薯蓣皂苷在制备急性胃肠损伤保护药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种中药有效成分的新用途，特别是高纯度薯蓣皂苷在制备急性胃肠损伤保护药物中的应用。
【背景技术】
[0002]现有技术中《薯蓣皂苷在制备肾损伤保护药物中的应用》专利证明了薯蓣皂苷具有肾损伤保护作用，可用于制成肾损伤保护药物;肾器官属于泌尿系统的一部分，主要负责过滤血液中的杂质、维持体液和电解质的平衡，最后产生尿液经由后续管道排出体外，同时也具备内分泌的功能以调节血压;然而胃肠是人体重要的消化器官以及排毒器官，胃的主要功能是受纳和腐熟水谷，肠的主要功能浓缩食物残渣，形成粪便，再通过直肠经肛门排出体外。急性胃肠损伤是消化系统常见的病症，对胃肠损伤做出适当的治疗方案，对减轻患者的伤情，改善预后情况至关重要。因此，近年来对急性胃肠损伤保护药物在不断的研究和开发之中。研究发现中药对急性胃肠损伤具有明显的保护作用，已开发的药物有下列几类。I)黄酮类，如姜黄素等；2)三萜皂苷类，如人参皂苷Rbl、三七皂苷Rl; 3)多酚类物质，如茶多酚、白藜芦醇;4)生物碱类，如山莨菪碱、川芎嗪等。薯蓣皂苷(D1scin)是一种存在于薯蓣科、百合科、豆科等植物中的三蔽阜苷类化合物，其中在穿龙薯截(Discorea nipponicaMakino)中含量较高。现代药理学研究表明薯蓣皂苷具有调节免疫、抗血小板聚集、抗真菌、抗病毒、抗肿瘤和降脂等多种药理作用，它也是合成留体激素类药物的重要原料，并且已作为地奥心血康、维奥欣等降脂药物的主要成分。另外，专利《薯蓣皂苷在制备肾损伤保护药物中的应用》只能证明薯蓣皂苷对肾损伤而引起的尿素氮(BUN)和尿肌酐(SCr)升高具有明显的下调作用，故而具有肾损伤保护作用，可用于制成肾损伤保护药物。但迄今为止，未见薯蓣皂苷在急性胃肠损伤保护及在制备急性胃肠保护药物中应用的相关报道。
【发明内容】
[0003]本发明是发现薯蓣皂苷对急性胃肠损伤具有保护作用，提供一种薯蓣皂苷在制备急性胃肠损伤保护药物中的应用。具体是指薯蓣皂苷在制备急性胃损伤保护药物或急性肠损伤保护药物中的应用。尤其是对缺血再灌注导致的急性胃损伤或缺血再灌注导致的急性肠损伤具有保护作用。
[0004]所述的薯蓣皂苷在制备急性胃肠损伤保护药物中的应用，可以将薯蓣皂苷制备成单一化学成分的药物制剂，或与其他药物合用制备成复方药物制剂。也可以根据药剂学相关要求和临床需要制成各种剂型应用于临床中，如:片剂、胶囊剂、注射剂、口服液体制剂、颗粒剂等。
[0005]本发明的实施例中记载了，薯蓣皂苷在制备急性胃肠损伤保护药物中的应用，具体给药方式为口服给药情况下，其中，小鼠口服薯蓣皂苷(20、40和80mg/kg)以及大鼠口服薯蓣皂苷(15、30和60mg/kg)对急性胃肠损伤具有明显的保护作用，应用在临床上，推算出一个成人(60kg)每日口服约140?550mg(即2.3?9.17mg/kg体重)薯截阜苷对有急性胃肠损伤具有明显地保护作用。
[0006]本发明发现薯蓣皂苷具有急性胃肠损伤保护作用，可用于制成急性胃肠损伤保护药物。MTT和形态学观察证明薯蓣皂苷对体外缺氧复氧损伤的GES-l、Caco-2和IEC-6细胞具有明显地保护作用。同时，薯蓣皂苷对急性胃肠损伤而引起的MDA和MPO升高具有明显的下调作用，对T-SOD和GSH-PX均较模型组的降低具有明显上调作用，均具有剂量依赖性。经薯蓣皂苷干预后，缺血再灌注损伤后的胃黏膜损伤指数升高，胃黏膜糜烂出血，局部腺体结构紊乱，间隙扩大，并有局部胃黏膜细胞脱落等现象明显改善;经薯蓣皂苷干预后，缺血再灌注损伤后的小肠绒毛脱落明显，毛细血管扩张，腺体受损明显，部分可见出血溃疡以及Chui’s评分升高等现象明显改善。根据临床用药需求，可将薯蓣皂苷作为单一有效成分制成药物，也可与其他药物合用制成复方制剂。薯蓣皂苷具有安全(无毒副作用)、有效、经济、实用等优点。
【附图说明】
[0007]图1本发明实施例1薯蓣皂苷对体外缺氧复氧GES-1细胞活力以及细胞形态的影响。
[0008]图2本发明实施例1薯蓣皂苷对缺血再灌注模型大鼠胃黏膜损伤的影响。胃黏膜损伤指数测定结果以局限于胃上皮的点状糜烂、溃疡和出血灶的长度累积计分:正常为O分，损伤< Imm计I分，>lmm并< 2mm计2分，>2mm并< 3mm计3分，余类推。损伤宽度超过Imm时分数加倍。每组大鼠损伤分数的平均值为损伤指数，结果发现高剂量组(薯蓣皂苷60mg/kg)和IPC处理组能够显著降低胃黏膜损伤指数，而与模型组相比，30和15mg/kg的薯蓣皂苷对胃黏膜损伤指数没有显著的影响。
[0009]图3本发明实施例1薯蓣皂苷对缺血再灌注模型大鼠胃组织病理学HE染色的影响。结果显示假手术组大鼠胃病理未见明显改变;模型组胃黏膜有胃黏膜糜烂出血，局部腺体结构紊乱，间隙扩大，并有局部胃黏膜细胞脱落;高剂量薯蓣皂苷组上皮基本完整连续，腺体排列较整齐，胃黏膜充血较轻微，较模型组胃损伤程度有明显改善；与模型组相比，中剂量和低剂量薯蓣皂苷组也能改善这些变化，但是程度都不如高剂量组。
[0010]图4本发明实施例1薯蓣皂苷对缺血再灌注模型大鼠胃氧化应激指标的影响。
[0011]图5本发明实施例2薯蓣皂苷对缺氧复氧Caco-2细胞活力以及细胞形态的影响。
[0012]图6本发明实施例2薯蓣皂苷对缺氧复氧IEC-6细胞活力以及细胞形态的影响。
[0013]图7本发明实施例2薯蓣皂苷对肠缺血再灌注C57BL/6J小鼠和SD大鼠模型组织病理学HE染色的影响。结果显示假手术组可见肠粘膜完整，无出血及炎症现象;C57BL/6J小鼠和SD大鼠的模型组可见绒毛脱落明显，毛细血管扩张，腺体受损明显，部分可见出血溃荡；而给予薯截阜苷(80、40和2011^/1^)处理057131761小鼠后以及薯截阜苷(60、30和1511^/1^)处理SD大鼠后，肠粘膜损伤明显减轻。另外，模型组Chui ’ s评分显著高于假手术组(P〈
0.01)，而与模型组相比，高、中剂量薯蓣皂苷组以及IP0+IPC组评分明显降低，低剂量薯蓣皂苷组的评分没有显著变化。
[0014]图8本发明实施例2薯蓣皂苷对肠缺血再灌注C57BL/6J小鼠和SD大鼠模型生化指标的影响。
【具体实施方式】
[0015]下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
[0016]实施例1薯蓣皂苷对胃缺血再灌注损伤治疗作用的研究
[0017]1.体外细胞模型建立及分组
[0018]体外培养人胃黏膜上皮细胞系(GES-1)，建立胃缺氧复氧损伤(H/R)模型，实验分组:对照组、模型组、不同剂量给药预处理组(薯蓣皂苷6.25、12.5、25、50、100、200、400和800ng/mL)。细胞造模前12h给药组开始给药，模型组和给药组细胞缺氧2h，分别复氧12、24以及48h后，倒置显微镜下观察细胞形态，MTT法检测细胞活力。
[0019]缺氧/复氧模型对GES-1细胞的影响:
[0020]缺氧/复氧损伤后的GES-1细胞活力及其形态见图1，结果表明，与对照组相比，复氧后的模型组细胞活力显著下降，而薯蓣皂苷能够显著抑制这种变化，并且发现薯蓣皂苷的剂量在大于200ng/mL时有显著的细胞毒性，另外，200ng/mL薯蓣皂苷对复氧12h后的细胞模型有着最大的保护作用，因此后续细胞实验采用复氧12h的模型以及200、100以及50ng/mL的剂量。通过倒置显微镜的细胞白照观察到，缺氧复氧模型能够导致GES-1细胞的显微结构受到破坏，细胞固缩，最终脱离板壁;而薯蓣皂苷(200、100和50ng/mL)预处理12h后能够呈剂量依赖性地明显抑制这种变化。
[0021]2.体内动物模型建立及分组
[0022]雄性SD大鼠随机分成6组，每组10只:假手术组、模型组、高剂量给药组(薯蓣皂苷60mg/kg)、中剂量给药组(薯蓣皂苷30mg/kg)、低剂量给药组(薯蓣皂苷15mg/kg)、缺血再灌注预处理组(薯蓣皂苷60mg/kg+IPC组)。
[0023]实验动物术前7天给药组和IPC组开始给药，每天一次，术前24h禁食，自由进水，术前均用10 %水合氯醛溶液(3.5mL/kg)腹腔注射麻醉。模型组和给药组:将动物仰卧固定于手术台上，剪毛，开腹，分离并夹闭胃左、右动脉和胃网膜动脉，30min后去除动脉夹恢复血流；IPC组:按照上述方法采用血管夹进行反复3次夹闭15s、松夹15s作为预处理，随后夹闭动脉30min;假手术组:胃左、右动脉和胃网膜动脉不予夹闭，麻醉及其余手术步骤与模型组相同。再灌注后Ih，快速取胃，观察胃黏膜损伤指数并留取胃组织，放入-80 V冰