一种化疗组合物、其制备方法及其抗乳腺癌应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种化疗组合物、其制备方法及其在乳腺癌治疗中的应用。
【背景技术】
[0002] 乳腺癌是我国女性发病率第二高的恶性癌症，近年来，随着生活压力、不规律饮食 和各种环境因素的影响，乳腺癌的发病率和死亡率均呈现上升趋势，严重威胁着女性尤其 是绝经期附近妇女的健康。化疗作为乳腺癌晚期患者治疗的最主要手段之一，其主要机制 是通过化学药物杀死癌细胞以达到治疗癌症的目的。目前临床常采用低剂量长期服用异环 磷酰胺的方法治疗乳腺癌晚期患者，这种化疗药物具有价格便宜、抗癌效能高等优势。然而 异环磷酰胺与所有的化疗药物一样，既能高效的抑制癌细胞，同时又具有严重的不良反应， 如骨髓抑制等，严重影响着乳腺癌患者的生存生活质量，同时也限制着癌症的进一步治疗。 因此，寻找一种能降低异环磷酰胺毒性且简便的给药方案对乳腺癌患者的治疗具有重大意 义。
[0003] 人参是我国应用历史悠久的传统中药，传统医学认为其具有"补五脏、安精神、定 魂魄、止惊悸、除邪气、明目开心益智"等功效；现代医学证实人参在提高人体免疫等方面具 有其他药物无法比拟的优势，同时化学研究表明人参主要由人参皂苷组分、人参多糖组分、 有机酸及酯类组分、微生素类组分、留醇及其皂苷类组分等组成；我们研究发现人参皂苷组 分、人参多糖组分和异环磷酰胺联合应用可以产生较强的抗乳腺癌活性，同时降低不良反 应；我们研究还发现人参皂苷组分、人参多糖组分和异环磷酰胺按照不同的方式配比，可产 生不同的效果。因此选择一种合适的配比方案可能会产生较好的减毒增效的疗效，从而延 长乳腺癌患者存活时间，改善生活质量。
【发明内容】
[0004] 本发明旨在提供一种化疗组合物、其制备方法及其在抗乳腺癌方面的应用。通过 优化人参皂苷组分、人参多糖组分与异环磷酰胺的配比，最终确定最佳配比方案，使其发挥 较强的抗乳腺癌作用，同时几乎不产生严重的不良反应，使其能够广泛的应用于临床。
[0005] 本发明是通过如下技术方案实现的：
[0006] 本发明的各组分配比为：
[0007] 人参阜苷组分：人参多糖组分：异环磷酰胺=1~10:1~10:1~10。
[0008] 本发明的进一步优化，可以得到以下技术方案：
[0009] 所述的化疗组合物主要由人参皂苷组分、人参多糖组分和异环磷酰胺 (ifosfamide)三部分组成。
[0010] 所述的人参皂苷组分主要由人参皂苷1? (Ginsenoside 1?)、人参皂苷 Rb2(Ginsenoside Rb2)、人参阜昔 Rb3(Ginsenoside Rb3)、人参阜昔 Rc(Ginsenoside Rc)、 人参阜昔 Rd (Ginsenoside Rd)、人参阜昔 Re (Ginsenoside Re)、人参阜昔 Rf (Ginsenoside Rf)、人参阜苷 Rgi(Ginsenoside RgD、人参阜苷 S_Rg2(Ginsenoside S_Rg2)、人参 阜昔 S_Rg3(Ginsenoside S_Rg3)、人参阜昔 S-RhjGinsenoside S-Rhi)、人参阜昔 R-RhjGinsenoside R-Rhi)和人参阜苷 Ro(Ginsenoside Ro)等组成。其中，人参阜苷 1? 占人参皂苷组分的重量约1. 5% -18%;人参皂苷Rb2占人参皂苷组分的重量约2. 0% -9%; 人参皂苷Rc占人参皂苷组分的重量约1. 2% -9% ;人参皂苷Rd占人参皂苷组分的重量 约0. 8% -15% ;人参皂苷组分中人参皂苷Re占人参皂苷组分的重量约3. 2% -18% ;人 参皂苷Rf占人参皂苷组分的重量约4. 3%-12% ;人参皂苷Rgl占人参皂苷组分的重量约 3. 6% -10% ;人参皂苷S-Rg2占人参皂苷组分的重量约1. 4% -8% ;人参皂苷S-Rg3占人参 皂苷组分的重量约0. 05% -7% ;人参皂苷S-Rh占人参皂苷组分的重量约0. 18% -13% ; 人参皂苷R-Rh占人参皂苷组分的重量约0-10% ;人参皂苷Ro占人参皂苷组分的重量约 9% -19%〇
[0011] 所述的人参多糖组分水解后主要由半乳糖醛酸（D-galacturonic acid)、阿拉伯 糖（L-arabinose)、甘露糖（D-mannose)、半乳糖（D-galactose)、葡萄糖（D-glucose)、鼠李 糖（L-rhamnose)和岩藻糖（D-fucose)等多种单糖组成。其中半乳糖醛酸、阿拉伯糖、甘露 糖、半乳糖、葡萄糖、鼠李糖和岩藻糖的摩尔比为：3-10:4-8:1-2:2-6:10-20:1:1-4。
[0012] 更具体地说，本发明的化疗组合物，是指按照以下制备方法得到的组合物：
[0013] 人参皂苷组分的制备：干燥的人参饮片1重量加入3. 5倍水，于100°C煎煮2次， 每次1. 5h，过滤，合并滤液，并浓缩至1. 5倍体积。70%乙醇沉淀浓缩液，除去沉淀，将滤液 干燥，得人参皂苷组分。
[0014] 人参多糖组分的制备：干燥的人参饮片1重量加入3. 5倍水，于100°C煎煮2次， 每次1.5h，过滤，合并滤液，并浓缩至1.5倍体积。70%乙醇沉淀浓缩液，得到沉淀。2倍水 热溶，于4500rpm离心20min。上清液用70%乙醇沉淀。合并沉淀，干燥，得人参多糖组分。
[0015] 将人参皂苷组分、人参多糖组分和异环磷酰胺按药剂学常规制备方法制成常见剂 型，如片剂、胶囊等。
[0016] 采用药理实验考察了该化疗组合物在乳腺癌治疗过程中抗癌活性及不良反应 (骨髓抑制）。
[0017] 1、化疗组合物的制备：根据实施例1、实施例2和实施例3来进行制备，分别得组 合物1、组合物2和组合物3。
[0018] 2、实验动物及肿瘤细胞：动物：96只雌性C57/BL小鼠，6-8周龄，体重18-22g，购 自南京大学模式动物中心。乳腺癌细胞株MCF-7购自中科院上海细胞库，RPMI-1640培养 液培养，常规消化后，RPMI-1640培养液洗涤，计数并调成2. 5X 107/mL浓度。
[0019] 3、分组及造模：雌性C57/BL小鼠96只适应性喂养一周后，随机分成6组，即空白 对照组、空白荷瘤组、异环磷酰胺组、联合组1、联合组2和联合组3。其中后五组于C57/BL 小鼠右前腋皮下注射约5X 106乳腺癌MCF-7细胞，五天后观察癌组织有黄豆大小，表明癌 症模型构建成功。
[0020] 4、给药：①空白对照组，用生理盐水0. 2mL灌胃，连续21d ;②空白荷瘤组，造模成 功后次日用生理盐水0. 2mL灌胃，连续21d ;③异环磷酰胺组，于造模成功后次日用异环磷 酰胺配制成0. 5mg/mL的溶液，以0. 2mL/20g每日灌胃一次，连续21d ;④联合组1，造模成功 后次日用组合物1配制成含异环磷酰胺0. 5mg/mL的溶液，以0. 2mL/20g每日灌胃一次，连 续21天；⑤联合组2,造模成功后次日用组合物2配制成含异环磷酰胺0. 5mg/mL的溶液， 以0. 2mL/20g每日灌胃一次，连续21天；⑥联合组3,造模成功后次日用组合物3配制成含 异环磷酰胺〇. 5mg/mL的溶液，以0. 2mL/20g每日灌胃一次，连续21天。第22天眼眶取血 后得全血，部分用于分离血清，再脱颈处死，分离肿瘤组织、脾、胸腺等，肿瘤组织HE染色后 经病理鉴定。
[0021] 4、小鼠一般状态观测：自接种即开始观察各组小鼠的饮食情况、活动度、毛色、大 便状况等。
[0022] 5、体重：分别于接种后0d、接种后7d、14d、21d (处死前日）逐一称取体重，按分组 作统计学处理。
[0023] 6、瘤重及抑瘤率：将小鼠脱白处死，剥离瘤块，称取瘤重，按下式计算抑瘤率。抑瘤 率[%] = [(对照组平均瘤重-实验组平均瘤重）/对照组平均瘤重]X 100%。
[0024] 7、骨髓抑制效应：全血100 μ L常规检测外周血红细胞、白细胞、血小板数。骨髓有 核细胞计数；剥离股骨，取小鼠完整右侧股骨用3%冰醋酸溶液反复冲洗使骨髓细胞于3% 冰醋酸溶液10mL内，并充分混匀，4号针头过滤分散，显微镜下计数。
[0025] 8、结果
[0026] 8. 1小鼠的一般状况：自接种癌株大约一周左右，空白荷瘤组小鼠明显消瘦，活动 减少，倦卧，喜群聚，眼屎多，眼闭不欲睁，毛松脱明显，皮毛无光泽，四肢发凉，觅食饮水减 少。化疗组小鼠的状况与对照组大体相似，但其饮水量增加，大便干燥。联合组的上述表现 均明显减轻，其中联合组2大便、饮食无明显异常，状况最佳。
[0027] 8. 2各组荷瘤小鼠的体重变化如表1。
[0028] 表1化疗组合物对实验乳腺癌小鼠体重的影响（mean 土 SD，单位g)
[0030] 空白荷瘤组与空白对照组比较*Ρ〈(λ 05, #Ρ〈(λ 01 ;
[0031] 异环磷酰胺组与空白荷瘤组比较#Ρ〈0· 05, ##Ρ〈(λ 01 ;
[0032] 联合组1与空白荷瘤组比较#Ρ〈0. 05, ##Ρ〈0. 01 ;与异环磷酰胺组比较Λ Ρ〈0. 05， ΔΔ Ρ<0. 01 ；
[0033] 联合组2与空白荷瘤组比较#Ρ〈0. 05, ##Ρ〈0. 01 ;与异环磷酰胺组比较Λ Ρ〈0. 05， ΛΛ Ρ〈0· 01 ;与联合组1比较ΧΡ〈0· 05, X ΧΡ〈0· 01 ;与联合组3比较0ρ<〇.〇5;
[0034] 联合组3与空白荷瘤组比较#Ρ〈0. 05, ##Ρ〈0. 01 ;与异环磷酰胺组比较Λ Ρ〈0. 05， ΛΛ Ρ〈0· 01 ;与联合组 1 比较 ΧΡ〈0· 05, X ΧΡ〈0· 01。
[0035] 从上表可以看出，空白荷瘤组、异环磷酰胺组小鼠在接种7日后体重开始明显下 降，14d后达到底谷；联合组1体重下降，但没有