一种高载卡巴他赛药物的白蛋白组合物及其制剂和制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物制剂领域。更具体地说，本发明涉及一种高载卡巴他赛药物的白 蛋白组合物及其制剂和制备方法。
【背景技术】
[0002] 卡巴他赛由Sanof i-aventis公司研发，2010年FDA批准其注射液（商品名 Jevtana)上市。适用于与泼尼松联用治疗既往用含多烯紫杉醇治疗方案激素难治的转移 性前列腺癌患者。Jevtana属于紫杉烷类抗肿瘤药物，它通过干扰细胞有丝分裂和分裂间 期细胞功能所必需的微管网络而起抗肿瘤作用。它可与游离的微管蛋白结合，促进微管 蛋白装配成稳定的微管，同时抑制其解聚，导致丧失了正常功能的微管束的产生和微管 的固定，从而抑制细胞的有丝分裂。与其它紫杉烷类药物一样，卡巴他赛的水溶性非常差 (6 μ g/ml)，因此，实践上不能与水介质配制用于静脉内给药。目前，已上市的卡巴他赛注射 液为两瓶装制剂，一瓶制剂为60mg :1. 5ml，含1. 56g Tween 80 ;另一瓶为5. 7ml含13%乙 醇溶液的稀释剂。其主要依靠表面活性剂吐温-80及助溶剂乙醇来达到溶解卡巴他赛的目 的。但因表面活性剂和溶媒易产生不良反应并引起较多的并发症，如严重的过敏反应、体液 潴留等，临床给药时需预先采用药物防止过敏，且输注时间长（通常在1小时以上），这给临 床使用带来极大不便和众多安全性问题。
[0003] 为了解决卡巴他赛注射液毒副作用等缺陷，一个行之有效的方法就是将卡巴他赛 制备成微粒系统，可以延长其体内半衰期，提高靶向性，降低毒副作用。
[0004] 药物新型微粒系统中，白蛋白载药技术随着Abraxane广泛使用已得到认可。 CN102458112A公开紫杉烷类药物白蛋白纳米颗粒组合物，但其包载效率不高，组合物中小 于约25%的白蛋白是以纳米颗粒形式包载，大多白蛋白与药物是以非纳米颗粒形式存在， 大大降低纳米颗粒靶向性，因此使用该技术制备Abraxane产品在组织分布中并未表现非 常好的组织靶向性。CN103393632A也公开卡巴他赛白蛋白组合物，但其组合物载药量低于 12. 5%，大大增大白蛋白人体注入量，相应会带来一定白蛋白使用的副作用，包括寒颤、发 热、颜面潮红、皮疹、恶心呕吐等症状。因此开发高载药白蛋白组合物更易产品安全。
[0005] 白蛋白纳米粒制备新技术逐渐被开发，专利CN1515244A的高压均质法、专利 CN102048695A的蛋白折叠变性复性法等均可有效制备卡巴他赛白蛋白纳米颗粒，但药物卡 巴他赛大多为与白蛋白结合的非纳米颗粒形式存在，大大降低纳米粒的靶向性。本发明通 过研究制备卡巴他赛白蛋白组合物，以纳米颗粒形式存在的载体白蛋白占总白蛋白载体的 重量百分含量大于50%，大大提高使用时的纳米颗粒的靶向性。
【发明内容】
[0006] 针对现有制剂、技术的不足，本发明提供了一种高载卡巴他赛药物的白蛋白组合 物。
[0007] 本发明的组合物中，以白蛋白纳米颗粒和非纳米颗粒形式的载体白蛋白包载卡巴 他赛载药量达13%~25% (重量），优选15%~25% (重量），更优选20%-25% (重量）； 且以纳米颗粒形式存在的载体白蛋白占总白蛋白载体的重量百分含量为50%以上，优选为 80%以上。
[0008] 作为本发明的优选，所述白蛋白为重组白蛋白、动物血清白蛋白或人血清白蛋白， 优选为人血清白蛋白。
[0009] 作为本发明的优选，所述白蛋白纳米颗粒的平均粒径范围为50~200nm，更优选 为 80 ~150nm ;pH 为 5. 0 ~8. 0, Zeta 电位为-10 ~_40mv。
[0010] 作为本发明的优选，组合物中卡巴他赛药物的包封率>80%，更优选包封率 >90 % 〇
[0011] 本发明的组合物能够大大降低了白蛋白辅料的用量，且避免了卡巴他赛注射液中 使用乙醇和吐温80,降低了过敏反应的发生，解决了普通制剂溶血等毒副作用和输注时间 长等问题，同时还延长了卡巴他赛在体内的循环时间，提高了靶向性，降低了毒性，临床使 用更加方便，能够更安全、高效地包载药物并递送药物至病灶从而发挥作用。并且，白蛋白 纳米颗粒的平均粒径不大于200nm，易于除菌过滤，更有利于产业化应用。
[0012] 本发明进一步提供了一种制备上述高载卡巴他赛药物的白蛋白组合物的方法。
[0013] 所述方法是采用均质乳化法制备上述高载卡巴他赛药物的白蛋白组合物。该方法 包括以下步骤：
[0014] 1)将卡巴他赛或其溶剂合物，如，丙酮溶剂合物，溶于有机溶剂，如三氯甲烷、乙 醇、丙酮或其任意组合的混合溶剂中，形成有机相；在有机相中卡巴他赛的浓度为10~ 45mg/ml ；
[0015] 2)将白蛋白分散于水、生理盐水、5%葡萄糖溶液或pH5. 0~8. 0的缓冲液中，形成 水相；在所述水相中，白蛋白的浓度为1~50mg/ml ;
[0016] 3)将步骤1)的有机相与步骤2)的水相混合，将该混合物置于高速剪切机内以 20, 000~40, OOOrpm的转速剪切后转入均质机内，在15, 000~25, OOOpsi的压力下进行均 质，优选至少3个循环，制备得到颗粒平均直径不大于200nm的混悬液，其中卡巴他赛药物 的浓度为〇. 1~6mg/ml，优选0. 5~3mg/ml ;
[0017] 4)将步骤3)所得溶液进行超滤浓缩，优选浓缩2~20倍，即得到卡巴他赛药物的 白蛋白组合物。
[0018] 可选地，本方法还包括：
[0019] 5)将步骤4)中所得的组合物进行过滤除菌，然后冷冻干燥，即制得卡巴他赛蛋白 质药物组合物无菌冷冻干燥制剂。
[0020] 上述经除菌过滤后进行冷冻干燥得到卡巴他赛的蛋白纳米颗粒冻干制剂，其中以 纳米颗粒形式存在的载体白蛋白占总白蛋白载体的重量百分含量在50%以上。由于经过浓 缩后得到的纳米颗粒组合物较浓缩前具有较好的化学稳定性与物理稳定性，因此需经过步 骤4)的浓缩步骤。
[0021] 本发明还提供了另外一种制备上述高载卡巴他赛药物的白蛋白组合物的方法。
[0022] 该方法通过加入蛋白结构展开剂，利用蛋白及多肽结构展开后，将药物包入蛋白 纳米颗粒。
[0023] 所述制备方法包括以下步骤：
[0024] 1)用水、生理盐水、5%葡萄糖溶液或pH5. 0~8. 0缓冲液溶解白蛋白，获得白蛋白 溶液，其中，所述白蛋白的浓度优选为1~50mg/ml ;
[0025] 2)将卡巴他赛或其溶剂合物溶于有机溶剂如乙醇、丙酮或这两种混合溶剂中，形 成有机相；卡巴他赛的浓度为10~45mg/ml ;
[0026] 3)将蛋白结构展开剂添加到步骤1)所得的白蛋白溶液中，进行孵育反应，优选孵 育反应在37~80°C下进行，孵育时间为0. 1~10小时；所述蛋白结构展开剂选自巯基乙 醇、谷胱甘肽、乙酰半胱氨酸、二硫苏糖醇或它们的组合；
[0027] 4)将步骤2)所得有机相加入到步骤3)孵育反应后所得的溶液中，在加入的同时 剪切，剪切的转速为1，〇〇〇~10, OOOrpm，即得卡巴他赛的白蛋白纳米颗粒稀溶液；
[0028] 5)将步骤4)所得的溶液进行超滤浓缩，优选浓缩2~20倍，即可得到卡巴他赛药 物的白蛋白组合物。
[0029] 可选地，本方法还包括：
[0030] 6)将步骤5)中所得的组合物进行过滤除菌，然后冷冻干燥，即制得卡巴他赛药物 的白蛋白组合物的无菌冷冻干燥制剂。
[0031] 由于高压均质机在生产过程中一般处理速度有限，因此其处理速度往往成为生产 产量的限速步骤，因此本方法巧妙地避免了在卡巴他赛白蛋白纳米粒的制备过程中使用高 压均质乳化。本发明人发现在没有使用高压均质乳化的情况下，蛋白纳米颗粒仍然保持了 相当的稳定性，Zeta电位在-10~-30mv之间，室温稳定性可达48小时。<