宜肝乐片在制备抑制喉表皮样癌细胞HEp-2细胞增殖药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种宜肝乐片在制备抑制喉表皮样癌细胞 HEp-2细胞增殖药物中的应用及宜肝乐片的制备方法。
【背景技术】
[0002] 宜肝乐颗粒标准号WS-10148(ZD-0148)-2002,记载于国家中成药标准汇编内科肝 胆分册。由鸡矢藤200g、虎杖160g、马鞭草200g、六月雪200g、马兰草200g、茅莓200g、吉祥草 170g、功劳木100g、冷水花70g作为原料药制成，具有清热解毒，利胆退黄的功效。用于肝胆 湿热所致的急慢性乙型肝炎。
[0003] 现有技术中，尚未有宜肝乐片在在制备抑制人喉表皮样癌细胞HEp-2细胞增殖药 物中的应用的报道，也未见有宜肝乐片提取制备方面采用超临界萃取的报道，而传统水煎 煮、乙醇回流提取的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影 响了本品在临床上应用。
【发明内容】
[0004] 发明目的:本发明的目的在于提供一种宜肝乐片在制备抑制喉表皮样癌细胞HEp-2细胞增殖药物中的应用。
[0005] 本发明的另一个目的在于提供一种宜肝乐片的制备方法。
[0006] 本发明的目的是通过如下的方案实现的： 宜肝乐片在制备抑制喉表皮样癌细胞HEp-2细胞增殖药物中的应用，所述宜肝乐片由 鸡矢藤200g、虎杖160g、马鞭草200g、六月雪200g、马兰草200g、茅莓200g、吉祥草170g、功劳 木100g、冷水花70g作为原料药制成，所述宜肝乐片的制备方法包括如下步骤：取鸡矢藤 200g、虎杖160g、马鞭草200g、六月雪200g、马兰草200g、茅莓200g、吉祥草170g、功劳木 100g、冷水花70g，加入到C0 2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体 积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50°C，C〇2流量l_3ml/g生药· min，萃取时间 700-800min，得超临界萃取物，将超临界萃取物加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成 200片，每片重0.30g。
[0007] 优选的，上述的宜肝乐片在制备抑制喉表皮样癌细胞HEp-2细胞增殖药物中的应 用，所述宜肝乐片的制备方法包括如下步骤:取鸡矢藤200g、虎杖160g、马鞭草200g、六月雪 200g、马兰草200g、茅莓200g、吉祥草170g、功劳木100g、冷水花70g，加入到⑶2超临界萃取 器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力25MPa，温度40 °C，C0 2流量2ml/g生药· min，萃取时间750min，得超临界萃取物，将超临界萃取物加入淀 粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成200片，每片重0.30g。
[0008] 现有技术中，宜肝乐颗粒口服，一次10g，一日3-4次。宜肝乐颗粒服药量大。采用本 发明方法制备成的宜肝乐片每片重〇.30g，每次仅需2片，一日服用3-4次。在具有更多活性 成分的条件下大大减少了服用量。此结论可以通过下述试验证明。
[0009]试验一、不同方法制备的宜肝乐片中大黄素含量的比较 1、仪器及试药本发明宜肝乐片：按实施例1方法制备，使用1500g原料药，经提取制成 200片，每片重0.30g。原宜肝乐颗粒，按照13-10148(20-0148)-2002标准方法制备。 Agi 1 ent 1200高效液相色谱仪;METTLERAE240电子分析天平;大黄素对照品（中国药品生物 制品检定所）。
[0010] 2、方法 照高效液相色谱法(中国药典2015年版第四部凡例十五)测定。
[0011]色谱条件及系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-〇. 1%磷酸 溶液(80:20)为流动相;检测波长为437nm。理论板数按大黄素峰计算应不低于4000。
[0012] 对照品溶液的制备精密称取大黄素对照品适量，加甲醇制成每1ml含50yg的溶 液，即得。
[0013] 本发明的宜肝乐片的供试品溶液的制备取本发明的宜肝乐片5片，研细，取 0.12g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加无水乙醇20ml，超声处理（功率250W，频率25kHZ)l小 时，放冷，滤过，药渣用无水乙醇洗涤4次，每次10ml，合并滤液与洗涤液，蒸干，残渣加稀盐 酸l〇ml使溶解，加氯仿20ml，加热回流30分钟，放冷，移至分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容 器，并入分液漏斗中；分取氯仿液，酸液加氯仿洗涤2次，每次10ml，合并氯仿液，蒸干，残渣 精密加入甲醇l〇ml，称定重量，微热使溶解，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇 匀，滤过，取续滤液，即得。
[0014] 对照产品供试品溶液的制备取本品对照的宜肝乐颗粒20g，研细，取4g，精密称 定，置具塞锥形瓶中，加无水乙醇20ml，超声处理(功率250W，频率25kHZ) 1小时，放冷，滤过， 药渣用无水乙醇洗涤4次，每次10ml，合并滤液与洗涤液，蒸干，残渣加稀盐酸10ml使溶解， 加氯仿20ml，加热回流30分钟，放冷，移至分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并入分液漏斗 中；分取氯仿液，酸液加氯仿洗涤2次，每次10ml，合并氯仿液，蒸干，残渣精密加入甲醇 10ml，称定重量，微热使溶解，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续 滤液，即得。
[0015] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μ1，注入液相色谱仪，测定， 即得。
[0016] 3、结果 结果表明，本发明宜肝乐片中大黄素的含量为0.95-1.86mg/片；而原宜肝乐颗粒中大 黄素的含量为〇.91mg/袋(每袋含颗粒剂10g)，每次服用量2片的大黄素含量为原颗粒剂10g 含量的2-4倍，在服用量减少的情况下，大黄素含量有很大提高。
[0017] 上述研究表明，采用本发明制备方法制备的宜肝乐片，有效成分含量远远高于评5_ 10148 (ZD-0148 ) -2002标准记载的方法制备的宜肝乐颗粒。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合具体实施例对本发明作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解 本发明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述 内容所实现的技术均属于本发明的范围。
[0019] 实施例1 取鸡矢藤200g、虎杖160g、马鞭草200g、六月雪200g、马兰草200g、茅莓200g、吉祥草 170g、功劳木100g、冷水花70g，加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃 取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力25MPa，温度40°C，C0 2流量2ml/g生药· min，萃取时间 750min，得超临界萃取物，将超临界萃取物加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成200 片，每片重0.30g。
[0020]经检测，成品中大黄素的含量为1.85mg/片。
[0021 ] 实施例2 取鸡矢藤200g、虎杖160g、马鞭草200g、六月雪200g、马兰草200g、茅莓200g、吉祥草 170g、功劳木100g、冷水花70g，加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃 取溶剂的体积百分比为4%，萃取压力15MPa，温度30°C，C0 2流量lml/g生药· min，萃取时间 900min，得超临界萃取物，将超临界萃取物加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成200 片，每片重0.30g。
[0022]经检测，成品中大黄素的含量为1.21mg/片。
[0023]