一种纳米靶向载药胶束及其制备方法和一种抗癌药物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物制剂领域，设及一种纳米祀向载药胶束及其制备方法和一种抗癌 药物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 近红外染料（Near-infrared imaging,NIR imaging)是一类波长范围在700- 1000皿的小分子巧光探针，其发射出的巧光有很强的组织穿透性，深度可达4-10皿，且在相 同波段生物体自发巧光弱，因而是目前光学成像中较理想的方法之一同时，在吸收近红外 波段的激光后，能局部产生热量和活性氧成分，因而在探测肿瘤部位的同时实现光热治疗 及光动力治疗。因而，近红外巧光探针极有潜力实现肿瘤的诊疗一体化。
[0003] IR780舰化物是一种新型的近红外屯甲川花菁类巧光探针，具有高量子产率和良 好的光稳定性。其结构比FDA批准的吗I噪菁绿（ICG)更加稳定，同时结构中C1离子的存在使 其易于修饰而增加其祀向及其他功能材料。因而它在未来生物学应用上具有极大的潜力。 但由于IR780舰化物自身结构存在疏水基团，其水溶性很差，因而限制了其临床应用，同时， IR780舰化物的毒性较大，也影响了其生物应用。
【发明内容】
[0004] 为解决上述问题，本发明提供了一种纳米祀向载药胶束，所述纳米祀向载药胶束 包括透明质酸和IR780舰化物，所述透明质酸与所述IR780舰化物通过二硫键连接，所述纳 米祀向载药胶束水溶性较好且毒性较低。另外，本发明还提供了所述纳米祀向载药胶束的 制备方法，制备方法简单易行。
[0005] 第一方面，本发明提供了一种纳米祀向载药胶束，所述纳米祀向载药胶束为核壳 结构，所述内核为IR780舰化物，所述外壳为透明质酸，所述IR780舰化物与所述透明质酸通 过二硫键连接。
[0006] 优选地，所述IR780舰化物和所述透明质酸的摩尔比为2-6:1。
[0007] 优选地，所述纳米祀向载药胶束的粒径为50-200nm。
[000引在运样粒径范围内的所述纳米祀向载药胶束更容易进入细胞内。
[0009] 优选地，所述透明质酸的分子量为10K-100K。
[0010] 优选地，所述纳米祀向载药胶束的剂型为冻干粉针剂或水溶液针剂。
[0011] 可W将所述纳米祀向载药胶束冻干形成冻干粉针剂，也可W所述纳米祀向载药胶 束置于溶剂中形成水溶液针剂。
[0012] 所述纳米祀向载药胶束中所述IR780舰化物与所述透明质酸通过二硫键连接，所 述纳米祀向载药胶束的结构稳定。
[0013] 所述纳米祀向载药胶束包括透明质酸，所述透明质酸可W作为主动祀向因子，与 肿瘤细胞表面的特异性受体CD44结合，进入细胞并在细胞内释放药物。因此，所述纳米祀向 载药胶束祀向性良好。另外，当所述纳米祀向载药胶束进入肿瘤细胞时，肿瘤细胞内的谷脫 甘肤能会还原二硫键从而使二硫键断裂，进而释放IR780舰化物，实现对IR780舰化物在肿 瘤部位的响应型释放。
[0014] 由于透明质酸具有水溶性好、生物相容性高等特点，包裹在IR780舰化物的表面改 善了 IR780舰化物的水溶性，有助于IR780舰化物在生物体内中的应用。同时透明质酸包裹 所述IR780舰化物，可W降低所述IR780舰化物的毒性，另外，透明质酸可生物降解并通过正 常的生理途径吸收或排出体外，不会对生物体造成损害，提高了其生物相容性。
[0015] IR780舰化物作为一种近红外染料，具有良好的光谱特性，能同时实现光声及巧光 的双模成像，也可W对肿瘤进行光热治疗，能够实现肿瘤部位的诊疗一体化。
[0016] 本发明第一方面提供的纳米祀向载药胶束，采用透明质酸为外壳来包覆IR780舰 化物内核，由于透明质酸具有水溶性好、生物相容性高等特点，改善了IR780舰化物的水溶 性，降低其毒性。同时纳米祀向载药胶束中所述IR780舰化物与所述透明质酸通过二硫键连 接，当所述纳米祀向载药胶束进入肿瘤细胞时，肿瘤细胞内的谷脫甘肤能会还原二硫键从 而释放IR780舰化物，实现对IR780舰化物在肿瘤部位的响应型释放。
[0017] 第二方面，本发明提供了一种纳米祀向载药胶束的制备方法，包括W下步骤：
[001引（1)将透明质酸、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酷二亚胺盐酸盐巧DC .肥1)和N- 径基班巧酷亚胺(NHS)混合，室溫下揽拌2-化后加入脫胺，在20-40°C下反应12-2地，得到反 应液，将所述反应液透析后、冻干，制得透明质酸-二硫键-氨基；
[0019] (2)将簇基被活化的氨基酸、IR780舰化物和缚酸剂混合，在60-80°C下反应过夜， 制得含有活化簇基的IR780舰化物；
[0020] (3)将所述含有活化簇基的IR780舰化物与所述透明质酸-二硫键-氨基混合，在 20-40°C下反应12-2地，制得纳米祀向载药胶束;所述纳米祀向载药胶束为核壳结构，所述 内核为IR780舰化物，所述外壳为透明质酸，所述IR780舰化物与所述透明质酸通过二硫键 连接。
[0021] 将所述含有活化簇基的IR780舰化物与所述透明质酸-二硫键-氨基混合，含有活 化簇基的IR780舰化物中的簇基与透明质酸-二硫键-氨基中的氨基发生酷胺化反应，得到 所述纳米祀向载药胶束，所述纳米祀向载药胶束中所述IR780舰化物与所述透明质酸之间 连接有二硫键。
[0022] 优选地，所述透明质酸的分子量为10K-100K。
[0023] 优选地，步骤(1)中，所述透明质酸与所述脫胺的摩尔比为1:2-6。
[0024] 优选地，步骤（1)中，所述透明质酸、所述抓C .肥1和所述NHS的摩尔比为1:2-6:2- 6。
[0025] 优选地，步骤(1)中，将所述反应液透析后、冻干后得到白色固体，所述白色固体为 透明质酸-二硫键-氨基。
[0026] 优选地，步骤(2)中，所述簇基被活化的氨基酸由抓C · HC1和NHS活化氨基酸中的 簇基制得。
[0027] 更优选地，步骤(2)中，所述簇基被活化的氨基酸采用W下方法制得:将氨基酸、 EDC ·肥1和畑S混合，在室溫下揽拌2-化后制得所述簇基被活化的氨基酸。
[002引优选地，步骤(2)中，所述氨基酸、所述邸C ·肥巧日所述N服的摩尔比为1:2-6:2-6。
[0029] 更优选地，步骤(2)中，所述氨基酸为丙氨酸、甘氨酸、谷氨酸或天冬氨酸。
[0030] 优选地，步骤(2)中，所述缚酸剂为Ξ乙胺。
[0031] 优选地，所述Ξ乙胺与所述IR780舰化物的摩尔比是1-3:1。
[0032] 优选地，步骤(2)中，所述簇基被活化的氨基酸与所述IR780舰化物的摩尔比为1- 3:1。
[0033] 优选地，步骤(2)中，反应完全后，将得到的反应液采用硅胶柱层析分离，得到所述 含有活化簇基的IR780舰化物。
[0034] 优选地，步骤(2)中，将所述含有活化簇基的IR780舰化物溶于甲酯胺或二甲基甲 酷胺(DM巧中，得到含有活化簇基的IR780舰化物溶液。
[0035] 优选地，将所述透明质酸-二硫键-氨基溶于甲酯胺或二甲基甲酯胺(DMF)中，得到 透明质酸-二硫键-氨基溶液。
[0036] 优选地，将所述含有活化簇基的IR780舰化物溶液与所述透明质酸-二硫键-氨基 溶液混合，在20-40°C下反应12-24h，制得纳米祀向载药胶束。
[0037] 优选地，步骤(3)中，所述含有活化簇基的IR780舰化物与所述透明质酸-二硫键- 氨基的摩尔比为2-6:1。
[0038] 优选地，步骤(3)中，所述含有活化簇基的IR780舰化物与所述透明质酸-二硫键- 氨基反应后，得到反应液，将所述反应液减压抽滤，除去大颗粒不溶物，得到滤液，将所述滤 液置于纤维素透析袋中，于蒸馈水中透析24小时得到所述纳米祀向载药胶束。
[0039] 优选地，步骤(3)中，制得所述纳米祀向载药胶束后，将所述纳米祀向载药胶束冻 干。
[0040] 本发明制得所述纳米祀向载药胶束后，可W冻干所述纳米祀向载药胶束后得到冻 干粉针剂，或者不冻干，透析后得到水溶液针剂。
[0041 ] 优选地，所述纳米祀向载药胶束的粒径为50-200nm。
[0042] 步骤（1)中，将透明质酸（用HA表示）、抓C ·肥1、N服和脫胺混合，制得透明质酸-二 硫键-氨基(用HA-S-S-N出表示）。步骤(1)的反应方程式如下所示：
[0043]
[0044] 步骤(2)中，氨基酸W丙氨酸为例，将丙氨酸采用抓C ·肥1和NHS活化，得到簇基被 活化的氨基酸;反应方程式如下所示：
[0045]
[0046] 然后将IR780舰化物（用IR780表示）、簇基被活化的氨基酸和缚酸剂混合，制得含 有活化簇基的IR780舰化物(用IR780-NHS表示）；反应方程式如下所示：
[0047]
[004引步骤(3)中，将IR780-NHS与HA-S-S-N也混合，制得纳米祀向载药胶束（用HA-S-S- IR780表示）；反应方程式如下所示：
[0049]
[0050] 本发明第二方面提供的纳米祀向载药胶束的制备方法，条件溫和、制备方法简单， 便于产业化生产。
[0051] 第Ξ方面，本发明提供了一种抗癌药物，包括纳米祀向载药胶束和疏水性药物，所 述纳米祀向载药胶束包括IR780舰化物和透明质酸，所述抗癌药物为核壳结构，所述IR780 舰化物和所述疏水性药物形成内核，所述透明质酸包裹在所述内核的表面形成外壳，所述 IR780舰化物与所述透明质酸通过二硫键连接。
[0052] 优选地，所述纳米祀向载药胶束与所述疏水性药物的质量比为1:0.1-0.2。
[0053] 优选地，所述疏水性药物为阿霉素、紫杉醇和喜树碱中的至少一种。
[0化4] 优选地，所述抗癌药物的粒径为50-200nm。
[0055]所述抗癌药物采用所述纳米祀向载药胶束作为载体，所述疏水性药物与所述 IR780舰化物通过物理作用混合在一起形成内核，透明质酸包裹疏水性药物和所述IR780舰 化物形成核壳结构，透明质酸作为壳增强了疏水性药物的水溶性，同时降低疏水性药物的 毒性，所述抗癌药物生物相容性良好。另外，所述纳米祀向载药胶束的祀向性良好。由于所 述IR780舰化物与所述透明质酸通过二硫键连接，所述抗癌药物在进入肿瘤细胞中后，肿瘤 细胞内的谷脫甘肤能会还原二硫键从而打开壳，释放内核中的IR780舰化物和疏水性药物， 可W实现药物的响应型释放。所述纳米祀向载药胶束中含有IR780舰化物，IR780舰化物可 w与疏水性药物进行协同作用，实现热疗和化疗联合的治疗功能。
[0056] 第四方面，本发明提供了一种抗癌药物的制备方法，包括W下步骤：
[0057] 将纳米祀向载药胶束和疏水性药物溶于有机溶剂中，在20-40°C下反应12-2地，得 到抗癌药物，所述抗癌药物为核壳结