一种抑制霉菌Gra04生长的纳米银制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于临床医学技术领域，具体涉及一种抑制霉菌Gra04生长的纳米银制剂 及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 曲霉菌是一类条件致病真菌，广泛存在于自然界中，而其中烟曲霉菌更是主要致 病菌，占曲霉80%，是白血病和晚期肿瘤患者严重真菌继发感染病原菌，发病率仅次于白色 念珠菌病。另一方面，由烟曲霉菌引起的急性系统性或播散性感染严重危胁免疫力低下病 人的生命，常预后不良，死亡率高达50 %，甚至100 %。近年来随着侵入性治疗的运用、骨髓 移植、广谱抗生素的滥用等情况，烟曲霉菌感染呈上升趋势。
[0003] 银是一种亮白色金属，它的一个重要特性是能杀灭细菌、真菌和霉菌等微生物。银 离子Ag+、可溶性银化合物、含银的离子交换剂、比表面积极大的胶态银、纳米银等均具有杀 菌作用，其中，银离子Ag+和纳米银对微生物的杀灭效果最好。然而，银离子Ag +在溶液中 不稳定性，而限制了其推广应用。而纳米银比银离子Ag+具有更稳定的物理、化学特性，在 电学、光学和催化等方面具有十分优异的特性。与抗菌药物及其他药物相比，纳米银具有极 大的比表面积，提高了与细菌的亲和力。纳米银具有很强的穿透力，能充分接触并攻击病原 体，从而发挥更强的生物效应，与传统无机抗菌剂效果相比，所具有的强效消毒杀菌功能有 了质的飞跃，具有广谱、强杀菌、作用持久、无过敏、对人体无毒副反应等优点。这种活性极 强且具有超强抗菌能力的纳米银微粒可应用于生活中各种领域。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是克服现有技术的不足而提供一种抑制霉菌Gra04生长的纳米银 制剂及其制备方法，该制剂不仅成本低、稳定性强，而且缓释持久，不易产生耐药性。
[0005] -种抑制霉菌Gra04生长的纳米银制剂，该制剂中纳米银的粒径为10~40nm，纳 米银的浓度为 4. 04X 10 5mol/L ~16. 16X 10 5mol/L。
[0006] 上述纳米银制剂的制备方法，包括以下步骤：
[0007] 步骤1，将NaOH水溶液加至AgNOjK溶液中，搅拌，弃去上清，得到Ag 20沉淀；
[0008] 步骤2,将稀氨水加至步骤1所得Ag20沉淀中，搅拌，得混合液；
[0009] 步骤3,将PVP加至步骤2所得混合液中，搅拌，置于光化学反应仪中反应，离心，所 得沉淀即为纳米银制剂。
[0010] 进一步地，步骤1中NaOH水溶液和AgN03水溶液的浓度均为0. lmol/L，NaOH和 AgOH的摩尔比为1. 2 :1。
[0011] 进一步地，步骤2中稀氨水的质量分数为2%。
[0012] 进一步地，步骤3中PVP的用量相当于AgN03质量的5~9倍。
[0013] 进一步地，步骤3中光化学反应仪的反应条件为500W汞灯、254nm紫外灯，灯管距 离液面高度为9cm。
[0014] 与目前应用在临床上的抗真菌药物相比，本发明的优点在于：
[0015] 1.纳米银具有广谱、强杀菌、作用持久、无过敏、对人体无毒副反应等优点，其对烟 曲霉菌Gra04有较好的杀灭和抑制作用，稳定性强，缓释耐久。
[0016] 2.本发明可以减少烟曲霉菌Gra04的耐药性产生，这对临床上挽救危重病人、治 疗并发症、保护其免疫力等有着重要意义。
【附图说明】
[0017] 图1为纳米银制剂的TEM表征图谱，其中，图a中纳米银制剂粒径为10~15nm、图 b中纳米银制剂粒径为20~25nm、图c中纳米银制剂粒径为30~40nm ;
[0018] 图2为纳米银制剂对Gra04的平板菌落计数法试验结果，其中a为不加纳米银 的对照组，b、c、d图分别对应粒径10~15nm、20~25nm、30~40nm的纳米银，浓度均为 8. 08X 10 5mol/L〇
【具体实施方式】
[0019] 实施例1纳米银制剂对Gra04的平板菌落计数法试验
[0020] 纳米银制剂的制备方法，包括以下步骤：
[0021] 步骤1，将相当于AgN03量1. 2倍（摩尔比）的0· lmol/L的NaOH水溶液滴加到 0. lmol/LAgN(VK溶液中，搅拌形成Ag 20沉淀，静置，倾去上层清液，反复多次；
[0022] 步骤2,用量筒量取质量分数为2%的稀氨水，加至上述Ag20沉淀中，快速搅拌5~ lOmin左右，得到澄清透明的溶液；
[0023] 步骤3，将相当于AgN03质量5倍、7倍、9倍的PVP加入上述溶液中，标记为样品一 (m(Ag_ = 3. 264g)、样品二（m (Ag_ = 19. 04g)、样品三（m (Ag_ = 71. 41g)，混合均匀后，置 于光化学反应仪中，条件为汞灯500W、波长254nm左右的紫外灯下照射lh，灯管距离液面高 度为9cm，得到的三种溶液进行离心，离心后得到浓度为8. 08 X 10 5mol/L，粒径分别为10~ 15nm、20~25nm、30~40nm的纳米银制剂样品一、样品二、样品三。图1为纳米银制剂中 纳米银颗粒的TEM图，其中，纳米银颗粒呈良好的单分散球型，大小均匀，粒径分布窄，不团 聚。
[0024] 平板菌落计数法试验：
[0025] 将收集到的Gra04接种到YAG培养基（0. 5%酵母提取物，2%琼脂，2%葡萄糖，微 量元素），置于37 °C生化培养箱活化2天后，用5~10mL含有0. 002 %吐温80的磷酸盐缓 冲液冲洗平皿表面收集新鲜孢子，计数1〇9个/mL。分别取100 μ L三种不同粒径的纳米银 制剂加到1. 5mL的离心管中，标为样品1、样品2、样品3,对这三个样品分别用无菌水进行 两次对半稀释。取10 μ L计数过的孢子加入到以上不同浓度的纳米银制剂中，置于37°C， 220rpm摇床25min，取10 μ L的混合液加到990 μ L的无菌水中，取100 μ L均匀涂布到固体 培养基中，生长2天后观察、拍照。由图2可知图a空白对照所得培养基中霉菌生长情况 良好，图b、c、d添加了三种不同粒径纳米银制剂所得培养基中均无霉菌生长，说明浓度为 8. 08 X 10 5的三种粒径的纳米银都具有抑菌作用。
[0026] 实施例2同一粒径不同浓度的纳米银制剂对Gra04抑菌率的测定试验
[0027] 纳米银制剂的制备方法，包括以下步骤：
[0028] 步骤1，将相当于AgN03量1· 2倍（摩尔