注射用益气复脉冻干粉针剂指纹图谱检测方法和制剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药现代化领域，设及一种注射用益气复脉冻干粉针剂指纹图谱检测 方法和制剂。
【背景技术】
[0002] 注射用益气复脉冻干粉针剂，是W红参、麦冬和五味子为原料制成的注射用粉针 剂，具有益气复脉，养阴生津之功效，临床用于冠屯、病劳累型屯、绞痛气阴两虚证，症见胸搏 屯、痛，屯、惇气短、倦怠懒言、头晕目眩、面色少华、舌淡、少苔或剥苔，脉细弱或结代；冠屯、病 所致慢性左屯、功能不全n、m级气阴两虚证，症见屯、惇、气短甚则气急喘促，胸闷隐痛，时作 时止，倦怠乏力，面色苍白，动则汗出，舌淡、少苔或剥苔，脉细弱或结代。
[0003] 现有的注射用益气复脉冻干粉针剂存在诸多需要改进、提高的地方，例如质量控 制检测谅方法、产品制备方法等。因此提供用于该产品质量控制的新方法、W及制备该产品 的方法是有益的，也是本领域技术人员一直在努力的。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种用于注射用益气复脉冻干粉针剂质量控制的新方法、 W及制备该产品的方法。
[0005] 本发明是照如下方式实现的：
[0006] 在本发明第一方面，提供的是一种冷冻干燥粉针剂(其亦可称为注射用益气复脉 或注射用益气复脉(冻干)或注射用益气复脉冻干粉针剂或注射用益气复脉冷冻干燥粉针 剂）的质量控制方法，所述冷冻干燥粉针剂每1000瓶由药材红参500g、麦冬1500g、五味子 750g制备得到，该质量控制方法包括对所述制剂进行指纹图谱测定。
[0007] 根据本发明第一方面的质量控制方法，所述指纹图谱测定包括如下操作：
[000引（1)照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录36页"附录VID高效液相色谱法" 所载方法测定，或者照《中华人民共和国药典》2015年版四部第59页"0512高效液相色谱法" 所载方法测定，W十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（例如，使用WatersS>mmclr>RC18柱，柱 长为25cm，内径为4.6mm，粒径为扣m); W乙腊为流动相A，WO . 05 %憐酸溶液为流动相B，按 下表中的规定进行梯度洗脱;柱溫为30°C;检测波长为203nm;理论板数按人参皂巧Rgl峰计 算应不低于20000;
[0010] (2)参照物溶液的制备：取人参皂巧肺I对照品、五味子醇甲对照品适量，精密称 定，分别加甲醇制成每1ml含0.5mg人参皂巧Rbl和0.03mg五味子醇甲的溶液，即得；
[0011] (3)对照提取物溶液的制备:取注射用益气复脉冻干粉针随行对照提取物1.3g，精 密称定，加30%甲醇溶液IOml使溶解，通过ProElut?化S SPE柱（500mg/6ml，预先依次用 0.5mol/L氨氧化钢溶液、O.lmol/L盐酸溶液各IOml洗脱，然后用水洗至洗脱液呈中性，再依 次用甲醇、30%甲醇各IOml洗脱，备用），流速约每分钟1ml，弃去流出液，再依次用含 0.5mol/L的氨氧化钢的30%甲醇溶液2ml、30 %甲醇溶液5ml洗脱，弃去流出液，最后用甲醇 洗脱，收集甲醇洗脱液至5ml量瓶中至近刻度，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即 得；
[0012] (4)供试品溶液的制备:取待测定的冷冻干燥粉针剂的内容物1.3g，精密称定，按 对照提取物溶液的制备方法同法操作，即得；
[0013] (5)测定法:分别精密吸取参照物溶液lOiil、对照提取物溶液及供试品溶液各20y 1，注入液相色谱仪，测定，记录8~70分钟W内的色谱图，即得；
[0014] (6)采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统，先由2份对照提取物溶液生成对照指 纹图谱，供试品指纹图谱与对照指纹图谱经中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算其相似 度。一般地讲，本发明冷冻干燥粉针剂与对照指纹图谱的相似度大于0.88。
[0015] 根据本发明第一方面的质量控制方法，所述注射用益气复脉冻干粉针随行对照提 取物可W从市售取得，亦可由如下方法制备：
[0016] (a)红参500g用乙醇回流提取S次，第一、二次分别为3小时，第S次2小时，合并提 取液，减压回收乙醇至无醇味，加水至约500ml，冷置，分离除去上层油，水层滤过，滤液减压 浓缩后，70°C W下减压干燥，得红参提取物；
[0017] (b)麦冬1500g、五味子750g分别加水煎煮立次，第一次1小时，第二次45分钟，第立 次30分钟，合并各自提取液，分别减压浓缩至相对密度为1.15~1.20 (50°C)(麦冬）、1.16~ 1.21(50°C)(五味子），各加乙醇至含醇量为75%，放置，滤过，滤液分别减压浓缩至相对密 度为1.25~1.30 (50°C)(麦冬）、1.18~1.23 (50°C)(五味子），分别再加乙醇至含醇量为 85 %，放置，滤过，加氨氧化钢溶液调节pH值分别为9(麦冬）、7(五味子），放置，滤过，麦冬滤 液加稀盐酸调pH值为6.5~7.0,滤液分别减压回收乙醇后，70°CW下减压干燥，得麦冬、五 味子提取物；
[001引（C)红参提取物加注射用水500ml溶解，滤过，滤液加适量活性炭，加热煮沸5分钟， 滤过，滤液加氨氧化钢溶液调pH值为6.5~7.0;
[0019] (d)麦冬、五味子提取物分别加注射用水750ml、500ml溶解，滤过，滤液用氨氧化钢 溶液调节抑值为6.5~7.0;
[0020] (e)合并上述(C)和(d)的S种溶液，加入葡甲胺适量，于100°C加热1小时，冷置，滤 过，滤液加甘露醇适量，揽拌，溶解，加注射用水至总体积，调抑值为6.0~7.0, W微孔滤膜 (0.22皿)滤过，灌装，冷冻干燥，制成1000 瓶，即得。
[0021] 根据本发明第一方面的质量控制方法，所述冷冻干燥粉针剂是由如下方法制备得 到的：
[0022] (a)红参500g用乙醇回流提取S次，第一、二次分别为3小时，第S次2小时，合并提 取液，减压回收乙醇至无醇味，加水至约500ml，冷置，分离除去上层油，水层滤过，滤液减压 浓缩后，70°C W下减压干燥，得红参提取物；
[0023] (b)麦冬1500g、五味子750g分别加水煎煮S次，第一次1小时，第二次45分钟，第S 次30分钟，合并各自提取液，分别减压浓缩至相对密度为1.15~1.20 (50°C)(麦冬）、1.16~ 1.21(50°C)(五味子），各加乙醇至含醇量为75%，放置，滤过，滤液分别减压浓缩至相对密 度为1.25~1.30 (50°C)(麦冬）、1.18~1.23 (50°C)(五味子），分别再加乙醇至含醇量为 85 %，放置，滤过，加氨氧化钢溶液调节pH值分别为9(麦冬）、7(五味子），放置，滤过，麦冬滤 液加稀盐酸调pH值为6.5~7.0,滤液分别减压回收乙醇后，70°CW下减压干燥，得麦冬、五 味子提取物；
[0024] (C)红参提取物加注射用水500ml溶解，滤过，滤液加适量活性炭，加热煮沸5分钟， 滤过，滤液加氨氧化钢溶液调pH值为6.5~7.0;
[0025] (d)麦冬、五味子提取物分别加注射用水750ml、500ml溶解，滤过，滤液用氨氧化钢 溶液调节抑值为6.5~7.0;
[00%] (e)合并上述(C)和(d)的S种溶液，加入葡甲胺适量，于100°C加热1小时，冷置，滤 过，滤液加甘露醇适量，揽拌，溶解，加注射用水至总体积，调抑值为6.0~7.0, W微孔滤膜 (0.22皿)滤过，灌装，冷冻干燥，制成1000瓶，即得。
[0027] 根据本发明第一方面的质量控制方法，其还包括对所述冷冻干燥粉针剂进行多糖 的含量测定。
[0028] 根据本发明第一方面的质量控制方法，所述多糖的含量测定包括如下步骤：
[0029] (1)对照品溶液的制备：取无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含 0.1 mg的溶液，摇匀，即得；
[0030] (2)标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，分 别置IOml具塞试管中，依次加水使成I .Oml，各加5%苯酪溶液I .Oml，混匀，沿管壁缓慢加高 纯硫酸5.Oml,迅速摇匀，置沸水浴中，加热10分钟，立即置冰浴中冷却10分钟，取出，室溫放 置10分钟，W相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(例如，可照中国药典2010年版一 部附录VA所载方法;或者可照照《中华人民共和国药典》2015年版四部"0401紫外-可见分 光光度法"所载方法)试验，在490nm波长处测定吸光度，W吸光度为纵坐标，浓度为横坐标 绘制标准曲线；
[0031] (3)测定法：取冷冻干燥粉针剂内容物约1.3g，精密称定，加0 . Imol/L硫酸溶液 IOml使溶解，通过预先处理好的AB-8型大孔吸附树脂柱(80~100目，内径8mm，柱高为5cm， 用0.1mol/L硫酸溶液处理），收集流出液置100mL量瓶中，用0.1mol/L硫酸溶液50ml洗脱(树 脂柱备用），洗脱液置同一量瓶中，加水至刻度，摇匀;精密量取5ml，置100mL量瓶中，加水至 刻度，摇匀;精密量取0.4ml，置IOml具塞试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自"加水使 成1.Omr起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中相当于无水葡萄糖的量，计 算，即得；
[0032] 通常而言，本发明冷冻干燥粉针剂每瓶含多糖W无水葡萄糖（C6H1206)计多于 0.1 Ogo
[0033] 根据本发明第一方面的质量控制方法，其还包括对所述冷冻干燥粉针剂进行红参 的含量测定。
[0034] 根据本发明第一方面的质量控制方法，所述红参的含量测定包括如下步骤：
[0035] (1)照《中华人民共和国药典》2010年版一部附录36页"附录VID高效液相色谱法" 所载方法测定，或者照《中华人民共和国药典》2015年版四部第59页"0512高效液相色谱法" 所载方法测定，W十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；W乙腊为流动相A，0.05 %憐酸为流动 相B，按下表中的方法进行梯度洗脱;柱溫30°C;检测波长为203nm;理论板数W人参皂巧Rgl 色谱峰计算应不低于30000,所测成分与其他成分色谱峰的分离度应符合规定；
[0038] (2)对照品溶液的制备：取人参皂巧Rgl、人参皂巧Re和人参皂巧Rbl对照品适量， 精密称定，加甲醇制成每1ml含0.2mg人参皂巧Rgl、0.2mg人参皂巧Re和0.5mg人参皂巧Rbl 的混合溶液，即得；
[0039] (3)供试品溶液的制备:取所述冷冻干燥粉针剂内容物约1.3g，精密称定，加30 % 甲醇IOml使溶解，通过预先处理好的ProElut?PLS S阳柱巧00mg/6ml，预先依次用0.5mol/L 氨氧化钢溶液、O.lmol/L盐酸溶液各IOml洗脱，然后用水洗至洗脱液呈中性，再依次用甲 醇、30%甲醇各IOml洗脱，备用），流速约每分钟Iml，弃去流出液，再依次用含0.5mol/L的氨 氧化钢的30%甲醇溶液2ml、30%甲醇5ml洗脱，弃去洗脱液，最后用甲醇洗脱，收集甲醇洗 脱液至5ml量瓶中至近刻度，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
[0040] (4)测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20iU，注入液相色谱仪，测 定，即得。
[0041] 通常而言，本发明冷冻干燥粉针剂每瓶含红参W人参皂巧Rgl (C42H72014)和人参 皂巧Re(C4細82018)的总量计，不少于0.3mg;