一种枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于天然植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种枣仁挥发油在小鼠毛 发生长中的应用。
【背景技术】
[0002] 率仁(Zizyphus jujube Mill)系鼠李科率属植物率类干燥成熟的种仁，率仁主要 含有枣仁皂苷类、三萜类、脂肪油、蛋白质、留醇类、磷脂类等化合物。现代药理研究表明：枣 仁有补心、镇静、安神、敛汗、补肝、生津等功效，用于虚烦不眠，惊淨多梦，体虚多汗，津伤口 渴等症，是较为常用的镇静安眠药类。始载于《神农本草经》，将其列为上品，《本草纲目》列 为本部类。医籍初见于《伤寒杂病论》，并以枣仁汤而著名，已有1700多年的药用历史。近代 载于历版《中华人民共和国药典》。挥发油是枣仁主要活性成分之一，近年来，枣仁油经研究 表明具有和枣仁皂荚类成分相同的镇静催眠作用，已经逐渐为枣仁的一个重要研究内容。
[0003] 目前枣仁挥发油提取大致为以下几种方法:水蒸气蒸馏法、有机溶剂提取法和超 临界流体萃取法。前两种方法都存在收率低、工艺繁琐、操作条件不稳定等问题，而超临界 CO2流体萃取法是目前新兴的提取分离技术，尤其适合提取热敏性物质，并且既无重金属污 染、无溶剂残留，而且方便运输，提取条件稳定等优点，且在提取过程中加入适量的夹带剂， 可以有效提高目标产物的收率，但是仍旧存在提取出油率较低的问题。
[0004] 目前新疆枣树栽培面积已达700万亩，丰富的红枣资源为枣仁的开发研究提供了 得天独厚的有利条件，红枣加工业已成为新疆林果种植业规模化与农民增收的重要环节； 但是枣仁挥发油的新用途开发较少。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种能够促进小鼠毛发快速生长的枣仁挥发油在小鼠毛 发生长中的应用。
[0006] 本发明是通过如下技术方案实现的：
[0007] -种枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，枣仁挥发油作为促进小鼠毛发生长的 活性成分，灌胃给药和待生发部位涂抹同时进行。
[0008] 上述枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，枣仁挥发油小鼠灌胃给药用量为1-3g/Kg，小鼠待生发部位涂抹以枣仁挥发油为活性成分的外用生发制剂，所述外用生发制剂 由甘油、丙二醇和枣仁挥发油组成，甘油和丙二醇的体积比为3:4-8,所述外用生发制剂中 率仁挥发油的含量为50-100mg/mL。
[0009] 上述枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，所述枣仁挥发油是采用如下步骤制备 得到的：
[0010] (1)枣仁原料的预处理:将枣仁烘干，粉碎过筛，备用;枣仁烘干温度为45-65°C，烘 干时间为15_25h，粉碎过筛后的粉末粒度为50-70目；
[0011] (2)装料:将预处理的枣仁原料加入超临界CO2流体萃取装置的萃取釜中；
[0012] (3)设定萃取釜、分离釜I和分离釜Π 的温度、压力；萃取釜的萃取压力为20-35MPa，萃取温度为35-50°C，静态萃取时间为0.5-lh，动态一次萃取时间为1-2h，动态二次 萃取时间为2_3h;分离釜I的分离压力为8.0-9. OMPa，分离温度为30-40 °C，分离时间为1-3h;分离釜Π 的分离压力为4.9-5.8MPa，分离温度为30-40°C，分离时间为0.5-2h;
[0013] (4)静态萃取:通入一定量的CO2使得萃取釜内升至预定压力，先以溶剂A为夹带剂 进行静态萃取；
[0014] (5)动态一次萃取:调控CO2的流速，再以溶剂A为夹带剂进行动态一次萃取；
[0015] (6)动态二次萃取：调控⑶2的流速，最后加入溶剂B作为夹带剂进行动态二次萃 取；
[0016] (7)将分离釜I和分离釜Π 得到枣仁挥发油合并；
[0017] (8)柱层析分离纯化步骤(7)中得到的枣仁挥发油，除去流动相得到枣仁挥发油纯 品。
[0018] 上述枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，步骤(4)和（5)中：溶剂A为正己烷、乙 酸乙酯和三氯甲烷的一种。
[0019] 上述枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，步骤(6)中：溶剂B为正丁醇、叔丁基甲 基醚或者正丁醇和叔丁基甲基醚的混合物。
[0020] 上述枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，步骤(5)和(6)中：C02的流量均为1.0-1·5L/min〇
[0021] 上述枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，溶剂A的用量为枣仁原料质量的20-30wt%，溶剂B的用量为枣仁原料质量的50-lOOwt%。
[0022]上述枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，在步骤（8)中：a)色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18柱，2 .ImmX 50mm，1.7ym;b)流动相由A相和B相组成：A相为：甲醇，B相为： lmmol/L甲酸铵水溶液;c)梯度洗脱条件:初始时A相与B相体积比为10:1，1分钟时A相与B相 体积比为8:3，3分钟时A相与B相体积比为7:4，6分钟时A相与B相体积比为6:5，9分钟时A相 与B相体积比为5:6，12分钟时A相与B相体积比为4:7，15分钟时A相与B相体积比为3:8，18分 钟时A相与B相体积比为1:10,开始收集时间：lmin，结束收集时间：18min;d)柱温:35°C ;e) 流速:0.6mL/分钟。
[0023] 上述枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，在步骤（1)中还包括将粉碎过筛后的 枣仁原料依次进行碱浸泡、酸浸泡和缓冲溶液浸泡以及晾干步骤;碱浸泡使用的碱溶液是 质量浓度为5_12wt %的碳酸钠溶液，每100g枣仁粉末的碱溶液用量为300-400mL，碱浸泡时 间为5-10h，碱浸泡之后过滤;酸浸泡使用的酸溶液是质量浓度为10-15wt %的盐酸，每100g 枣仁粉末的碱溶液用量为200-300mL，酸浸泡时间为0.5-2h，酸浸泡之后过滤;缓冲溶液浸 泡使用的缓冲溶液是PH=7.2的磷酸缓冲溶液，缓冲溶液浸泡时间为5-10h。
[0024] 本发明的有益效果是:本发明能够促进小鼠毛发快速生长，增大了枣仁挥发油的 药用价值和实用价值，提高了枣仁的利用率，增加了其经济效益。
【具体实施方式】
[0025]枣仁挥发油制备实例 [0026] 实施例1:
[0027] -种枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，包括如下步骤：
[0028] (1)枣仁原料的预处理:在温度为45 °C将枣仁烘干15h，粉碎过筛，粉末粒度为50- 70目，备用；
[0029] (2)装料:将预处理的枣仁原料和溶剂A-起加入超临界CO2流体萃取装置的萃取 釜中；本实施例中溶剂A为正己烷;溶剂A的用量为枣仁原料质量的20wt% ;
[0030] (3)设定萃取釜、分离釜I和分离釜Π 的温度、压力；
[0031] 萃取釜的萃取压力为20MPa，萃取温度为35°C ;分离釜I的分离压力为8 · OMPa，分离 温度为30°C ;分离釜Π 的分离压力为4.9MPa，分离温度为30°C ;
[0032] (4)静态萃取:通入一定量的CO2使得萃取釜内升至步骤(3)中的设定压力，先以溶 剂A为夹带剂进行静态萃取，静态萃取时间为0.5h;
[0033] (5)动态一次萃取:调控⑶2的流量为l.OL/min，再以溶剂A为夹带剂进行动态一次 萃取，动态一次萃取时间为Ih;
[0034] (6)动态二次萃取：调控⑶2的流量为l.OL/min，最后用夹带剂栗向萃取釜中加入 溶剂B作为夹带剂进行动态二次萃取，动态二次萃取时间为2h;溶剂B为正丁醇，溶剂B的用 量为枣仁原料质量的50wt% ;
[0035] (7)在分离釜I中分离时间为Ih，在分离釜Π 中分离时间为0.5h，将分离釜I和分离 釜Π 得到枣仁挥发油合并；
[0036] (8)柱层析分离纯化步骤(7)中得到的枣仁挥发油，a)色谱柱:ACQUITY UPLC BEH C18柱，2. ImmX 50mm, 1.7ym;b)流动相由A相和B相组成:A相为：甲醇，B相为：lmmol/L甲酸铵 水溶液;c)梯度洗脱条件:初始时A相与B相体积比为10:1，1分钟时A相与B相体积比为8:3，3 分钟时A相与B相体积比为7 :4，6分钟时A相与B相体积比为6:5，9分钟时A相与B相体积比为 5:6，12分钟时A相与B相体积比为4: 7，15分钟时A相与B相体积比为3:8，18分钟时A相与B相 体积比为1:10,开始收集时间：lmin，结束收集时间：18min;d)柱温:35°C ;e)流速:0.6mL/分 钟;除去流动相得到枣仁挥发油纯品。
[0037]经称量最终得到枣仁挥发油的质量，得到枣仁挥发油的产率为21.15%。
[0038] 实施例2:
[0039] -种枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，包括如下步骤：
[0040] (1)枣仁原料的预处理:在温度为65 °C将枣仁烘干25h，粉碎过筛，粉末粒度为50-70目，备用；
[0041] (2)装料:将预处理的枣仁原料和溶剂A-起加入超临界CO2流体萃取装置的萃取 釜中；本实施例中溶剂A为乙酸乙酯;溶剂A的用量为枣仁原料质量的30wt% ;
[0042] (3)设定萃取釜、分离釜I和分离釜Π 的温度、压力；
[0043] 萃取釜的萃取压力为35MPa，萃取温度为50°C ;分离釜I的分离压力为9 · OMPa，分离 温度为40°C ;分离釜Π 的分离压力为5.8MPa，分离温度为40°C ;
[0044] (4)静态萃取:通入一定量的CO2使得萃取釜内升至步骤(3)中的设定压力，先以溶 剂A为夹带剂进行静态萃取，静态萃取时间为Ih;