、噻拉嗪（2. 2mg/kg)和 阿托品（0.05mg/kg)的混合物通过肌内注射来诱导到允许气管内插管的麻醉水平。插管 后，动物在整个准备和手术期间都将维持吸入麻醉状态（依靠半封闭的途径吸入异氟烷来 实现）。如果需要，将用通风设备实现辅助性通风换气。将静脉内导管在无菌条件下置于耳 静脉或其它合适的血管内。
[0264] 麻醉；#2号选项：猪用含有乙酰丙嗪（1.lmg/kg)和阿托品（0. 05mg/kg)的混合物 作为预麻醉剂通过肌肉注射来进行诱导。给予预麻醉剂5-15分钟后，猪用氯胺酮（20mg/ kg)和噻拉嗪（2.Omg/kg)通过肌肉注射来进行诱导。在猪达到允许气管内插管的麻醉水平 后，插入管子。插管后，动物在整个准备和手术期间都将维持吸入麻醉状态（依靠半封闭的 途径吸入异氟烷来实现）。如果需要，将用通风设备实现辅助性通风换气。将静脉内导管在 无菌条件下置于耳静脉或其它合适的血管肉。
[0265] 手术准备：如果是生存手术，就要实施无菌方法。用配有外科刮胡刀片的动物电 动剪毛机来完成手术部位的脱毛。用真空吸尘器除去该区域剪下的所有东西和碎片，然后 以交替顺序用含1 %有效碘和70%异丙醇的碘伏水溶液擦洗并消毒最少3次。风干后用含 0. 7%有效碘和74%异丙醇的溶液涂遍整个区域。将已麻醉并作好手术准备的动物送到手 术台，放置在所需要的斜躺位置。用无菌手术罩将整个动物和手术台罩上。以4-6ml/kg/ 小时的维持速率给予静脉内流体治疗。
[0266] 临床观察：手术后，按照兽医人员和/或主要研究者的指导意见监测温度、脉搏和 呼吸率。手术后每天观察动物以确定以食物消耗、排泄和一般姿态为基础的健康状况。每 天还要观察所有动物是否存在疼痛和/或不适，需要时就给予镇痛药。
[0267] 镇痛药：在手术后最初的48小时期间，给予丁丙诺非（buprenex) (0. 01-0. 02mg/ kg/頂Q12小时）。过了最初的48小时后，需要时才给予镇痛药。
[0268] 安乐死：按照瓶上标签的说明进行静脉内注射戊巴比妥钠和苯妥英钠来实现安乐 死。如果动物处于深度麻醉状态，可静脉内给予饱和氯化钾溶液来实现安乐死。钾离子有 心脏毒性，快速静脉内或心脏内给予l-2mmol/kg体重将引起心搏停止。在给予药物后，检 查动物以确保呼吸功能已经停止并且没有可触知的心功能。
[0269] 文献引用
[0270] 本文引用的所有美国专利和美国公布的专利申请在此都引作参考。
[0271] 等同实施方案
[0272] 本领域技术人员只是使用常规实验就能认识到或者能够确定本文所述发明的具 体实施方案的很多等同实施方案。这样的等同实施方案也落入了本发明权利要求书的范围 之内。
【主权项】
1. 在受治疗者中灌注器官止血的方法，该方法包括将一定体积的组合物引入与器官流 体相通的动脉血管内的步骤，其中所述体积足以充分灌注所述器官；和所述组合物在所述 器官中形成瞬时凝胶。2. 权利要求1的方法，其中所述组合物的体积为约1-25mL或约1-10mL。3. 权利要求1的方法，其中经约1-30秒或约2-20秒引入所述组合物。4. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶在哺乳动物生理温度时为凝胶。5. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶包含至少一种任选纯化的逆向热敏聚合物。6. 权利要求5的方法，其中所述瞬时凝胶包含约5%至约35%的所述逆向热敏聚合物。7. 权利要求5的方法，其中所述瞬时凝胶包含约10%至约30%的所述逆向热敏聚合物。8. 权利要求5的方法，其中所述至少一种任选纯化的逆向热敏聚合物的多分散指数为 约1. 5至约1. 0。9. 权利要求5的方法，其中所述至少一种任选纯化的逆向热敏聚合物的多分散指数为 约1. 2至约1. 0。10. 权利要求5的方法，其中所述至少一种任选纯化的逆向热敏聚合物选自嵌段共聚 物、无规共聚物、接枝共聚物和支化共聚物。11. 权利要求5的方法，其中所述至少一种任选纯化的逆向热敏聚合物是聚氧化烯嵌 段共聚物。12. 权利要求5的方法，其中所述至少一种任选纯化的逆向热敏聚合物选自泊洛沙姆 类和泊洛沙胺类。13. 权利要求5的方法，其中所述至少一种任选纯化的逆向热敏聚合物选自泊洛沙 姆407、泊洛沙姆288、泊洛沙姆188、泊洛沙姆338、泊洛沙姆118、Tetronic? 1107和 Tetronic? 1307〇14. 权利要求5的方法，其中所述至少一种任选纯化的逆向热敏聚合物是泊洛沙姆 407 〇15. 权利要求5的方法，其中所述至少一种任选纯化的逆向热敏聚合物选自纯化的泊 洛沙姆类和纯化的泊洛沙胺类。16. 权利要求5的方法，其中所述至少一种任选纯化的逆向热敏聚合物选自纯化的泊 洛沙姆407、纯化的泊洛沙姆288、纯化的泊洛沙姆188、纯化的泊洛沙姆338、纯化的泊洛沙 姆 118、纯化的Tetronic? 1107 和纯化的Tetronic? 1307〇17. 权利要求5的方法，其中所述至少一种任选纯化的逆向热敏聚合物是纯化的泊洛 沙姆407。18. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶包含赋形剂。19. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶包含药用脂肪酸赋形剂。20. 权利要求19的方法，其中所述药用脂肪酸赋形剂为油酸钠、月桂酸钠或癸酸钠。21. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶包含治疗剂。22. 权利要求21的方法，其中所述治疗剂选自抗炎药、抗生素、抗菌药、化疗药、抗病毒 药、镇痛药和抗增殖药。23. 权利要求21的方法，其中所述治疗剂是抗生素。24. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶包含对比增强剂。25. 权利要求24的方法，其中所述对比增强剂选自造影剂、顺磁材料、重原子、过渡金 属、镧系元素、锕系元素、染料和含放射性核素的材料。26. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶的转变温度介于约20°C至约50°C之间。27. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶的转变温度介于约30°C至约40°C之间。28. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶在生理温度时的体积是它在其转变温度以 下的体积的约80%至约120%。29. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶在生理温度时的体积是它在其转变温度以 下的体积的约80%至约120% ;所述瞬时凝胶的转变温度介于约20°C至约50°C之间。30. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶在生理温度时的体积是它在其转变温度以 下的体积的约80%至约120% ;所述瞬时凝胶的转变温度介于约30°C至约40°C之间。31. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶在生理温度时的体积是它在其转变温度以 下的体积的约80%至约120% ;所述瞬时凝胶的转变温度介于约20°C至约50°C之间；所述瞬 时凝胶包含至少一种任选纯化的逆向热敏聚合物，其选自泊洛沙姆类和泊洛沙胺类。32. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶在生理温度时的体积是它在其转变温度以 下的体积的约80%至约120% ;所述瞬时凝胶的转变温度介于约30°C至约40°C之间；所述瞬 时凝胶包含至少一种任选纯化的逆向热敏聚合物，其选自泊洛沙姆类和泊洛沙胺类。33. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶包含阴离子型、阳离子型或非离子型可交联 聚合物。34. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶包含聚合物，其选自藻酸、藻酸钠、藻酸钾、 胶酸钠、胶酸钾、羧甲基纤维素、透明质酸和聚乙烯醇。35. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶包含磷酸盐、柠檬酸盐、硼酸盐、琥珀酸盐、 马来酸盐、己二酸盐、草酸盐、钙、镁、钡、锶或其组合。36. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶包含选自藻酸、藻酸钠、藻酸钾、胶酸钠和胶 酸钾的聚合物；和钙、镁或钡。37. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶包含选自藻酸、藻酸钠或藻酸钾的聚合物； 并且还包含含钙组合物。38. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶包含选自胶酸钠和胶酸钾的聚合物；并且还 包含镁。39. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶包含透明质酸和钙。40. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶包含聚乙烯醇和硼酸盐。41. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶包含蛋白质，其选自胶原蛋白、明胶、弹性蛋 白、白蛋白、鱼精蛋白、血纤蛋白、血纤蛋白原、角蛋白、颠蛋白和酷蛋白。42. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶包含透明质酸或壳聚糖。43. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶包含藻酸盐、果胶、甲基纤维素或羧甲基纤 维素。44. 权利要求1的方法，其中所述瞬时凝胶包含可交联聚合物。45. 权利要求1-44中任一项的方法，其中所述器官是高度血管化器官。46. 权利要求45的方法，其中所述器官是肾脏、肝脏、前列腺、脑、子宫或脾脏。47. 权利要求45的方法，其中所述器官是肾脏、肝脏或前列腺。48. 权利要求45的方法，其中所述器官是肾脏。49. 权利要求1-48中任一项的方法，其中所述瞬时凝胶的寿命为约20分钟。50. 权利要求1-48中任一项的方法，其中所述瞬时凝胶的寿命为约30分钟。51. 权利要求1-48中任一项的方法，其中所述瞬时凝胶的寿命为约40分钟。52. 权利要求1-51中任一项的方法，其中所述受治疗者是哺乳动物。53. 权利要求1-51中任一项的方法，其中所述受治疗者是人。54. 权利要求1-53中任一项的方法，其中用注射器、套管、导管或经皮进入装置引入所 述组合物。55. 权利要求1-53中任一项的方法，其中用双腔导管或三腔导管引入所述组合物。56. 权利要求55的方法，其中所述导管尺寸为3_10French或3_6French。57. 权利要求1-53中任一项的方法，其中用注射器引入所述组合物。58. 权利要求57的方法，其中所述注射器为1-100cc注射器、1-50cc注射器或1-5cc注射器。59. 权利要求1-58中任一项的方法，其中所述组合物在引入之前冷却到约15°C。60. 权利要求1-58中任一项的方法，其中所述组合物在引入之前冷却到约10°C。61. 权利要求1-58中任一项的方法，其中所述组合物在引入之前冷却到约5°C。62. 权利要求1-58中任一项的方法，其中所述组合物在引入之前冷却到约0°C。63. 权利要求1-58中任一项的方法，其中所述组合物在引入之前用冰、水或冷袋进行 冷却。64. 权利要求1-63中任一项的方法，其还包括引入盐水以帮助所述瞬时凝胶的溶解。65. 权利要求1-64中任一项的方法，其还包括使所述器官冷却的步骤。
【专利摘要】本发明公开了通过使用基于聚合物溶液的内部封堵物来控制出血的组合物、方法和药盒，包括逆向热敏聚合物在保留肾单位手术中的用途，其产生了完全无血的手术区，使得可进行快速切除术。在某些实施方案中，在某一段时间后，血流逐渐恢复，且对肾没有明显不利的结果。在某些实施方案中，可通过使肾冷却来加速血流返回。用于灌注器官止血的组合物、方法和药盒也可用于使其它器官手术或介入程序简化或使其成为可能，这些手术包括肝脏手术、前列腺手术、脑手术、子宫手术、脾脏手术和任何高度血管化器官的任何手术。
【IPC分类】A61L15/26, A61L15/44, A61M5/178
【公开号】CN105251035
【申请号】CN201510386368
【发明人】J.-M.富格尔, J.A.威尔基, P.N.马德拉斯
【申请人】健赞公司, 莱希诊疗公司
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2007年12月11日
【公告号】CN101677822A, EP2094169A1, EP2094169A4, US20080181952, US20140205542, WO2008073938A2