用于使用电子射线来病毒灭活的方法
【专利说明】用于使用电子射线来病毒灭活的方法
[0001] 本发明设及一种用于病毒灭活的方法，其特征在于，利用电子射线来福照含有至 少一种病毒的免疫原成分或疫苗，其中包含至少一种病毒的该免疫原成分或疫苗（i)是一 种液体，尤其是一种悬浮液，并且（ii)包含有至少一种病毒免疫原。
[0002] 在人类医学和兽医中通过采用疫苗可W成功抵御许多传染病。但还是非常需要疫 苗技术，所述疫苗技术有效而持久地防御感染，但在此对于疫苗接种的个体是无风险的。在 制造所谓灭活疫苗时显然的是：对于病毒灭活采用诸如甲醒的有毒化学品，其然后必须通 过耗费的方法再次从疫苗中去除。在兽医中甲醒灭活的疫苗占全部疫苗的大部分，在人类 医学中其比如用于抵御FSME、流感、脊髓灰质炎或A型肝炎。使用甲醒导致病毒抗原的化学 变化（交联）。运又导致疫苗效果下降，运必须通过提高感染原料和增强剂（佐剂）的量来 补偿。避开该问题的技术明显不满足疫苗工业的要求。 阳003] 研究得知，甲醒破坏了对疫苗接种成功重要的抗原直至30% -80% (Amanna等，自 然医学2012年第18期）。该问题是疫苗工业所已知的，并且人们在寻找替代方案。从而 用UV射线、提高溫度、伽马射线或过氧化物来试验。但目前为止该技术还停留在实验室试 验阶段。
[0004] 另外已公开的是，采用高能电子射线可W降低沙口氏菌群体扣S8, 173, 139B1)。 但其没有阐述抗原的结构受损到什么程度。另外沙口氏菌是具有自身新陈代谢的生物。把 电子射线应用于除了其宿主细胞还不具有自身新陈代谢的病毒从而还不能被接受。 阳0化]本发明现在令人惊讶地发现，利用电子射线可W灭活病毒，而在此不破坏病毒结 构蛋白。从而利用电子射线进行福照令人惊讶地尤其适于制造病毒灭活的全颗粒疫苗。
[0006] 病毒的灭活想必通过破坏核酸来进行，其中病毒结构W及尤其抗原结构不会或者 几乎不会受损。在例1和2化及图1至3中示出了比如猪致病PRRSV病毒的结果。在此用 电子射线来处理该病毒在缓冲水溶液中的液体、也即悬浮液。该悬浮液具有免疫性的，并适 于作为抵御猪PRRSV的疫苗。
[0007] 在例3和图4和5中示出了A型流感病毒的结果。用电子射线来处理该病毒在缓 冲水溶液中的液体、也即悬浮液。该悬浮液具有免疫性，并适于作为抵御A型流感的疫苗。
[0008] 在一种实施方式中，本发明设及一种用于病毒灭活的方法，其特征在于，利用电子 射线来福照包含至少一种病毒的免疫原成分或疫苗，其中包含至少一种病毒的该免疫原成 分或疫苗（i)是一种液体，尤其是一种悬浮液，并且（ii)包含有至少一种病毒免疫原。
[0009] 在一种优选的实施方式中，所述至少一种病毒在福照之前是有活性的，和/或该 免疫原成分或疫苗包含一些活性病毒。在对液态成分或疫苗进行福照之前活性病毒的浓度 按照每毫升液体的TCID50值（50%组织培养物感染剂量）来测量而尤其为每毫升至少104、 1〇5、或1〇6。
[0010] 在另一实施方式中，本发明设及一种用于病毒灭活的方法，其特征在于，利用电子 射线来福照包含有至少一种病毒的一种成分，其中包含至少一种病毒的该成分（i)是一种 液体，尤其是一种悬浮液，和/或（ii)是免疫原成分。
[0011] 该方法可W应用于任意的病毒，尤其包膜病毒或无包膜病毒。
[0012] 在一种优选的实施方式中，其对于包膜病毒是合适的，因为包膜蛋白是接种反应 的合适抗原。利用本发明的方法仍然获得该抗原构造，而病毒本身被灭活（见图1、2和3)。 从而利用本发明的方法令人惊讶地尤其能够制造用于包膜病毒的病毒灭活的全颗粒疫苗。
[0013] 在另一优选的实施方式中，可W制造无包膜病毒的病毒灭活的全颗粒疫苗。在无 包膜病毒中接种反应的合适抗原尤其是该病毒的衣壳蛋白。
[0014] W下病毒比如可W根据本发明来进行福照： 阳〇1引包膜病毒，比如：
[0016] 双链DNA病毒，比如：
[0017] 天花病毒（引起天花）；
[0018] 瘤疹病毒（比如单纯瘤疹化SV)(引起口唇瘤疹或生殖器瘤疹）；水痘带状瘤
[0019] 疹病毒（VZV)(引起水痘和带状瘤疹）
[0020] 爱泼斯坦-己尔病毒巧BV)(引起普费弗腺热）
[0021] 巨细胞病毒（CMV)(引起巨细胞病毒病）
[0022] 人类瘤疹病毒67型（引起Ξ天发烧）
[0023] 人类瘤疹病毒8型（HHV8)(引起卡波西肉瘤）
[0024] 嗜肝DNA病毒，比如：
[0025] B型肝炎病毒（引起B型肝炎）
[00%] 正链RNA病毒，比如：
[0027] 黄病毒，比如： 阳〇2引C型肝炎病毒（引起C型肝炎）
[0029] 披膜病毒，比如：
[0030] 风疹病毒（引起风疹） 阳0川冠状病毒（引起肠胃炎症，SARS) 阳0巧 负链RNA病毒，比如：
[0033] 正粘病毒，比如：
[0034] A、B、或C型流感病毒（引起流感） 阳0对 负粘病毒，比如：
[0036] 副流感病毒（引起副流感）
[0037] 麻疹病毒（引起麻疹） 阳〇3引腮腺炎病毒（引起腮腺炎）
[0039] 呼吸道合胞病毒巧SV) W40] 肺病毒，比如属：肺病毒、偏肺病毒
[0041] 弹状病毒，比如：
[0042] 狂犬病毒（引起狂犬病）
[0043] 逆转录酶病毒，比如：
[0044] 人类免疫缺陷病毒（引起AID巧
[0045] HTLV(引起白血病）
[0046] 无包膜病毒，比如：
[0047] 双链DNA病毒，比如： 柳4引腺病毒（引起鼻炎性感冒） W例乳多空病毒（引起痛）
[0050] 单链DNA病毒，比如： 阳05U 细小病毒，比如：
[0052]B19细小病毒（引起第五病） 阳05引 双链RNA病毒，比如：
[0054] 轮状病毒（腹泻）
[005引 正链RNA病毒，比如：
[0056] 小核糖核酸病毒，比如：
[0057] 脊髓灰质炎病毒（引起脊髓灰质炎）
[0058] 柯萨奇病毒
[0059] 埃可病毒
[0060] A型肝炎病毒（引起A型肝炎）
[0061] 鼻病毒（引起鼻炎性感冒）
[0062] 杯状病毒（引起腹泻）
[0063] 在一种优选的实施方式中，所述至少一种病毒从而由W下来选择：
[0064] (i)包膜病毒或无包膜病毒，尤其是包膜病毒，和/或 阳0化](ii)双链DNA病毒、双链RNA病毒、单链RNA病毒，或单链DNA病毒，和/或
[0066] (iii)人类致病病毒和/或动物致病病毒。
[0067] 在一种优选的实施方式中，所述动物是哺乳动物，尤其从猪、牛、马、狗、猫和羊中 来选择。
[0068] 在一种极其优选的实施方式中，所述至少一种病毒从人类致病的和/或动物致病 的包膜双链RNA病毒、包膜负单链RNA病毒、或包膜正单链RNA病毒中来选择。
[0069] 在该例子中示出：PRRS病毒（porcinerespiratoryandr巧roductivefailure syiKlromevirus,猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒）、感染猪的来自动脉炎病毒科属的单正链 RNA病毒利用本发明的方法如此被灭活，使得病毒结构和抗原结构很大程度上被保留。从而 能够制造对抗PRRS病毒的灭活病毒全颗粒疫苗。
[0070] 在又一极其优选的实施方式中，所述至少一种病毒从人类致病的和/或动物致病 的正单链RNA病毒中来选择，特别优选的是从动脉炎病毒科属的病毒中来选择，更优选的 是所述至少一种病毒是猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒（PRRS病毒）。
[0071] 在另一优选的实施方式中，所述至少一种病毒从埃可病毒、H1病毒、轮状病毒、伪 狂犬病毒、细小病毒、猪细小病毒、册N1病毒、H1N1病毒、爱泼斯坦-己尔病毒、腮腺炎病毒、 A和B型流感病毒、FSME病毒、IPV病毒和A型肝炎病毒中来选择。
[0072] 在另一优选的实施方式中，所述至少一种病毒从动物致病病毒、A和B型流感病 毒、FSME病毒、IPV病毒和A型肝炎病毒中来选择。尤其优选的是A和B型流感病毒。
[0073] 利用本发明的方法，可W对含有一种（1)病毒的免疫原成分或疫苗进行福照，如 在该例子中用PRRSV所示。但是该免疫原成分或疫苗也可化含有2、3、4、5、6、7、8、9、10种 或更多种不同的病毒。运比如可W有助于制造联合疫苗。所述两种或多种不同的病毒可W 是相同病毒种的变种，或者不同种、科或属的病毒。因此，在一种优选的实施方式中，所述免 疫原成分或疫苗包含（i) 一种病毒或（ii)两种或多种不同病毒。但也可W制造一种联合 疫苗，其中两种或多种病毒被单独地福照，并在福照之后才被组合。
[0074] 在该例子中，利用加速为小于300KeV、比如150KeV的电子来福照PRRSV病毒的悬 浮液（见图1至5)。运些电子是低能加速的。
[00巧]在一种优选的实施方式中，根据本发明的方法其特征在于，电子射线被低能或 中能地加速，优选W在150keV和700keV之间的加速能被加速，更优选地W在200keV和 500keV之间的加速能被加速，还更优选地在250keV和400keV之间被加速。
[0076] 在此可W在常压下、或者基本在常压大气下来处理，并从而电子射线可W优选地 基本在常压大气下来实施。基本常压大气可理解为1己+/-〇. 1己。所述常压大气在此比 如可W作为大气中的氧气、氮气或二氧化碳气体而存在。 阳077] 如在该例子中所示，该PRRSV病毒可W采用50kGy、lOOkGy或200kGy的剂量而被 灭活。另外可W示出，用200kGy剂量在悬浮液中该A型流感病毒被完全灭活。
[0078] 已发现，至少50kGy的剂量有利于达到病毒尽可能完全的灭活。
[0079] 在一种优选的实施方式中，根据本发明的方法从而其特征在于，含有至少一种病 毒的该免疫原成分或疫苗W至少50kGy、至少60kGy、至少70kGy、至少80kGy、至少90kGy、至 少lOOkGy、至少llOkGy、至少 120kGy、至少 130kGy、至少 140kGy、至少 150kGy、至少leOkGy、 至少170kGy、至少ISOkGy、至少190kGy、至少200kGy或至少250kGy的电子射线剂量被福 照。
[0080] 另外还发现，300kGy或更少的剂量有利于避免对成分的可能破坏。