/c小鼠颈椎脱臼法处死，将口腔和四肢钉在解剖板上，喷洒75%的酒精后剪开胸腔，暴露出心肺组织，移除心脏之后取下从喉结至肺部的一整段组织，将取下的组织马上浸泡于 PSS 溶液(NaCl 135mM, KC1 5mM, MgCl2lmM, CaCl22mM, HEPESlOmM, glucose lOmM, pH 7.4)中，然后在转移至胶板上进行进一步修剪。在SZM体视显微镜下用维纳斯剪小心去除气管外周的结缔组织及内腔中的残留血液。
[0038]3、小鼠气道平滑肌的张力检测方法:
[0039]将小鼠气管剪成长约5mm的气管环后与挂钩连接，小心衔接张力换能器后置于内有6mL PSS并持续通氧的37°C的恒温水浴槽中.前负荷调至500mg，开始平衡，平衡期间，每15min换液1次，共换液4次。平衡完毕后使用80mM高钾溶液或100 μ Μ乙酰胆碱(ACh)溶液进行预刺激，充分刺激组织活性后换液洗脱，至恢复至基线，30min后即可开始试验。
[0040]实验结果:
[0041](1)篇蓄水、石油醚、乙酸乙酯及正丁醇部提取物抑制高钾引起气道平滑肌收缩
[0042]如图2a?2d，离体小鼠气管环在80mM高钾溶液中发生稳定持续的预收缩，当分别加入篇蓄各部提取物后，随着加入提取物浓度增加，收缩的气管环张力在石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物添加液中均有下降，在乙酸乙酯提取物(图2c)中下降尤为明显，而水部提取物(由水部干燥获得)中随着篇蓄提取物浓度的增加气管环张力有增加趋势。表明篇蓄乙酸乙酯提取物可有效舒张高钾引起气道平滑肌收缩，且作用呈现剂量依赖性。
[0043](2)篇蓄乙酸乙酯部提取物抑制高钾引起气道平滑肌收缩有效浓度及途径
[0044]结合如图3a?3c，离体小鼠气管环在高钾溶液中溶液中发生稳定持续的预收缩，当加入篇蓄提取物后，随提取物浓度逐渐增加，收缩的气管环张力先升高后下降，该药物作用表现出较好剂量依赖性，当剂量达到0.lmg/mL以上时，气管便显出舒张作用，当乙酸乙酯部提取物浓度添加到0.32mg/ml时，对预收缩的平滑肌的舒张有明显效果，并随浓度增加，对气管环的舒张作用增强，当达到10mg/mL时可使气管完全舒张，并且这种舒张作用可能是通过抑制外I丐内流引起。
[0045]图3a中纵坐标是气管环舒张的百分比，横坐标是添加药物浓度，从该剂量图能看出，对于乙酸乙酯部，当加入药之后曲线会下降，在lmg/ml时就达到最大舒张，当加入3mg/ml时，气管不再舒张，所以将lmg/ml作为有效浓度。
[0046]图3b/3c中，在0钙的条件下，先加有效浓度lmg/ml的药物，再加入80mM/L高钾，最后换成2mM/L的钙的条件下，离体小鼠气管环有部分收缩；而在0钙的条件下，先加入80m/L高钾，再换成2mM/L的钙的条件下，离体小鼠气管环有显著的收缩，随后再加入有效浓度lmg/ml的药物时，离体小鼠气管环能得到很大的舒张。由此可以说明，篇蓄乙酸乙酯提取物能部分抑制外钙的内流。
[0047](3)篇蓄乙酸乙酯部提取物抑制乙酰胆碱引起气道平滑肌收缩
[0048]如图4a?4b，离体小鼠气管环在100 μ M ACh溶液中发生稳定持续的预收缩，当加入篇蓄乙酸乙酯提取物后收缩的气管环张力逐渐下降，随着篇蓄乙酸乙酯提取物浓度的增加气管环张力逐渐恢复为收缩前水平。表明篇蓄乙酸乙酯部提取物可完全舒张ACh引起气道平滑肌收缩，且作用呈现一定剂量依赖性。
[0049]从上述数据可看出，篇蓄乙酸乙酯提取物具有有效的气管平滑肌舒张作用，有望应用于缓解哮喘患者气道阻塞。
[0050]以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。
【主权项】
1.一种篇蓄乙酸乙酯提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)、选取干燥的篇蓄茎叶作为原料，磨成粉末； (2)、将步骤(1)所得粉末以乙醇浸泡并加热回流提取，收集提取液，蒸干，得到提取物； (3)、将步骤(2)所得提取物溶解于水中，用石油醚萃取，分别收集上层石油醚部萃取液和水部溶液，上层石油醚部萃取液蒸干后制得浸膏，即篇蓄石油醚提取物； (4)、将步骤(3)所得的水部溶液用乙酸乙酯萃取，分别收集上层萃取液和下层水相部分，上层萃取液蒸干后制得浸膏，即为篇蓄乙酸乙酯提取物； (5)、将步骤(4)中的下层水相部分继续以正丁醇萃取，收集萃取液并蒸干后制得浸膏，即篇蓄正丁醇提取物。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中粉末以体积浓度为70%的乙醇加热回流提取2?4次，每次提取乙醇的添加量为篇蓄粉末体积的8?12倍。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，每次提取时间为2?3小时。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，提取液还经离心或抽滤处理，去除固体杂质后，收集上层液，然后将上层液蒸干，得到提取物。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤⑶中用石油醚萃取2?5次。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中用乙酸乙酯萃取2?5次。7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(5)中用正丁醇萃取2?5次。8.权利要求1?7任一项所述的制备方法制备得到的篇蓄乙酸乙酯提取物、篇蓄石油醚提取物和篇蓄正丁醇提取物。9.权利要求1?7任一项所述的制备方法制备得到的篇蓄乙酸乙酯提取物在制备治疗支气管哮喘药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种萹蓄乙酸乙酯提取物的制备方法，包括如下步骤：(1)、选取干燥的萹蓄茎叶磨成粉末；(2)、将粉末以乙醇浸泡并加热回流提取，收集提取液，蒸干，得到提取物；(3)、将提取物溶解于水中，用石油醚萃取，分别收集上层石油醚部萃取液和水部溶液，上层石油醚部萃取液蒸干后制得萹蓄石油醚提取物；(4)、将水部溶液用乙酸乙酯萃取，分别收集上层萃取液和下层水相部分，上层萃取液蒸干后制得为萹蓄乙酸乙酯提取物；(5)、将下层水相部分继续以正丁醇萃取，收集萃取液并蒸干后制得浸膏，即萹蓄正丁醇提取物。萹蓄乙酸乙酯提取物具有有效的气管平滑肌舒张作用，有望应用于缓解哮喘患者气道阻塞。
【IPC分类】A61K127/00, A61P29/00, A61K36/704, A61P37/02, A61P11/06, A61K135/00
【公开号】CN105362362
【申请号】CN201510817790
【发明人】刘庆华, 彭勇波, 罗茜
【申请人】中南民族大学
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2015年11月20日