小白菊内酯在制备治疗肺癌药物中的应用
【技术领域】
[0001 ]本发明属于药物化学领域，具体设及小白菊内醋在制备治疗肺癌药物中的应用。
【背景技术】
[0002]肺癌是世界上最常见的，且是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁 最大的恶性肿瘤之一。近年来肺癌的发病率和死亡率均明显增高，究其原因，目前普遍认为 应归结于其具有高局部复发率和高远端转移率的特点，而其恶性程度更是很大程度上因其 高转移率，但目前临床上抑制肿瘤转移，起到治疗作用的药物很少，且伴随着预后差等问 题，急需开发新的治疗药物。
[000引小白菊内醋，是从艾菊内纯化出的一种倍半祗稀内醋化合物。分子式:Cis也003,分 子量:248，性状:无色晶体，其结构如下：
[0005] 小白菊内醋的相关研究，主要用于白血病和神经系统肿瘤的临床前研究中。除炎 性肠病外、类风湿和肾炎都可被其干预治疗，其化学衍生物含笑内醋二甲胺(DMAPT)也进入 神经胶质瘤的临床试验中。
[0006] 但是，小白菊内醋应用于肺癌的治疗及其药理学特征目前尚未报道。本项目研究 首次发现天然产物小白菊内醋，可W通过抑制和逆转肺癌上皮细胞-间充质转变(EMT)的运 一关键过程，抑制肺癌的生长，侵袭和转移，为小白菊内醋在临床上的应用奠定了基础，有 望成为一种新的抑制肺癌转移的药物。
【发明内容】
[0007] 针对目前肺癌发病率高，转移率高，缺乏有效治疗药物的现状，本发明提出了小白 菊内醋(Parthenolide，PT)在制备治疗肺癌药物中的应用。
[000引为达到上述目的，本发明创造的技术方案是运样实现的：
[0009]小白菊内醋在制备治疗肺癌药物中的应用，所述小白菊内醋的结构式为：
[0011]进一步的，所述小白菊内醋在制备治疗肺癌药物中的应用是通过逆转肺癌细胞上 皮细胞-间充质转化，从而抑制肺癌细胞的生长、侵袭或转移。
[0012]进一步的，所述肺癌包括小细胞肺癌及非小细胞肺癌。
[0013] 进一步的，所述治疗肺癌药物包含小白菊内醋或其药学上可接受的盐，水合物或 其组合及辅料。
[0014] 进一步的，所述含有小白菊内醋的肺癌药物可制备成片剂、胶囊、口服液体制剂、 喷雾剂、注射液中的任意一种或两种W上的组合。
[0015] 相对于现有技术，本发明创造所述的小白菊内醋在制备治疗肺癌药物中的应用具 有W下优势：
[0016] 小白菊内醋对肺癌细胞系的增殖、迁移均具有显著的抑制作用，并可通过逆转其 EMT，显著的抑制肺部肿瘤细胞的转移，同时可引发其在胞内凝集而使细胞丧失迁移运动能 力，抑制肿瘤细胞的转移，引发了肿瘤细胞转移的能力的削弱，抑制肿瘤转移的与发展，可 在肺癌治疗上发挥显著成效。
【附图说明】
[0017] 构成本发明创造的一部分的附图用来提供对本发明创造的进一步理解，本发明创 造的示意性实施例及其说明用于解释本发明创造，并不构成对本发明创造的不当限定。在 附图中：
[001引图1示出了小白菊内醋对NCI-H460(A)、NCI-H446(B)和A549(C)细胞增殖的抑制作 用；
[0019] 图2示出了小白菊内醋对NCI-H460(A)、NCI-H446(B)和A549(C)细胞迁移能力的抑 制作用；
[0020] 图3示出了小白菊内醋对S种细胞系上皮标志分子0ccludin、Claudin3和EMA表达 水平的影响；
[0021] 图4示出了小白菊内醋对S种细胞系间充质标志分子N-Ca化erin、VEGFRl和CD31 表达水平的影响；
[0022] 图5示出了小白菊内醋对S种细胞系细胞骨架重排相关的EMT标志分子Viment in 表达水平的影响；
[0023] 图6示出了小白菊内醋对S种细胞系细胞骨架重构的影响；
[0024] 图7示出了小白菊内醋对在荷瘤小鼠肿瘤大小的抑制作用；
[002引图8示出了小白菊内醋对在荷瘤小鼠肿瘤组织中EMT标志分子Occludin、 Claudin3、EMA、N-Ca 化 erin、VEGFRl、CD31 和 Vimentin 表达水平的影响；
[0026] 图9示出了小白菊内醋对在荷瘤小鼠肿瘤截面积坏死区域比例的影响；
[0027] 图10示出了小白菊内醋对在荷瘤小鼠肺转移灶的影响。
【具体实施方式】
[0028] 除非另外说明，本文中所用的术语均具有本领域技术人员常规理解的含义，为了 便于理解本发明，将本文中使用的一些术语进行了下述定义。
[0029] 在说明书和权利要求书中使用的，单数型"一个"和"运个"包括复数参考，除非上 下文另有清楚的表述。例如，术语"(一个)细胞"包括复数的细胞，包括其混合物。
[0030] 所有的数字标识，例如抑、溫度、时间、浓度，包括范围，都是近似值。要了解，虽然 不总是明确的叙述所有的数字标识之前都加上术语"约"。同时也要了解，虽然不总是明确 的叙述，本文中描述的试剂仅仅是示例，其等价物是本领域已知的。
[0031] 本发明提出了小白菊内醋(Parthenolide，PT化制备治疗肺癌药物中的应用。所 述小白菊内醋可W抑制肺癌的生长和转移，且本发明通过具体的实施例：包括MTT实验， 化answel 1、划痕实验、、免疫巧光等细胞及动物实验研究表明小白菊内醋可W逆转肺癌细 胞上皮细胞-间充质转化化MT),从而抑制肺癌细胞(小细胞肺癌及非小细胞肺癌）的侵袭和 转移，能够制备肺癌治疗药物。
[0032] 所述治疗肺癌药物可W包含小白菊内醋或其药学上可接受的盐，水合物或其组合 及辅料。且上述药物可制备成片剂、胶囊、口服液体制剂、喷雾剂、注射液等剂型，作为抗肺 癌方面药物应用于临床。
[0033] 下面结合实施例及附图来详细说明本发明创造。
[0034] 其中，实施例中，所用的试验材料及其来源包括：
[0035] 细胞系:NCI-H446(人小细胞肺癌细胞）、NCI-H460(人大细胞肺癌细胞)和A549(人 肺腺癌细胞系），均购自凯基生物科技发展有限公司（南京，中国）。
[0036] 实验药物与试剂:小白菊内醋，购自上海阿拉下试剂有限公司；抗体Occludin,货 号：ab644 82，购自Abcam公司（剑桥，英国）；EMA，货号：ab 15694了，购自Abcam公司（剑桥，英 国）；N-ca化erin，货号：abl8203，购自Abcam公司（剑桥，英国）；VEGFRl，货号:AF6204，购自 八'門11^7公司；〔034，货号：0。6139，购自4'門11^7公司；(：1曰11(11113，货号：4。0129，购自 Aff inity公司；Vimentin,货号：AF0292,购自Affinity公司；四甲基偶氮挫盐(MTT)，货号： TB0799-lg，膜蛋白酶，货号：T0458-10,购自上海生工生物工程有限公司；RPMI 1640培养 基，货号：18-02E，W及DMEM培养基，货号:07-021，均购自北京钮因华信科技发展有限公司； 胎牛血清FBS化yclone品牌），货号：SV30184.02、细胞培养皿及孔板(Nunc品牌），均购自 Abcam公司（剑桥，英国）；二甲基亚讽(DMSO)，货号：DN3039A，购自美国Sigma公司；羊抗兔 IgG-門TC,货号:KGAA26，购自凯基生物科技发展有限公司（南京，中国）；细胞骨架红色巧光 探针(ActinRed)，货号:KGMP0012，购自凯基生物科技发展有限公司（南京，中国）。
[0037] 实验仪器：培养箱（施都凯仪器，上海）型号：STIK化-161HI;无菌生物安全柜 (Telstar，西班牙）型号：Bio II A;酶标仪(赛默飞世尔，美国）型号:FC 357;光学显微镜 (Nikon,日本）型号：Eclipse Ti;高内涵细胞分析系统（赛默飞世尔，美国）型号：Array Scan VTI;激光共聚焦显微镜(Nikon,日本）型号：Eclipse Ti;全自动组织染色机化eica， 德国）型号:AUT0STAI肥R XL。
[0038] 实施例中的细胞培养条件:细胞需置于37°C、5%C〇2、饱和湿度的条件下培养箱中 培养。若细胞达到80%-90%接触汇合时需进行传代到2-3个装有适量培养基的培养皿中， 继续培养或应用于相应实验中。
[0039] 实施例1小白菊内醋对肺癌细胞系NCI-H446、NCI-H460和A549增殖抑制作用检测
[0040] 实验方法:MTT比色法
[0041] 具体实验步骤为：将细胞接种于96孔培养板上（5X103cells/孔），置于37°C、0)2 (5 % )培养箱中过夜培养。第二天，弃去培养液，分别加入浓度为0，4，祉M小白菊内醋细胞培 养液，并设置不加药物的对照孔。置于37°C、0)2(5%)培养箱培养4她后，每孔加入20化四甲 基偶氮挫盐(MTT)母液(母液浓度为5mg/mL)，继续解育4h。然后将培养液吸出，每孔加入150 化DMSO作溶剂溶解甲琐，溶解后用酶标仪测定490nm处的吸光度，按下式计算细胞存活率： 存活率％ =(实验组OD值-调零孔OD值）/(阴性对照组OD值-调零孔OD值）X 100% ;用 Graphpad Prism 5软件进行IC50值的计算（I巧0值可W用来衡量药物诱导调亡的能力，即 诱导能力越强，该数值越低）。用Excel软件绘制药物对细胞的剂量-响应曲线，各指标均用 均值±标准差来表示。
[0042] 实验结果
[0043] 小白菊内醋对小细胞肺癌NCI-H446、大细胞肺癌NCI-H460和肺腺癌A549均有抑制 作用。如附图 1 所示，NCI-H446、NCI-H460 和 A549 的 IC50 分别为 8.95iiM、16.25iiM