具有抗微生物活性的细菌菌株以及包含所述菌株的生物控制组合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本披露整体设及具有抗微生物活性的细菌菌株及其作为生物控制剂的用途。还提 供了包含所述细菌菌株的生物控制组合物，具体地用于抑制微生物植物病原体。
【背景技术】
[0002] 所有植物易受微生物如细菌和真菌的侵袭。就果实、蔬菜W及农业和园艺作物而 言，微生物病原体W及由它们造成的病害能够导致显著的作物损害、产量损失W及收获前 后的经济损失。由微生物病原体造成的病害还能够导致农产品的存放期的减少，并且导致 消费者的消费成本更高。
[0003] 许多真菌是已知的引起许多危害或破坏世界范围作物的病害的植物病原体。大多 数植物病原真菌是子囊菌(日3。01117。日1日3)(包括镶抱属物种巧113日1'；[11111399.)、根串珠霉属 物种（Thielaviopsis spp.)、葡萄抱属物种（Botrytis spp.)、轮枝抱属物种 (Verticillium spp.)W 及稻攝病菌属物种（Magnaporthe spp.))和担子菌 (basidiomycetes)(包括丝核菌属物种（Rhizoctonia spp .)、柄诱菌属物种（Puccinia spp.) W及蜜环菌属物种(ArmiIlaria spp.))。特别关注的是镶抱属的真菌，广泛分布在± 壤中的丝状真菌。例如，数种镶抱菌物种如尖抱镶抱菌使植物包括番茄、甜瓜、姜、香蕉W及 豆类感染萎黨病(镶抱菌萎黨病），从而导致如维管萎黨病、黑斑症、叶片过早掉落W及生长 迟缓的症状。若干镶抱属物种造成马铃馨的镶抱菌干腐病(Fusarium化y rot)。镶抱菌干腐 病在马铃馨中无论是在大田中还是在胆藏中都是一个经济上的重要问题，并且是收获后马 铃馨损失的主要原因之一。在香蕉中，镶抱菌是具有高度破坏性的己拿马病的致病原。种植 园一旦被感染，就不能治愈。尖抱镶抱菌是一种不完全型无性真菌（imperfect asexual 化ngus)，其借助W下S种类型的抱子传播:小分生抱子、大分生抱子、W及厚垣抱子类。因 为厚垣抱子类能够保持休眠并且感染±壤多年，所W-旦尖抱镶抱菌定植在±壤中，就知 道极难根除。由于杀真菌剂的无效性，目前仅可使用的应对是±壤消毒，运不是成本有效 的。
[0004] 植物病原性细菌也对植物造成许多损害性的和经济上显著的病害。例子包括W下 各项的物种：欧文氏菌属化rwinia)、果胶杆菌属（Pectobacterium)、泛菌属（Pantoea)、农 杆菌属（Agrobacterium)、假单抱菌属（Pseudomonas)、罗尔斯通氏菌属（Ralstonia)、伯克 霍尔德氏菌属（Burldiolderia)、食酸菌属(Acidovorax)、黄单胞菌属（Xanthomonas)、棒形 杆菌属（Clavibacter)、链霉菌属（Strep tomyces)、木杆菌属（Xy Iel la)、螺原体属 (Spiroplasma) W及植原体属(Phytoplasma)。植物病原性细菌造成一系列症状，包括菌瘦 和过度生长、萎黨病、叶斑病、斑枯病、软腐病W及疮挪病和溃瘍病。
[000引马铃馨疮挪病是感染马铃馨块茎W及其他根作物如小红萝h甜菜、胡萝hW及欧 洲防风草的一种病害。它在块茎表面造成难看的枯斑损伤，从而导致巨大的经济损失。主要 的致病病原体是发现于世界范围的马铃馨生长区的±壤中的疮挪病链霉菌(Sheptomyces scabies),-种在大多数固体介质上产生灰色菌丝的革兰氏阳性、需氧的丝状细菌。运些营 养丝状体断开W便形成抱子，运些抱子使得细菌能够存活很长一段时间并且通过水、风和 上壤传播。它能够依靠腐烂的植物材料存活W及通过动物消化道存活而在上壤中存活很长 一段时间、甚至数年。已经使用各种方法来降低病害严重性，然而，目前不可获得对马铃馨 疮挪病的有效控制。
[0006] 施用于植物W抵抗病原微生物并治疗或预防由此类病原体造成的病害的杀真菌 剂和其他杀虫剂典型地本质上是化学性的(通常是合成的和非天然存在的）。运些杀真菌剂 和杀虫剂可能制造昂贵，并且带来不希望的副作用，包括对动物的毒性和环境问题。对开发 替代方法有明确且持续的需要。生物控制剂和组合物是一种具有吸引力的替代物，它更安 全、更加能够生物降解，并且开发成本更低。 本披露的概述
[0007] 本披露的一个第一方面提供一种用于治疗或预防一种微生物病原体对一种受试 者的感染的方法，该方法包括向该受试者给予、或W其他方式将该受试者暴露于一个有效 量的一种组合物，该组合物包含选自帕氏乳酸杆菌(Xactobaci 1 Ius parafarraginis)、布 赫纳氏乳酸杆菌(Xactobacillus buchneri)、瑞氏乳酸杆菌(Xactobacillus rapi) W及玉 米乳酸杆菌化actobacillus zeae)的乳酸杆菌的至少一种菌株，或源自其中已培养所述菌 株的培养基的培养上清液或无细胞滤液。
[0008] -个第二方面提供一种用于在一种受试者中治疗或预防由一种微生物病原体造 成、或与该微生物病原体相关联的一种病害的方法，该方法包括向该受试者给予、或W其他 方式将该受试者暴露于一个有效量的一种组合物，该组合物包含选自帕氏乳酸杆菌、布赫 纳氏乳酸杆菌、瑞氏乳酸杆菌W及玉米乳酸杆菌的乳酸杆菌的至少一种菌株，或源自其中 已培养所述菌株的培养基的培养上清液或无细胞滤液。
[0009] 根据W上方面，将受试者暴露于组合物可包括直接或间接地将受试者暴露于组合 物。作为举例，在受试者为一种植物的情况下，可通过将该组合物施用于该植物的一部分、 或该植物生长或待种植的±壤中来将该植物暴露于该组合物。另外作为举例，在受试者为 一种动物的情况下，可通过将该组合物施用于在其上饲养该动物的牧场或其他草地(或牧 场或其他草地在其上生长的±壤)来将该动物暴露于该组合物。
[0010] 该方法可进一步包括向该受试者给予、或W其他方式将该受试者暴露于有效量的 一种或多种抗微生物剂。
[0011] -个第=方面提供一种用于抑制一种微生物的生长的方法，该方法包括将该微生 物、或被该微生物定居的或能够被该微生物定居的一种环境暴露于一个有效量的一种组合 物，该组合物包含选自帕氏乳酸杆菌、布赫纳氏乳酸杆菌、瑞氏乳酸杆菌W及玉米乳酸杆菌 的乳酸杆菌的至少一种菌株，或源自其中已培养所述菌株的培养基的培养上清液或无细胞 滤液。
[0012] 在示例性实施例中，该受试者是一种植物。在另外的示例性实施例中，该受试者是 一种植物，并且该环境是±壤、植物根和/或植物叶。可在该植物的种植之前、种植时或种植 之后使用该组合物处理±壤。类似地，可在该植物的种植之前、种植时或种植之后使用该组 合物处理植物根。
[0013] 该方法可包括使用该组合物对该环境或该受试者进行一次处理或多次处理。
[0014] 该方法可进一步包括将该微生物暴露于一个有效量的一种或多种抗微生物剂。
[0015] -个第四方面提供一种用于治疗或预防一种微生物病原体对一种受试者的感染 的生物控制组合物，该组合物包含选自帕氏乳酸杆菌、布赫纳氏乳酸杆菌、瑞氏乳酸杆菌W 及玉米乳酸杆菌的乳酸杆菌的至少一种菌株，或源自其中已培养所述菌株的培养基的培养 上清液或无细胞滤液。
[0016] -个第五方面提供一种用于在一种受试者中治疗或预防由一种微生物病原体对 该受试者的感染造成的、或与该感染相关联的一种病害的生物控制组合物，该组合物包含 选自帕氏乳酸杆菌、布赫纳氏乳酸杆菌、瑞氏乳酸杆菌W及玉米乳酸杆菌的乳酸杆菌的至 少一种菌株，或源自其中已培养所述菌株的培养基的培养上清液或无细胞滤液。
[0017] -个第六方面提供一种用于抑制一种微生物的生长的组合物，该组合物包含选自 帕氏乳酸杆菌、布赫纳氏乳酸杆菌、瑞氏乳酸杆菌W及玉米乳酸杆菌的乳酸杆菌的至少一 种菌株，或源自其中已培养所述菌株的培养基的培养上清液或无细胞滤液。
[0018] 可替代地，或除了在W上方面中所描述的组合物的组分之外，在此披露的组合物 可包含于2012年12月14日W检索号V12/022847保藏在澳大利亚国家计量研究院(化tional Measurement Institute ,Australia)的迪氏乳酉《杆菌（Lactobaci 1 Ius dioIivorans) (N3)、于2012年12月14日W检索号V12/022848保藏在澳大利亚国家计量研究院的帕氏乳酸 杆菌(Nil)、于2012年12月14日W检索号V12/022851保藏在澳大利亚国家计量研究院的短 乳酸杆菌（Lactobacillus brevis) (TD)、类干酪乳酸杆菌(XactobaciIlus paracasei)、于 2012年12月14日W检索号V12/022849保藏在澳大利亚国家计量研究院的命名为'T9'的菌 株、干酪乳酸杆菌化actobacillus casei)W及于2012年12月14日W检索号V12/022850保 藏在澳大利亚国家计量研究院的在此命名为'TB'的菌株的一种或多种菌株;或源自其中已 经培养运些菌株中的一种或多种的培养基的培养上清液或无细胞滤液。
[0019] 在此还提供乳酸杆菌的一种或多种菌株用于制造一种用于治疗或预防一种微生 物病原体对一种受试者的感染的组合物的用途，其中运些乳酸杆菌选自帕氏乳酸杆菌、布 赫纳氏乳酸杆菌、瑞氏乳酸杆菌W及玉米乳酸杆菌。
[0020] 在此还提供乳酸杆菌的一种或多种菌株用于制造一种用于在一种受试者中治疗 或预防由一种微生物病原体对该受试者的感染造成的、或与该感染相关联的一种病害的组 合物的用途，其中运些乳酸杆菌选自帕氏乳酸杆菌、布赫纳氏乳酸杆菌、瑞氏乳酸杆菌W及 玉米乳酸杆菌。
[0021] 在此还提供乳酸杆菌的一种或多种菌株用于制造一种用于抑制一种微生物的生 长的组合物的用途，其中运些乳酸杆菌选自帕氏乳酸杆菌、布赫纳氏乳酸杆菌、瑞氏乳酸杆 菌W及玉米乳酸杆菌。
[0022] 在此还提供乳酸杆菌的一种或多种菌株用于制造一种用于治疗或预防一种微生 物病原体对一种受试者的感染的组合物的用途，其中运些乳酸杆菌选自帕氏乳酸杆菌、布 赫纳氏乳酸杆菌、瑞氏乳酸杆菌、玉米乳酸杆菌、类干酪乳酸杆菌、于2012年12月14日W检 索号V12/022849保藏在澳大利亚国家计量研究院的在此命名为'T9'的菌株、干酪乳酸杆菌 W及于2012年12月14日W检索号V12/022850保藏在澳大利亚家计量研究院的在此命名为 'TB'的菌株。
[0023] 在此还提供乳酸杆菌的一种或多种菌株用于制造一种用于在一种受试者中治疗 或预防由一种微生物病原体对该受试者的感染造成的、或与该感染相关联的一种病害的组 合物的用途，其中运些乳酸杆菌选自帕氏乳酸杆菌、布赫纳氏乳酸杆菌、瑞氏乳酸杆菌、玉 米乳酸杆菌、类干酪乳酸杆菌、于2012年12月14日W检索号V12/022849保藏在澳大利亚国 家计量研究院的在此命名为'T9'的菌株、干酪乳酸杆菌W及于2012年12月14日W检索号 V12/022850保藏在澳大利亚家计量研究院的在此命名为'TB'的菌株。
[0024] 在此还提供乳酸杆菌的一种或多种菌株用于制造一种用于抑制一种微生物的生 长的组合物的用途，其中运些乳酸杆菌选自帕氏乳酸杆菌、布赫纳氏乳酸杆菌、瑞氏乳酸杆 菌、玉米乳酸杆菌、类干酪乳酸杆菌、于2012年12月14日W检索号V12/022849保藏在澳大利 亚国家计量研究院的在此命名为'T9'的菌株、干酪乳酸杆菌、W及于2012年12月14日W检 索号V12/022850保藏在澳大利亚家计量研究院的在此命名为'TB'的菌株。
[0025] 在此还提供W下菌株中的一种或多种用于制造一种用于治疗或预防一种微生物 病原体对一种受试者的感染、用于在一种受试者中治疗或预防由一种微生物病原体对该受 试者的感染造成的、或与该感染相关联的一种病害、或用于抑制一种微生物的生长的组合 物的用途:于2012年12月14日W检索号V12/022847保藏在澳大利亚国家计量研究院的迪氏 乳酸杆菌(N3)、于2012年12月14日W检索号V12/022848保藏在澳大利亚国家计量研究院的 帕氏乳酸杆菌(Nil)、于2012年12月14日W检索号V12/022851保藏在澳大利亚国家计量研 究院的短乳酸杆菌(TD)、类干酪乳酸杆菌、于2012年12月14日W检索号V12/022849保藏在 澳大利亚国家计量研究院的在此命名为'T9'的菌株、干酪乳酸杆菌、W及于2012年12月14 日W检索号V12/022850保藏在澳大利亚家计量研究院的在此命名为'TB'的菌株。
[0026] W下披露设及所有的W上运些方面和实施例。
[0027] 帕氏乳酸杆菌菌株可W是帕氏乳酸杆菌Lpl8。在一个具体的实施例中，该帕氏乳 酸杆菌菌株是于2011年10月27日W检索号V11/022945保藏在澳大利亚国家计量研究院的 帕氏乳酸杆菌LplS。
[0028] 布赫纳氏乳酸杆菌菌株可W是布赫纳氏乳酸杆菌化23。在一个具体的实施例中， 该布赫纳氏乳酸杆菌菌株是于2011年10月27日W检索号V11/022946保藏在澳大利亚国家 计量研究院的布赫纳氏乳酸杆菌化23。
[0029] 瑞氏乳酸杆菌菌株可W是瑞氏乳酸杆菌Lr24。在一个具体的实施例中，该瑞氏乳 酸杆菌菌株是于2011年10月27日W检索号V11/022947保藏在澳大利亚国家计量研究院的 瑞氏乳酸杆菌Lr24。
[0030] 玉米乳酸杆菌菌株可W是玉米乳酸杆菌Lz26。在一个具体的实施例中，该玉米乳 酸杆菌菌株是于2011年10月27日W检索号V11/022948保藏在澳大利亚国家计量研究院的 玉米乳酸杆菌Lz26。
[0031 ] 该组合物可进一步包含法伯尔醋酸菌(Acetobacter fabarum)的一种菌株。该法 伯尔醋酸菌菌株可W是法伯尔醋酸菌Afl5。在一个具体的实施例中，该法伯尔醋酸菌菌株 是于2011年10月27日W检索号V11/022943保藏在澳大利亚国家计量研究院的法伯尔醋酸 菌Af15。
[0032]该组合物可进一步包含一种酵母。该酵母可W是嗜酒假丝酵母的一种菌株。该嗜 酒假丝酵母菌株可W是嗜酒假丝酵母Ce31。在一个具体的实施例中，该嗜酒假丝酵母菌株 是于2011年10月27日W检索号V11/022944保藏在澳大利亚国家计量研究院的嗜酒假丝酵 母Ce31。
[0033] 该组合物可包含两种或更多种所述乳酸杆菌物种、=种所述乳酸杆菌物种或所有 的所述乳酸杆菌物种。该组合物可表示两种或更多种或=种或更多种所述乳酸杆菌物种的 一个共生组合。
[0034] 该组合物中的菌株中的一种或多种可W是胶囊化的。在多种菌株被胶囊化的情况 下，运些菌株可W是各自胶囊化的或组合在一个单一胶囊中。
[0035] 组合物可进一步包含一种或多种抗微生物剂。
[0036] 该受试者可W是一种植物或一种动物。在具体的示例性实施例中，该受试者是一 种植物。例如，该植物可W是一种农作物物种、一种园艺作物物种或一种用于燃料或制药生 产的作物物种。在另一个示例性实施例中，该受试者是一种非人动物，如一种产乳哺乳动物 (例如一种母牛或山羊）。
[0037] 该微生物病原体可W是一种植物病害或动物病害的致病物。在示例性实施例中， 该病害可选自腐烂症、萎黨病、诱病、斑病、枯萎病、溃瘍病、白粉病、霉病、菌瘦、疮挪病或乳 腺炎。
[0038] 微生物病原体可W是一种真菌或细菌。
[0039] 在一个示例性实施例中，真菌可W选自一种镶抱属(Fusarium sp.)、一种假尾抱 菌属(Pseudocercospora sp)、一种单胞瓶霉属(Phialemonium sp)、一种葡萄抱属或一种 丝核菌属（Rhi ZOCtonia SP )。该镶抱属可W是尖抱镶抱菌，如姜专化型尖抱镶抱菌 (Fusarium oxysporum f . sp . z in邑iberi )、西瓜专化型尖抱镶抱菌（Fusarium oxysporumf. SP.niveum)或古己专化型尖抱镶抱菌（Fusarium oxysporum f. SP. cubense)。 假尾抱菌属可W是马卡假尾抱(Pseudocercospora macadamiae)。单胞瓶霉属可W是两型 抱瓶霉属真菌(陆ialemonium dimo巧hosporum)。葡萄抱属可W是灰葡萄抱菌。丝核菌属可 W是立枯丝核菌(化izoctoniasolani)。有经验的受理人员将了解运列表是无穷尽的。另外 的适合的真菌物种被披露在下文。
[0040] 细菌可W是革兰氏阳性或革兰氏阴性的。在一个示例性实施例中，细菌可W是一 种链霉菌属、一种葡萄球菌属（Staphy Io CO ecus sp .)、一种埃希氏菌属化scherichia sp.)、一种假单胞菌属（Pseudomonas sp.)、一种泛菌属（Pantoea sp.)或一种链球菌属 (S化eptococcus sp.)。该链霉菌属可W是疮挪病链霉菌。该葡萄球菌属可W是金黄色葡萄 球菌（Sl:a地yIococcus aureus)。该链球菌属可W是乳房链球菌（S.uberis)。该埃希氏菌属 可W是大肠杆菌巧scherichia COli)。该假单胞菌属可W是油橄揽假单胞菌(Pseudomonas savas化ni)。该泛菌属可W是成团泛菌(Pmantoea aggloerons)。有经验的受理人员将了解 运列表是无穷尽的。另外的适合的细菌物种被披露在下文。 附图简要说明
[0041] 参考W下附图，在此仅通过非限制性举例的方式描述了本披露的方面和实施例。
[0042] 图1.在如实例3中所描述处理=周后，西瓜植株的根高度、植株高度W及植株重 量。对每个参数，多个条从左到右代表来自实验A、B、C W及D的西瓜幼苗。 详细说明
[0043] 除非另外定义，否则在此所使用的所有技术和科学术语具有与本披露所属领域的 那些普通技术人员通常所理解相同的含义。虽然类似或等效于在此所描述的那些方法和材 料的任何方法和材料可W用于本披露的实践或测试，但描述了典型的方法和材料。
[0044] 在此使用的冠词"一个"和"一种"指的是一个/种或多于一个/种（即，至少一个/ 种)该冠词的语法宾语。通过举例，"一个元件"意指一个元件或多于一个元件。
[0045] 在本说明书的背景下，术语"约"应理解为指的是一系列数目，本领域的技术人员 认为该一系列数目相当于在实现相同功能或结果的情况下引用的值。
[0046] 贯穿本说明书及其后的权利要求书，除非上下文另有要求，否则词语"包括 (comprise)" W及变型如"包括(comprises)"或"包括（comprising)"应当被理解成是指包 含一个提及的整体或步骤或者多个整体或步骤的组，但不排除任何其他整体或步骤或者多 个整体或步骤的组。
[0047] 如在此所使用，术语"抗微生物剂"指的是单独或与另一种试剂组合能够杀死一种 或多种微生物物种或抑制该一种或多种微生物物种的生长的任何试剂。抗微生物剂包括但 不限于抗生素、去污剂、表面活性剂、诱导氧化应激反应的试剂、细菌素和抗微生物酶（例 如，脂肪酶、链霉蛋白酶W及裂解酶)和各种其他蛋白水解酶和核酸酶、肤W及隧菌体。提及 抗微生物剂包括提及天然和合成抗微生物剂两者。
[0048] 如在此所使用，术语"暴露"意指大体使与…相接