包含芳族醇和trpv-1拮抗剂的组合物及其用图
【专利说明】
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请是2013年6月6日提交的美国申请序列号13/911,492的部分继续申请， 其公开内容据此以引用方式并入本文。
技术领域
[0003] 本发明涉及一种包含芳族醇和TRPV-1拮抗剂的组合物及其使用方法。
【背景技术】
[0004] 苯氧乙醇是用于对用于局部施用的化妆品和药物制剂进行防腐的普通成分。苯 氧乙醇（有时称为2-苯氧基-1-乙醇或乙二醇单苯醚）是用于针对各种微生物提供生 物杀灭活性的防腐剂。遗憾的是，苯氧乙醇还是对皮肤的刺激物（参见例如，LeeE等人， ContactDermatitis. 2007年3月；56(3) :131-6.)。相似地，还已知苄醇诱导体内皮肤刺 激（Bagley，D.M.等人（1996)ToxicolInVitro10(1): 1-6)。
[0005]TRPV-1 (瞬间感受器电位香草酸受体，亚族V，受体1)是由TRPV-1基因编码的蛋 白质。TRPV-1是非选择性配体门控性阳离子通道，其响应于升高的温度以及机械或化学刺 激而被激活。该受体存在于中枢神经系统以及非中枢神经细胞诸如角质细胞中。TRPV-1的 激活允许阳离子尤其是Ca2+瞬间流动到细胞中。这种Ca2+内流刺激了疼痛的感觉并已与各 种细胞性活动如炎症的发作相关联。已知TRPV-1的激活诱导人的角质细胞中促炎介质的 释放（Southall,M.D.等人（2003)JPharmacolExpTher304(1): 217-222)。
[0006] 已知TRPV-1是被辣椒碱（存在于红辣椒中的化合物）激活的，并且据报道抗辣椒 碱为TRPV-1 拮抗剂（Bevan，S.等人，BrJPharmacol107 (2) :544-552)。已知为TRPV-1 诘抗剂的其它化合物是可以AMG9810 从TocrisBioscience(Bristol,UnitedKingdom)商 购获得的（E)-3_ (4-叔丁基苯基）-N-(2, 3-二氢苯并[b] [1，4]二氧杂环己稀-6_基）丙稀 酰胺（Gavva，N.R.等人（2005)JPharmacolExpTher313(1) :474-484)，和可以SYMSITIVE 1609 从SymriseGmbH(Holzminden，Germany)商购获得的 4-叔丁基环己烧（Kueper，T.等 人（2010)ExpDermatol19(11):980-986)。
[0007] 申请人现已发现包括苯氧乙醇的某些芳族醇激活TRPV-1。令人惊讶的是申请人还 已发现并非所有的皮肤刺激物都激活TRPV-1且并非所有的抗炎剂化合物或止痛药都抑制 TRPV-1的激活。因此，芳族醇、芳族醇的刺激特性和TRPV-1之间的关联性的发现是意料不 到的。
[0008] 本文提供了低刺激性的含芳族醇的局部用组合物。有利地，它们还不需要存在对 羟基苯甲酸酯（对羟基苯甲酸的酯），许多消费者所关心的效果。还提供它们的使用方法。
【发明内容】
[0009] 本发明提供了一种组合物，其包含芳族醇和TRPV-1拮抗剂，所述芳族醇具有下 式：
[0011] 其中X为氧原子或不存在，并且Y为C1-C2烷基；其中所述组合物基本上不含对羟 基苯甲酸的酯。
[0012] 本发明提供了一种清洁皮肤的方法，该方法包括向皮肤施用上文组合物，以及将 该组合物从皮肤清洗掉。
所述方法包括局部施用所述含有TRPV-1拮抗剂的芳族醇。
[0013] 本发明还提供了一种减少由局部施用芳族醇诱导的刺激的方法，所述芳族醇具有 下式：
[0014] 式1其中X为氧原子或不存在，并且Υ为C1-C2烷基；
【具体实施方式】
[0015] 除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语均具有与本发明所属领域的 普通技术人员通常理解的含义。此外，将本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参 考文献以引用方式并入本文。除非另外指明，否则百分比是指重量百分比，即％ (重量/重 量）。
[0016] 如本文所用，"基本上不含"成分意指含有小于约1重量％，如小于约0. 5重量％， 如小于约0.25重量％，如小于约0.1重量％的此类成分。在一个实施例中，"基本上不含" 意指完全不含此类成分。
[0017] 据信，本领域技术人员可在本文描述的基础上充分利用本发明。下面的具体实施 例应理解为仅是示例性的，并且无论如何都不会以任何方式限制本公开的其余部分。
[0018] 芳族醇
[0019] 本发明的组合物包含式1的芳族醇：
[0021] 其中X为氧原子或不存在，并且Υ为C1-C2烷基。
[0022] 在一个实施例中，所述芳族醇选自苯氧乙醇、苄醇、苯乙醇、以及它们的混合物。
[0026] 该组合物中芳族醇的量可根据诸如其具体生物杀灭要求或该组合物是否"准备使 用"等各因素而改变，要求用水稀释，或者为将加入单独制剂中的浓度的形式。
[0027] 广义地，该组合物可含有范围为按该组合物的重量计约0. 1 %至约80%、或0. 1% 至约66 %，诸如0. 1 %至约50 %的芳族醇。
[0028] TRPV-1 桔抗齐 1丨
[0029] 该组合物还包含TRPV-1拮抗剂。
[0030] 在一个实施例中，TRPV-1拮抗剂将芳族醇的钙流抑制如通过钙流测试所测量的至 少约12%、或至少约20%，优选至少约50%，诸如约50%至约80%。
[0031] "钙流测试"以如下方式进行：表达人的香草酸受体-1的重组HEK293细胞 (TRPV-1 ;登录号AF196175,EMDMillipore,Billerica,MA)在D-MEM/F-12 培养基（Life Technologies,GrandIsland,NY)中生长，该培养基补充有10%的胎牛血清、1 %的非必需 氨基酸和 400μg/mL的Geneticin(Gibco,LifeTechnologies)。将细胞以每个孔 15, 000 个细胞的浓度铺在聚-D-赖氨酸涂覆的384个孔板上并将其在5 % 0)2和37°C下温育过 夜。在温育后，将培养基从孔中移除并用每孔50μL的Fluo-8无洗涤染料溶液（Fluo-8No Washdyesolution)(编号 36315，AATBioquest,Sunnyvale,CA)替换。通过将 20uL的 Fluo-8NW与 30mL的 0· 33Xp丨uronic'?F127Plus(BASF(Ludwigshafen,Germany))在测 定缓冲液（IXHBSS+2%HEPES)中混合来制备Fluo-8染料溶液（Fluo-8dyesolution)。 将Fluo-8染料在室温下温育30分钟。在暴露于DMS0载体中的芳族醇时通过功能性药物 筛选系统（FDSS;Hamamatsu，Germany)测量Ex/Em490/525下的荧光强度来监测细胞内钙 (Ca2+)流。在4分钟的时间段内每秒取测量值。结果以4分钟时间段期间的最大相对荧 光单元的平均值土标准偏差呈现出。统计差值使用单因素方差分析用图基事后比较测试 (TukeyPost-hoctest)来获得；统计显著性以P< 0. 05限定。
[0032] 将用给出的芳族醇浓度获得的最大RFU与使用相同浓度但在染料温育后用 TRPV-1拮抗剂预处理5分钟的芳族醇获得的最大RFU进行比较。用TRPV-1拮抗剂实现的 抑制百分比计算为如下：1〇〇*((芳族醇的最大RFU-用TRPV-1拮抗剂预处理的芳族醇的 最大RFU) /芳族醇的最大RFU)。
[0033]TRPV-1拮抗剂的示例包括抗辣椒碱、（E) -3- (4-叔丁基苯基）-N- (2, 3-二 氢苯并[b] [1，4]二氧杂环己稀-6-基）丙稀酰胺（例如可以AMG9810从Tocris Bioscience(Bristol,UnitedKingdom)商购获得）和 4-叔丁基环己烧（可以SYMSITIVE 1609 从SymriseGmbH(Holzminden,Germany)商购获得）。
[0034] 优选地，TRPV-1拮抗剂为4-叔丁基环乙烷。
[0035]TRPV-1拮抗剂的量在组合物中可改变。根据某些实施例，TRPV-1拮抗剂的量为 按所述组合物的重量计约〇. 05 %至约5%，如约0. 1 %至约2%，如约0. 2 %至约1 %，如约 0. 2%至约 0. 5%。
[0036] 发明人已惊奇地发现TRPV-1拮抗剂如4-叔丁基环己醇在因式1的芳族醇而降 低钙流方面是尤其有效的。因此，相对于组合物中芳族醇的量，可在组合物中使用少量的 TRPV-1拮抗剂。
[0037]例如，在某些实施例中，当使用苯氧乙醇时，组合物中的TRPV-1拮抗剂与芳族醇 的质量比可为约1:24至约1:2. 7,如约1:6至约1:2. 7,如约1:5. 4至约1:2. 7。当使用卞 醇时，组合物中的TRPV-1拮抗剂与芳族醇的质量比可为约1:0. 08至约1:0.9。当使用苯乙 醇时，组合物中的TRPV-1拮抗剂与芳族醇的质量比可为约1:0. 09至约1:3。
[0038] 据信由于SYMSI